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白鹤冲剂对肿瘤坏死因子-α刺激的血管内皮细胞核因子-κB激活的影响
目的:研究白鹤冲剂对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中核因子-κB(NF-κB)活化、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,以探讨白鹤冲剂治疗血管炎的机制.方法:以细胞ELISA法、间接免疫荧光法分别观察白鹤冲剂对HUVEC中NF-κB活化以及ICAM-1表达的影响.结果:白鹤冲剂能抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的HUVEC的NF-κB的活化及ICAM-1表达.结论:白鹤冲剂可能通过抑制NF-κB活化从而有效地调控与炎症过程密切相关的黏附分子的基因表达,发挥治疗血管炎的重要作用.
关键词： 内皮细胞/药物作用 NF-κB/药物作用 @ 白鹤冲剂 -
尿酸利仙含药血清对TNF-α介导内皮细胞增殖的影响
目的:H-细胞水平探讨尿酸利血含药血清对TNF-α介导的内皮细胞增殖的影响.方法:用MTT法测定不同浓度(0～3000u/ml)的肿瘤坏死因子-α对人血管内皮细胞(Endothelial cell of vessels,ECV)增殖的影响和不同浓度(1%～5%)的尿酸利仙含药血清对中浓度(900u/ml)TNF-α介导ECV增殖的作用.结果:与Ou/ml浓度组相比,浓度为900u/ml TNT-α对ECV增殖有促进作用,浓度为3000u/ml TNF-α对ECV增殖有抑制作用,与同一血清浓度的TNF-α组相比,2%、5%含药血清组对中浓度TNF-α介导ECV增殖有抑制作用.结论:尿酸利仙含药血清能降低TNT-α活性,起保护内皮细胞的作用.
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黄芪注射液对糖尿病视网膜病变患者内皮细胞肿瘤坏死因子-α表达的抑制作用
目的 研究中药黄芪注射液对于糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者血清IgG型抗内皮细胞抗体(anti-endothelial cell antibodies,AECA)刺激引起的体外培养内皮细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响.方法 建立三个浓度的抗体组及两个浓度的药物组,以离子交挟层析法纯化DR患者血清IgG型AECA,作用于体外培养的脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC);同时加入中药黄芪注射液,利用对TNF-α高度敏感的WEHI 164.13细胞建立了四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethy thioazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide,MTT]法,测定各组AECA作用HUVEC后产生的TNF-α对细胞的杀伤情况,并检测黄芪对HUVEC的保护作用.结果 加有黄芪的实验组中TNF-α的生成量显著低于空白对照组(P＜0.05),且高浓度黄芪组低于低浓度黄芪组(P＜0.05).结论 中药黄芪注射液对于DR患者血清IgG型AECA作用后引起的体外培养内皮细胞TNF-α表达具有显著抑制作用.
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氨基胍抑制丙酮醛介导的脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤
目的:研究氨基胍对丙酮醛加重脑微血管内皮细胞(HBMEC)缺糖缺氧损伤的保护作用.方法:在培养的HBMEC上,利用丙酮醛加重缺糖缺氧诱导的损伤,通过MTT检测细胞活力,LDH释放检测细胞死亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-blot检测晚期糖基化终产物的形成,观察氨基胍的作用和机制.结果:丙酮醛呈浓度依赖地诱导细胞损伤,在2 mmol/L时细胞的存活率为56.1％,而丙酮醛合并缺糖缺氧后,细胞的损伤率增加到90.0％.氨基胍(l mmol/L)能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导的LDH释放和AnnexinV/PI的形成.进一步研究发现氨基胍能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导晚期糖基化终产物的形成.结论:氨基胍对丙酮醛加重HBMEC的缺糖缺氧损伤具有保护作用,这可能与其抗糖基化作用有关.
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淫羊藿苷对动脉粥样硬化兔动脉内皮细胞损伤的保护作用
目的:研究淫羊藿苷对动脉粥样硬化兔动脉内皮细胞损伤的保护作用.方法:建立兔动脉粥样硬化(AS)模型,将40只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组、模型对照组组、葛根素组、淫羊藿苷组低及高剂量组;正常对照组饲喂普通饲料,模型对照组在普通饲料中加入1%胆固醇及0.02%蛋氨酸,葛根素组高脂饲料喂养的同时给予葛根素每天(100 mg/kg),淫羊藿苷组高脂饲料喂养的同时分别给予淫羊藿苷每天(80 mg/kg ,160 mg/kg) ;饲喂9周后,麻醉后采血,取主动脉上段组织于-80°C保存;全自动生化仪测定各组兔血清总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),ELISA方法检测各组兔血清C反应蛋白(CRP)及兔细胞间黏附分子-1( ICAM-1),HE染色观察兔主动脉病理学改变.结果:与正常对照组相比,模型对照组兔血清TC、LDL-C、CRP、ICAM-1明显升高,差别有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);淫羊藿苷干预组兔血清TC、LDL-C、CRP、ICAM-1明显降低,与模型对照组相比差别有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);组织学结果显示淫羊藿苷对兔主动脉粥样硬化进展有明显的抑制作用.结论:淫羊藿苷对动脉粥样硬化兔动脉内皮细胞损伤有显著的保护作用.
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多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对视网膜血管内皮细胞IGF-1/VEGF信号通路的抑制作用
背景 视网膜新生血管(RNV)是多种眼底血管疾病的共同表现,研究证实胰岛素样生长因子(IGF-1)能够刺激血管内皮细胞的增生,从而促进新生血管的形成,而多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)在IGF-1信号转导的过程中发挥转录抑制的作用.但PSF在RNV形成过程中的作用尚不清楚.目的 研究PSF对IGF-1/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的调控作用.方法 将猕猴视网膜血管内皮细胞RF/6A进行培养后分为Pegfp-C2-PSF质粒转染组、pGenesil-PSF-RNAi质粒转染组及各自的对照组,分别在细胞中转入真核质粒Pegfp-C2-PSF、pGenesil-PSF-RNAi及相应的空白质粒.各组细胞培养液中分别添加或不添加胰岛素样生长因子1(IGF-1)以刺激细胞生长,采用MTT法检测各组RF/6A细胞的增生率并筛选各组适PSF剂量,用于进一步的实验.采用逆转录PCR法测定和比较不同PSF转染组间用或不用U0126处理组间RF/6A细胞中VEGF mRNA的表达;采用Western blot法验证PSF对IGF-1诱导的细胞外调节蛋白激酶(ERK)活化的促进作用.结果 IGF-1刺激后Pegfp-C2-PSF质粒转染组以0.50 μg PSF为适剂量,其RF/6A细胞的增生率为0.220±0.020,细胞中VEGF mRNA相对表达量为0.79±0.07,分别低于其对照组的0.260±0.006和未转染组的1.26±0.19,差异均有统计学意义(P=0.040、0.016);IGF-1刺激后pGenesil-PSF-RNAi质粒转染组以1.00 μg PSF作为适剂量,其RF/6A细胞增生率为0.35±0.02,VEGF mRNA相对表达量为2.29±0.43,分别高于其对照组的0.210±0.019和未转染组的1.26±0.19,差异均有统计学意义(P=0.003、0.019).IGF-1刺激后1、3、6 h Pegfp-C2-PSF质粒转染组细胞中pERK蛋白表达量均明显低于未转染组,差异均有统计学意义(P=0.017、0.000、0.000).Pegfp-C2-PSF质粒转染组U0126+处理后细胞中VEGF mRNA的相对表达量为0.93±0.21,明显低于未转染组的1.32±0.08,差异均有统计学意义(P=0.037),同时明显低于Pegfp-C2-PSF质粒转染组无U0126处理的细胞中VEGF mRNA的相对表达量1.23±0.09,差异有统计学意义(P=0.002).结论 PSF可抑制IGF-1诱导的RF/6A细胞中的ERK信号通路的活化,下调VEGF在RF/6A细胞中的表达,进而抑制RF/6A细胞的增生.
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ADP-核糖基化因子拮抗剂对人视网膜血管内皮细胞形成血管管腔的抑制作用及其机制
背景 研究证实ADP-核糖基化因子(ARF)能促进角膜组织中促血管相关因子的分泌,如血管内皮生长因子(VEGF)和一氧化氮合酶(NOS)等,从而导致病理状态下角膜新生血管的发生,但ARF对人视网膜膜血管内皮细胞(HRECs)管腔形成能力的影响和机制尚不清楚,了解ARF对HRECs形成管腔能力的影响对研究视网膜新生血管相关疾病的靶向治疗具有重要意义.目的 探讨ARF拮抗剂对HRECs管腔形成能力的影响以及其作用机制.方法 对HRECs进行常规培养和传代,取对数生长期细胞分为对照组和ARF拮抗剂组,对照组细胞在实验过程中按常规培养法培养,培养基中不添加ARF拮抗剂,而ARF拮抗剂组细胞在后续实验时于培养液中添加15 μmol/L的ARF拮抗剂1 ml.采用逆转录PCR法和Western blot法检测ARF mRNA及蛋白在HRECs中的表达.应用半固态Matrigel胶体外三维成型法检测对照组和ARF拮抗剂组HRECs形成管腔形态和数目.采用RT-PCR和Western blot法检测VEGF、NOS、局部黏着斑激酶(FAK)、热休克蛋白90(HSP90) mRNA及蛋白在各组HRECs中的相对表达量.结果 逆转录PCR和Western blot法检测显示,对照组和ARF拮抗剂组HRECs中ARF mRNA的相对表达量分别为0.65士0.14和0.32±0.10,对照组和ARF拮抗剂组HRECs中ARF蛋白的相对表达量分别为0.85±0.15和0.24±0.17,ARF拮抗剂组ARFmRNA及其蛋白的相对表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=7.32,P=0.00;t=5.15,P=0.00).对照组和ARF拮抗剂组HRECs形成管腔的数量分别为(51.46±7.12)和(34.66±8.57)个/视野,差异有统计学意义(t=2.99,P=0.04).RT-PCR和Western blot法检测显示,ARF拮抗剂组HRECs中VEGFmRNA和NOS mRNA及蛋白的相对表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=3.02,P=0.04;t=3.68,P=0.02;t=3.33,P=0.03;t=2.89,P=0.04).ARF拮抗剂组HRECs中FAK mRNA和HSP90 mRNA的相对表达量分别为0.65±0.18和0.28±0.05,均明显低于对照组中0.76±0.25和0.46±0.09,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 ARF拮抗剂对HRECs的管腔形成能力有抑制作用,其作用机制可能与下调VEGF、NOS和下游重要信号转导因子FAK、HSP90在HRECs中的表达有关.
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槐耳清膏治疗肝癌的实验研究
目的探讨槐耳清膏对人胎脐静脉内皮细胞的作用,以及其对裸鼠皮下接种肝癌细胞形成肝癌的抑制作用及其可能机制.方法用不同浓度的槐耳清膏作用于人胎脐静脉血管内皮细胞,观察其对细胞的增殖能力、迁移能力、附壁能力及血管生成的影响,同时观察其对裸鼠皮下接种肝癌细胞形成肝癌过程的影响.结果槐耳清膏≥2mg/ml时可显著降低肿瘤组织的血管内皮细胞增殖能力,减少血管形成,抑制血管内皮细胞的迁移、黏附,从而降低微血管密度.槐耳清膏(3g/kg)+MMC(500μg/kg)同时作用于裸鼠的肝癌组织,其抑瘤作用强,后依次为MMC组,槐耳清膏(3 g/kg)组.结论槐耳清膏对肝癌有抑制作用,其可能机制是作用于血管内皮细胞,影响血管内皮细胞的增殖能力、迁移能力、附壁能力及血管生成,从而抑制肝癌组织的血管生成,降低肝癌组织的微血管密度而发挥抑制肝癌生长的作用.
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硫酸镁、硝苯地平片联合丹参注射液对妊娠期高血压患者血液流变学和血管内皮细胞功能的影响
目的 探讨硫酸镁、硝苯地平片联合丹参注射液对妊娠期高血压患者血液流变学和血管内皮细胞功能的影响.方法 将552例妊娠期高血压患者按随机数字表法分2组,每组276例,对照组给予硫酸镁和硝苯地平片,观察组在对照组基础上给予丹参注射液.治疗前后测量两组收缩压(SBP)和舒张压(DBP),同时检测血液流变学指标[全血高切黏度(HBV)、全血低切黏度(LBV)、血浆黏度(PV)、红细胞刚性指数(HGX)、纤维蛋白原(PF)]、内皮细胞功能指标(血清NO、ET-1).结果 治疗后两组SBP、DBP水平显著降低,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.05),观察组SBP、DBP水平明显低于对照组(P＜0.05).治疗后两组HBV、LBV、PV、HGX、PF水平明显低于治疗前(P＜0.05),观察组HBV、LBV、PV、HGX、PF水平明显低于对照组(P＜0.05).治疗后两组血清NO水平显著升高(P＜0.05),且观察组NO水平明显高于对照组(P＜0.05);治疗后两组血清ET-1水平显著降低(P＜0.05),且观察组ET-1水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 硫酸镁、硝苯地平联合丹参注射液片治疗妊娠期高血压疗效确切,可能与改善患者血液流变学及血管内皮细胞功能有关.
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淫羊藿醇提物对内皮细胞释放 NO 的影响
为了了解淫羊藿治疗阳痿的作用机制，采用 Geiess 试剂检测淫羊藿醇提 物及灌服淫羊 藿醇提物小鼠血清对内皮细胞释放 NO 的影响。结果显示：淫羊藿醇提物直接加入内皮细胞 培养液中不影响 NO 产生，120 min，180 min 采集的含淫羊藿醇提物血清能促进 NO 的产 生，效应高峰在 120 min。结果提示：促进内皮细胞释放 NO 可能是淫羊藿治疗阳痿的作用 机制之一。
