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过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响
目的:探讨自噬基因Beclin1对食管癌细胞Eca109生物学行为的影响.方法:运用Beclin 1过表达质粒pIRES2-ZsGreen1-h Beclin1转染食管癌Eca109细胞株,RT-PCR和Westem blot检测Beclin1的mRNA和蛋白的表达;电子显微镜观察转染后自噬体的形成情况;MTT法检测转染前后各组细胞生长曲线的变化;血管形成实验检测其对Eca109细胞株血管形成能力的影响;Transwell小室实验检测其对Eca109细胞株迁移和侵袭能力影响;流式细胞技术检测目的基因组和对照组细胞周期的变化.结果:pIRES2-ZsGreen-hBeclin1质粒成功转染食管癌Eca109细胞株.目的基因组Eca109细胞较空载体组和未转染组生长明显抑制(P=0.000,P=0.000);目的基因组Eca109细胞迁移、侵袭及血管形成能力明显低于对照组(P值均＜0.05);Beclin1稳定表达后,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制.结论:Beclin1基因可以作为食管癌生长及转移的一种抑制基因.
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RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响
目的 探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制.方法 设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 SiGrp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P＜0.05);SiGrp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中.
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食管鳞状细胞癌患者miR-142-5p的表达及其临床意义
目的 探讨miR-142-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其临床意义.方法 选取2014年4-12月来我院外科进行手术的100例ESCC患者癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-142-5p的表达.Eca109细胞分3组:miR-142-5p mimic转染组转染miR-142-5p mimic,阴性对照组转染mimics control,空白对照组不做任何转染操作.Western blot检测各组细胞中TGF-β2蛋白的表达.对所有患者进行至少3年的随访.同时检测ESCC细胞株Eca109和Kyse150及正常人食管上皮细胞株Het-1 a中miR-142-5p的表达.结果 ESCC患者癌组织中的miR-142-5p相对表达量为0.78±0.16,明显低于癌旁组织(1.43±0.34,P＜0.05);ESCC细胞株Eca109、Kyse150中miR-142-5p相对表达量(1.53 ±0.27、1.12±0.31)显著低于正常人食管上皮细胞株Het-1a (2.24±0.68,P＜0.05);miR-142-5p转染组的细胞中TGF-β2蛋白表达较阴性对照组以及空白对照组显著下降(P＜0.05).ESCC癌组织中miR-142-5p表达与淋巴结转移、肿瘤分期以及有无饮酒史存在相关性(P＜0.05);miR-142-5p表达下降的患者疾病进展时间较表达未下降的患者明显缩短(P＜0.05).结论 miR-142-5p参与ESCC的发生,其表达下降与ESCC的侵袭、转移过程相关,并与患者的预后有关.
关键词： 食管鳞状细胞癌 mir-142-5p Eca109 KYSE150 Het-1a -
IL-27基因修饰Eca109细胞的体外体内凋亡作用的研究
目的 研究IL-27基因转染人食管癌Eca109细胞株后在体外和体内对细胞凋亡的影响,从而探讨其抗肿瘤作用及其机制.方法 基因转染的方法 建立稳定表达IL-27基因的人食管癌细胞株(Eca109/IL-27),观察Eca109/IL-27细胞生长情况、移植瘤的生长情况及生存期,用流式细胞技术检测体外和体内的细胞凋亡率和Fas的表达,采用Western blot检测Survivin 的表达.结果 成功建立稳定转染的Eca109/IL-27细胞株,RT-PCR示Eca109/IL-27细胞中有mIL-27 p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达(P＜0.01),IL-27基因转染不影响人食管癌细胞株的体外生长和细胞凋亡,Fas和Survivin的表达无变化(P＞0.05);但体内Eca109/IL-27移植瘤生长较Eca109和Eca109/LXSN滞后,生存时间延长(P＜0.05),肿瘤组织细胞凋亡率增高(P＜0.05),细胞表面Fas的表达增加(P＜0.05),Survivin表达降低(P＜0.05).结论 IL-27在体外不影响细胞凋亡,体内可能通过降低Survivin的表达,上调Fas的表达,诱导细胞凋亡产生抗肿瘤作用.
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不同剂量分割模式照射 Eca109细胞死亡方式与毒性的初步研究
目的：通过模拟不同剂量分割方式照射食管癌细胞 Eca109观察比较各组别细胞死亡方式及细胞毒效应的差异，尝试为临床食管癌非常规分割放疗提供潜在的理论依据。方法：设计具有相同 BED 的4种剂量分割模式：超分割组（1）、常规分割组（2）、大分割组（3）、大分割组（7），照射处于指数生长期的 Eca109细胞后，进行 Hoechst 33258免疫荧光染色观察细胞形态，通过 CCK-8实验绘制细胞存活曲线。结果：Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化：超分割组（1）受照射细胞中54．9％呈“凋亡样坏死”状态；常规分割组（2）50．5％的细胞呈“胀亡样坏死”状态，而30．3％的细胞呈凋亡样坏死状态；大分割组（3）受照射细胞中72．1％呈胀亡样坏死状态，19．2％呈凋亡样坏死状态；大分割组（7）受照射细胞中53．6％呈胀亡样坏死状态，7．1％呈凋亡样坏死状态。CCK-8检测各组细胞吸光度值（OD 值），绘制存活曲线，常规分割组（2）、大分割组（3）与大分割组（7）在模拟照射结束后第1、4、7、10天进行比较，吸光度值均无显著性差异（P ＞0.05）。超分割组（1）在第1、4、10天吸光度值均显著低于其他模拟照射组（P ＜0．05）。在第7天时，各模拟照射组吸光度值均无显著性差异（P ＞0．05）。结论：超分割照射 Eca109细胞大部表现为凋亡样坏死，大分割照射大部分表现为胀亡样坏死。在食管癌的治疗中，超分割放疗较其他剂量分割模式有更好的肿瘤控制率可能与这种死亡方式的差异有关。
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不同剂量分割模式照射Eca109细胞TNF和SODD的表达
目的:通过模拟不同剂量分割方式照射食管癌细胞Eca109,观察比较各组别凋亡相关基因肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)和死亡结构域沉默子(silencer of death domains,SODD)的各组别表达差异并分析原因及意义,尝试为临床实施的非常规放疗提供潜在基础理论依据.方法:设计具有相同BED的4种剂量分割模式,照射处于指数生长期的Eca109细胞后,RT-PCR检测各组TNF mRNA和SODD mRNA表达变化,Western Blot检测各组TNF 蛋白和SODD蛋白表达变化.结果:各组TNF mRNA及蛋白的表达量均数差值比较,有显著性差异;各组SODD mRNA及蛋白的表达均数差值比较,有统计学意义.结论:模拟照射各组中超分割组TNF mRNA表达上调幅度大,SODD mRNA上调幅度亦大.提示在射线诱导肿瘤细胞以某种方式走向死亡过程中,存在着促凋亡基因和抗凋亡基因之间的博弈.模拟照射各组中TNF蛋白和SODD蛋白均大部分下调,提示除DNA是射线的主要损伤靶点外,射线对其他细胞器的损伤作用亦不容忽视,因为它们的功能状态可能影响到蛋白质的合成.
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鱼肝油酸钠对ECA109增殖的影响
目的:探究鱼肝油酸钠对ECA109增殖的影响.实验方法:HE染色观察细胞用药前后形态学变化,MTT法检测细胞增殖抑制率.结果:用药前光镜下正常的ECA109细胞呈梭形,用药后光镜下仅见细胞碎片.MTT法表明浓度越高,对ECA109增殖的抑制率越大.结论:鱼肝油酸钠对ECA109增殖具有影响.
