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rHSG基因调控COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡
目的 采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础.方法 构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24和48 h及3、5和7d后,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测rHSG mRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡.结果 证实重组质粒pEGFP-rHSG构建成功.转染24 h,rHSG mRNA表达量开始增加,7d达到高峰,各转染组间rHSG mRNA表达差异显著(P＜0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组成纤维细胞(P＜0.05);转染后48 h凋亡开始,与模型对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7d时凋亡率达大(P＜0.05).结论 外源性rHSG基因介导,能够使气道成纤维细胞的增殖受到抑制并诱导其凋亡.
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腺病毒介导的rHSG对大鼠迟发性脑血管痉挛作用的实验研究
目的 探讨重组腺病毒介导的大鼠增殖抑制基因(rHSG)对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉(BA)迟发型脑血管痉挛(DCV)的影响.方法 SD大鼠156只随机分为5组:SAH组(A组,36只)、SAH+ Adv-rHSG-GFP组(B组,36只)、SAH+ Adv-GFP组(C组,36只)、假手术组(D组,36只)和正常对照组(E组,12只).采用枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型,假手术组注射等量生理盐水.将重组腺病毒Adv-rHSG-GFP及空载腺病毒Adv-GFP分别转染B、C组大鼠BA.设立4d、7d、10d 3个观测点,HE染色后测量BA内径周长及血管壁厚度,观察血管结构改变；免疫组化染色后检测BA中rHSG蛋白表达；用RT-PCR法检测BA中rHSG mRNA表达.结果 A、C组各时相BA有不同程度的内膜增厚皱折、平滑肌层增厚等增殖性改变.与A组及C组相比,B组7d、10d时BA血管痉挛明显缓解,且rHSG蛋白及mRNA表达明显增强(P＜0.01).结论 rHSG的过表达可以减轻SAH后血管壁的增殖和DCV,为外源性rHSG基因治疗DCV提供了实验依据.
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大鼠增殖抑制基因表达变化与恶性脑胶质瘤生长的关系
目的:探讨大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)表达变化与恶性脑胶质瘤生长之间的关系,为外源性rHSG治疗提供实验依据.方法:采用立体定向法,于尾状核注射C6细胞建立SD大鼠脑胶质瘤动物模型;采用SABC免疫组织化学法检测注射C6细胞后第9、15和21天,脑胶质瘤中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、rHSG及微血管度(microvessel density,MVD)的表达;RT-PCR法检测不同生长期脑胶质瘤中rHSG mRNA的表达.结果:第9、15和21天脑胶质瘤中PCNA标记指数和MVD高于对照组,rHSG蛋白的表达低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);实验组大鼠胶质瘤rHSG mRNA相对表达量分别为(13.53±2.11)%、(10.39±2.71)%和(8.86±1.91)%,低于对照组的(19.94±3.23)%.差异有统计学意义(P<0.05).结论:rHSG表达下调可能与大鼠脑恶性胶质瘤的发生、发展及血管增生有关,rHSG的高表达可能会抑制肿瘤的生长.
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大鼠增殖抑制基因通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖
目的：探究大鼠增殖抑制基因（rHSG）过表达抗C6大鼠胶质瘤细胞增殖的机制。方法：体外培养C6细胞，感染运载 rHSG 基因的腺病毒载体（Adv-rHSG-GFP），倒置显微镜及流式细胞仪分析腺病毒载体感染效率；应用流式细胞仪分析C6细胞周期；Western blot检测细胞rHSG蛋白、抑癌基因P53蛋白、细胞周期调控蛋白P21cip1、磷酸化及非磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白（p-Rb，Rb）表达变化。结果：腺病毒可以高效的将目的基因导入 C6靶细胞；Adv-rHSG-GFP 组 rHSG 蛋白的表达量明显高于 PBS 组和 Adv-GFP 组（P ＜0．01）；rHSG过表达的C6细胞停滞于G0／G1期细胞的数量明显增加（P ＜0．01）； P53、P21cip1蛋白表达量明显增加（P ＜0．01），p-Rb蛋白表达降低（P ＜0．01），Rb蛋白表达无明显变化（P ＞0．05）。结论：rHSG可能通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖。
关键词： 大鼠增殖抑制基因 P53-P21cip1信号途径 细胞周期 胶质瘤 C6细胞 -
rHSG基因对COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡的调控
目的:研究外源性大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道成纤维细胞增殖的影响.方法:采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24、48 h及3、5d和7d后,用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测rHSGmRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡.结果:转染24 h,rHSGmRNA表达量开始增加,高峰在7d时,各转染组间rHSG mRNA表达差别满足(P＜0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组(P＜0.05);转染后48 h凋亡开始,与对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7d时凋亡率达大(P＜0.05).结论:外源性rHSG基因能够抑制气道成纤维细胞增殖诱导其凋亡.
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大鼠增殖抑制基因抑制大鼠胶质瘤细胞的增殖及其机制
目的 观察腺病毒介导的大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)在大鼠胶质瘤细胞(C6)中的表达及其对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用的机制.方法 用含有rHSG基因的重组腺病毒载体(Adv-rHSG-GFP)转染C6细胞,采用Western blot和免疫细胞化学法检测rHSG蛋白的表达；使用流式细胞仪分析细胞周期,并结合MTT、细胞计数法和平板克隆形成实验观察rHSG对细胞增殖的影响；应用Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期调控蛋白p27 Kip1、p21 cip1的蛋白表达变化.结果 Adv-rHSG-GFP转染组C6细胞中:rHSG蛋白的相对表达量均明显高于未转染组和Adv-GFP转染组(P＜0.01)；流式细胞仪分析结果表明细胞周期被阻滞在Go/G1期,且MTT、细胞计数和平板克隆形成实验显示大鼠胶质瘤细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01)；与未转染组和Adv-GFP转染组相比,周期调控蛋白p27kip1、p21Cip1表达升高,PCNA表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 rHSG基因过表达能够抑制大鼠胶质瘤细胞增殖,其机制可能是通过参与细胞周期调节发挥作用.
