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保肺定喘汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺动脉JAK/STAT信号传导通路的影响
目的 探讨保肺定喘汤治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的可能作用机制.方法 50只大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组和中西医结合组,每组10只.除正常组外其余各组采用气道滴注脂多糖联合香烟烟雾暴露的方法制备大鼠COPD模型.造模后第29～ 70天中药组给予保肺定喘汤12.4g/(kg·d)灌胃,西药组雾化吸入布地奈德混悬液50 μg/(kg·d),中西医结合组同时予保肺定喘汤灌胃及雾化吸入布地奈德混悬液,正常组、模型组用4ml(kg·d)生理盐水灌胃.干预后对各组大鼠肺小动脉进行Masson染色并检测管壁内胶原纤维及α·平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化,检测血清白细胞介素6(IL-6)含量及大鼠肺动脉磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)和磷酸化信号转导及转录激活因子1(p-STAT1)表达情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠肺小动脉胶原纤维百分比、α-SMA阳性细胞表达显著增加,血清IL-6含量升高,肺动脉p-JAK2和p-STAT1表达显著增加(P＜0.05或P＜0.01).西药组、中药组与中西医结合组肺小动脉胶原纤维百分比、α-SMA阳性细胞表达、血清IL-6含量及肺动脉p-JAK2和p-STAT1表达均较模型组显著减少(P＜0.05或P＜0.01);中西医结合组较中药组p-JAK2表达显著下降(P＜0.05).结论 保肺定喘汤能有效减轻COPD大鼠肺血管重构,其机制可能与抑制JAK/STAT信号传导通路、调节大鼠肺动脉胶原纤维和α-SMA表达有关.
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JAK/STAT通路调节IL-4诱导的肝星状细胞系LX-2Ⅰ型胶原基因的表达
目的 探讨JAK/STAT通路在IL-4对肝星状细胞(HSC)中Ⅰ型胶原基因表达的影响及其作用机制.方法 用RT-PCR法和ELISA法分别检测不同浓度IL-4对人肝星状细胞系LX-2中Ⅰ型胶原mRNA表达和蛋白合成的影响；用Western blot法和RT-PCR法分别观察JAK1抑制剂AG490对IL-4诱导的JAK1磷酸化以及I型胶原mRNA表达的影响；用Western blot法和RT-PCR法分别观察LX-2转染STAT6-ASON对IL-4诱导的STAT6磷酸化以及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.结果 IL-4诱导LX-2中Ⅰ型胶原mRNA表达及其蛋白的合成,呈剂量依赖性效应,且IL-4浓度为50 μg/L时,胶原mRNA和蛋白水平均开始出现显著差异(P＜0.001)；与空白对照组相比,JAK1和STAT6磷酸化水平分别约为4.8倍和4.0倍,Ⅰ型胶原mRNA表达则分别为4.0倍和5.2倍；而AG490和LX-2转染STAT6-ASON则可以分别阻断IL-4诱导的JAK1磷酸化和STAT6磷酸化以及相应的I型胶原mRNA的表达.结论 JAK/STAT信号传导通路参与调节IL-4诱导HSC中I型胶原基因表达,并在肝纤维化发生过程中发挥重要的作用.
关键词： IL-4 肝星状细胞 JAK/STAT信号传导通路 Ⅰ型胶原 -
SOCS超甲基化在经典型慢性骨髓增殖性肿瘤发病中的作用研究
目的探讨细胞因子信号传导抑制蛋白（SOCS）基因超甲基化在经典型慢性骨髓增殖性肿瘤（MPN）发病机制中的作用。方法采用甲基化特异性PCR法检测220例MPN患者骨髓标本中SOCS1、SOCS3基因启动子区CpG岛甲基化发生情况，直接测序法检测MPN患者JAK2V617F、MPLW515L/K基因突变情况。应用粒细胞集落刺激因子化学诱导MPN细胞生长不同时间后，采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测SOCS1、SOCS3 mRNA及其蛋白表达情况。同时，加入去甲基化试剂培养MPN细胞不同时间后，实时定量PCR法检测SOCS1、SOCS3 mRNA表达情况。结果 MPN患者中44例（20.0%）存在SOCS1基因超甲基化，90例（40.9%）存在SOCS3基因超甲基化，156例（70.9%）JAK2V617F突变阳性，3例JAK2V617F未突变的原发性血小板增多症患者检测到MPLW515突变（其中2例为MPLW515L，1例为MPLW515K），2例JAK2V617F未突变原发性骨髓纤维化患者检测到MPLW515L突变；SOCS1、SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比，其SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白表达量明显减少（P＜0.05）；JAK2V617突变组与无突变组相比，其SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白表达量明显减少（P＜0.05）；SOCS1、SOCS3基因超甲基化组，加入去甲基化试剂后SOCS1、SOCS3 mRNA表达量明显升高（P＜0.05）。结论 MPN患者中存在高频率的JAK2V617F基因突变和低频率的MPL基因突变以及SOCS基因启动子区CpG岛超甲基化；SOCS超甲基化和JAK2V617F突变导致SOCSmRNA和蛋白表达水平降低，异常激活JAK/STAT信号传导通路，引起细胞代谢失常而终影响MPN的发生、发展；SOCS超甲基化是一种潜在的MPN诊断生物分子标志物及治疗靶标。
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JAK/STAT途径调节瘦素诱导的肝星状细胞Ⅰ型胶原基因的表达
目的 研究瘦素对肝星状细胞(HSC)α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达和蛋白合成的影响,探讨Janus激酶/信号传导及活化转录因子(JAK/STAT)信号传导通路在瘦素诱导的HSC胶原基因表达过程中的作用.方法 采用RT-PCR法、ELISA法和Western blot法分别检测不同浓度的瘦素对人肝星状细胞株LX-2 α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达、蛋白合成以及JAK1、STAT3磷酸化状态的影响;采用Western blot法和RT-PCR法分别观察JAK1抑制剂AG490对瘦素诱导的JAK1磷酸化和α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达的影响;采用Western blot法分别观察AG490、LX-2转染STAT3反义寡核苷酸(STAT3-ASON)对瘦素诱导的STAT3磷酸化状态的影响;应用RT-PCR法检测LX-2转染STAT3-ASON对瘦素诱导的α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达的影响.结果 瘦素增加LX-2 α1(Ⅰ)型胶原mRNA表达和蛋白合成,呈剂量效应关系,当瘦素浓度为80μg·L-1时达到大值;瘦素促进JAK1、STAT3磷酸化,呈时间效应关系;AG490完全阻断瘦素诱导的JAK1、STAT3磷酸化和α1(Ⅰ)型胶原mRNA的表达;LX-2转染STAT3-ASON阻断瘦素诱导的STAT3磷酸化和α1(Ⅰ)型胶原mRNA的表达.结论 瘦素通过增加HSCα1(Ⅰ)型胶原mRNA表达和蛋白合成而在肝纤维化发生发展过程中发挥重要的作用,JAK/STAT信号传导通路参与并调节该过程,AG490和LX-2转染STAT3-ASON可有效阻滞此传导途径.在人HSC中,活化的JAK1和STAT3信号可作为肝纤维化治疗新的分子靶点.
关键词： 瘦素 肝星状细胞 JAK/STAT信号传导通路 Ⅰ型胶原 -
益肾达络饮对EAE小鼠JAK/STAT信号传导通路的影响
目的 研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 小鼠JAK/STAT信号传导通路的影响.方法 采用免疫蛋白质印迹法测定EAE小鼠脊髓中pSTAT1、pSTAT3蛋白表达的变化.结果 益肾达络饮能改善EAE模型小鼠神经功能评分 (P＜0.05) .与正常对照组相比, 模型组中pSTAT1、pSTAT3的表达显著升高 (P＜0.05), 而与模型组相比, 激素组、益肾达络饮组中pSTAT1、pSTAT3的表达则明显降低 (P＜0.05) .结论 益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能评分, 这种作用与其能够降低JAK/STAT信号转导通路中pSTAT1、pSTAT3的表达有关.
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银屑病患者Jak/STAT信号传导通路基因表达的研究
目的:探讨角质形成细胞Jak/STAT信号传导通路上的STAT1、STAT3、SOCS1、SOCS3 4个相关基因在银屑病发病中的作用.方法:收集10例银屑病患者皮损区和非皮损区组织各一块,用实时荧光定量PCR检测组织角质形成细胞中STAT1、STAT3、SOCS1、SOCS3 mRNA的表达,计算各基因mRNA的相对表达水平,探讨其与银屑病皮损发生的关系.结果:银屑病患者皮损区角质形成细胞STAT1、STAT3、SOCS1、SOCS3基因的mRNA表达水平(△Ct值分别为-1.9±1.6、0.6±1.6、0.1±1.0、-0.6±1.1)较非皮损区(△Ct值分别为1.0±1.6、3.7±1.5、4.2±1.2、3.9±1.3)明显增高(P值均<0.01);银屑病患者中角质形成细胞STAT1 、STAT3 mRNA的表达水平分别与SOCS1和SOCS3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.84、0.83,P值均<0.01).结论:角质形成细胞Jak/STAT信号传导通路相关基因可能与银屑病发病有关,需要进行结构与功能相关性的研究以进一步明确.
关键词： 银屑病 JAK/STAT信号传导通路 基因表达
