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microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化过程中Notch信号分子的表达变化
目的 探讨微小RNA-1对大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响及分化过程中Notch信号分子的表达变化.方法 全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠MSCs并进行流式细胞学鉴定,miR-1慢病毒载体感染大鼠MSCs(MSCsmiR-1)按培养时间将细胞分成4组:对照组、培养4、6和15 d组;光镜下观察细胞形态变化,qPCR检测miR-1及心肌细胞特异性基因GATA-4、c TnⅠ、α-actin表达,免疫荧光检测cTnⅠ表达,Western blot检测α-actin表达;qPCR检测Notch信号通路相关基因的表达变化.结果 原代大鼠MSCs呈长梭形、漩涡状生长,98％以上细胞表达CD44和CD29,不足1％的细胞表达CD45.MSCsmiR-1中miR-1表达水平持续上升,同时伴随心肌特异性基因GATA-4、cTnⅠ和α-actin的表达逐渐增强,感染4d后可见cTnⅠ在部分MSCsmR-1中表达,同时可检测到α-actin在MSCsmiR1中表达;MSCsmiR-1向心肌样细胞分化过程中,Notch信号分子Jagged1、Notch1、Notch3和Hey2表达水平逐渐下调,于15 d时下调幅度大.结论 传导miR-1至大鼠MSCs中可促使其向心肌样细胞的分化;且分化过程中伴随着Notch信号分子Jagged1-Notch1/Notch3-Hey2表达水平下调.
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miR-1和miR-133 a对大鼠肥大心肌细胞L-型钙通道Cavβ2和α1 C亚基的调控作用
目的：研究miR-1和miR-133a在大鼠心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基（ Cavβ2）和α1C亚基的调控作用。方法异丙肾上腺素（ ISO ）诱导大鼠心肌细胞肥大；在线数据库microCosm 和Targetscan 预测miR-1和miR-133a的靶基因；分别构建含有Cavβ23′UTR或α1C 3′UTR的重组质粒，与miR-1或miR-133a共转染HEK293细胞，验证Cavβ2亚基是miR-1的靶基因，α1C亚基是miR-133a的靶基因；用Western blot 法检测心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达；用siRNA干扰Cavβ2和α1C表达，明确Cavβ2和α1C在心肌细胞肥大中的作用。结果1） Cavβ2为miR-1的潜在靶基因，α1C为miR-133a的潜在靶基因。2）分别将miR-1和Cavβ23′UTR，miR-133a和α1C 3′UTR共转染HEK293细胞，荧光素酶荧光值均显著降低（ P＜0.05， P＜0.01）。3）分别转染miR-1 mimic、miR-133 a mimic上调miR-1、miR-133a的表达后，心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达均明显下降（P＜0.01， P＜0.05）。4）用RNAi下调Cavβ2和α1C表达可明显抑制心肌细胞表面积（P＜0.01），ANP和β-MHC mRNA表达增加（P＜0.05）。结论Cavβ2亚基是miR-1的靶基因，α1 C亚基是miR-133 a的靶基因。 miR-1和miR-133 a可能通过负性调控L-型钙通道Cavβ2和α1C蛋白表达，抑制心肌细胞肥大。
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下调microRNA-1对H2O2诱导的心肌细胞损伤的保护作用
目的：研究下调microRNA（miRNA，miR）-1在H2O2诱导的心肌细胞损伤中的保护作用及其机制。方法将大鼠H9c2心肌细胞株分为4组，Blank组、NC组、H2O2组和H2O2+AS-miR-1组。Blank组不做任何处理，NC组细胞转染随机合成的miRNA阴性对照片段；H2O2组和H2O2+AS-miR-1组分别为不转染和转染miR-1 inhibitor（AS-miR-1）的H2O2细胞损伤组。采用定量PCR方法检测各组miR-1表达水平，MTT和流式细胞术检测细胞生存率和凋亡情况，利用生物信息学预测miR-1的靶基因，荧光定量PCR和Western Blot的方法检测靶基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。结果 Blank组和NC组相比较，各个指标差异均无统计学意义。H2O2组细胞的miR-1 mRNA表达水平显著升高，生存率降低，凋亡增加，Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。转染AS-miR-1，可以降低H2O2诱导的心肌细胞损伤，提高细胞生存率，降低细胞凋亡率，上调Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结论下调miR-1表达可以通过升高凋亡抑制因子Bcl-2的表达水平降低H2O2诱导的心肌细胞凋亡，发挥心肌细胞保护作用。
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微小RNA-1在缺氧心肌细胞凋亡中的作用
目的：研究微小RNA（miR）-1在缺氧心肌细胞凋亡中的作用。方法将培养的H9C2心肌细胞分为5组，正常对照组、阴性对照组、H2O2组、miR-1组和H2O2+miR-1组。用实时荧光定量PCR方法证实miR-1转染成功后，MTT法和流式细胞术检测细胞存活率和凋亡情况，用PCR和Western Blot的方法检测抗凋亡因子bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。结果与正常对照组相比，阴性对照组各个指标的变化差异均无统计学意义。其他3组细胞的miR-1表达水平显著升高，细胞存活率下降，凋亡率增加，Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。结论微小RNA-1可通过降低抗凋亡因子Bcl-2的表达水平诱导缺氧心肌细胞的凋亡。
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miR-1在膀胱尿路上皮癌中的表达及其功能
目的 研究miR-1在膀胱尿路上皮癌中的表达和临床意义,探讨miR-1在膀胱癌发病的作用.方法 应用real-time PCR方法分别检测60例配对的新鲜膀胱尿路上皮癌及癌旁正常组织中miR-1的表达,统计分析miR-1表达差异与临床病理因素间的关系,应用CCK8法检测miR-1对膀胱癌T24细胞增殖能力的影响.结果 miR-1在膀胱癌组织较癌旁正常组织中表达水平显著降低,而且肌层浸润性膀胱癌(T2-T4)患者组织中的miR-l表达显著低于非肌层浸润性膀胱癌组织(Ta-T1).miR-1异常低表达与膀胱癌复发或转移、临床分期及病理分级密切相关,miR-1能够抑制膀胱癌T24细胞的增殖能力.结论 miR-1在膀胱癌的发病过程中可能发挥着重要作用,可能成为未来膀胱癌治疗的新靶点及预后预测因子.
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诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA
背景：微小 RNA(miRNA)是一类非编码小分子 RNA，miRNA参与调控基因表达，在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。
目的：验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。
方法：体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞，常氧培养传代至P2；37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h；免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达，免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组：miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组，采用 miRNA 芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异；real-time qPCR方法验证芯片检测结果。
结果与结论：心脏肌成纤维细胞中过表达 miR-1、miR-499后，心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化，与空白对照组相比，其余3组 GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高，Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明，特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物，具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。 -
miR-206/miR-1对乳腺癌干细胞增殖的影响及作用机制
目的：探讨上调microRNA?206（miR?206）和microRNA?1（miR?1）表达对乳腺癌干细胞增殖的影响以及其作用机制。方法采用流式细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF?7中分离出乳腺癌干细胞。实验分为空白对照组、阴性对照组、miR?206转染组、miR?1转染组。除空白对照组外，其他各组分别转染阴性对照mimic、hsa?miR?206 mimic、hsa?miR?1 mimic。应用实时定量PCR检测miR?206、miR?1以及转录因子EVI?1基因的表达水平；Western blot法检测EVI?1蛋白的表达；应用MTT法检测miR?206、miR?1对乳腺癌干细胞增殖能力的影响。结果从MCF?7细胞系中分选出CD44+/CD24-/low乳腺癌干细胞，经无血清培养后可以成功传代，用于后续试验；转染hsa?miR?206 mimic、hsa?miR?1 mimic 48 h后miR?206、miR?1相对表达水平提高，EVI?1 mRNA表达水平明显下降；Western blot、MTT结果显示，上调miR?206和miR?1表达水平后显著降低EVI?1蛋白的表达，抑制了乳腺癌干细胞增殖能力。乳腺癌干细胞中miR?206、miR?1表达水平以及EVI?1蛋白表达水平的差异有统计学意义（P<0.05）。结论上调miR?206和miR?1表达能够抑制乳腺癌干细胞增殖能力，其机制可能与下调EVI?1的表达有关。
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长链非编码RNA HNF1A-AS1靶向has-miR-1对膀胱癌细胞生长和侵袭的调节作用及机制研究
目的:探究长链非编码RNA HNF1A-AS1通过靶向miR-1对膀胱癌细胞增殖和侵袭的作用.方法:荧光定量检测膀胱癌细胞系和正常泌尿道上皮细胞HNF1A-AS1和miR-1的表达情况;分别过表达或沉默HNF1A-AS1和miR-1,荧光定量检测miR-1的表达情况;荧光素酶报告实验确定HNF1A-AS1与miR-1的靶向关系;分别沉默HNF1A-AS1和miR-1,MTT和侵袭实验检测细胞活性和侵袭能力,免疫印迹检测细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达.结果:根据预实验结果选择253J细胞系进行后续实验.HNF1A-AS1过表达可明显抑制miR-1表达(P＜0.05),减弱miR-1 mimic对miR-1表达的促进作用(P＜0.05).沉默HNF1A-AS1可显著促进miR-1表达(P＜0.05),减弱miR-1 inhibitor对miR-1表达的抑制作用(P＜0.05);同时,HNF1A-AS1还可明显减弱带有miR-1片段野生型质粒的荧光素酶活性(P＜0.05);此外,沉默HNF1A-AS1可显著抑制膀胱癌细胞增殖及侵袭(P＜0.05),并且还能显著抑制细胞增殖相关蛋白Ki67、PCNA和侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF的表达(P＜0.05);抑制miR-1表达可明显减弱shRNA对癌细胞增殖和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论:沉默HNF1A-AS1可通过靶向上调miR-1表达减弱膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力.
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Ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910miR-1/Bcl-2表达的影响
目的 探讨Ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910的调控作用.方法 分别将400、500、600、700、800 ng/mLGhrelin与HO-8910细胞一同孵育24 h,MTT法检测Ghrelin对细胞增殖的影响;将600 ng/mL Ghrelin作用于HO-8910细胞0、30、60 min后,定量PCR及Western blot法分别检测Ghrelin对细胞中miR-1以及Bcl-2、Caspase-12表达的影响.结果 600 ng/ mL及以上浓度的Ghrelin作用24 h后,细胞抑制率明显升高,与400 ng/ mL相比,差异有统计学意义(P＜0.05),Ghrelin抑制HO-8910细胞的增殖呈剂量依赖性;miR-1表达升高,Bcl-2表达下降,Caspase-12表达升高,作用30、60 min与O min相比,作用60 min与30 min相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Ghrelin能抑制人卵巢癌细胞株HO-8910增殖,Caspase-12表达的变化提示Ghrelin可能通过miR-1和Bcl-2调控卵巢癌细胞的增殖.
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丹参酮ⅡA调节microRNA-1保护缺氧心肌细胞的作用研究
目的:研究丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA)通过调节microRNA-1抗心肌细胞缺氧损伤的作用.方法:原代培养新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型.MTT法检测心肌细胞存活率(％);TUNEL、流式细胞术测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦检测心肌细胞内钙离子[Ca2+]i浓度的变化情况.结果:MTT结果显示丹参酮ⅡA对缺氧心肌细胞及过表达miR-1引起心肌细胞损伤具有保护作用.丹参酮ⅡA增加了缺氧心肌细胞的存活率(P＜0.05),同时给予丹参酮ⅡA和miR-1组与单独miR-1损伤组相比较,存活率也明显升高,呈现剂量依赖性.TUNEL结果显示丹参酮ⅡA可以抑制缺氧诱导的细胞凋亡,丹参酮ⅡA可以明显降低由缺氧导致的细胞凋亡率(P＜0.05).共聚焦检测结果显示,缺氧损伤的心肌细胞内[Ca2+]i显著升高1322.72±5.16(vs正常对照组,P＜0.05),丹参酮ⅡA则有效抑制由缺氧引起过高的[Ca2+]i.miR-1诱导的细胞内[Ca2+]i升高至1349.33±62.63,约为正常对照组的1.96倍,而丹参酮ⅡA则有效抑制胞内过高的[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用.结论:丹参酮ⅡA可能是通过抑制胞内miR-1的表达,参与对钙离子浓度的调控,发挥其对心肌细胞的保护作用.
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微小核苷酸转基因小鼠导致心脏功能发生改变
本实验室自2006年起,经过3年时间,于2008年成功构建了心肌组织特异表达miR-1、miR-328的转基因模型小鼠,为研究miR-1、miR-328生物学功能及其与心血管疾病发病机制的关系提供了有力的转基因模型.
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MiR-1在肿瘤中的研究进展
微小RNA(microRNA,miRNA)是近几年分子医学领域重要的发现之一.目前,在植物、病毒、动物和人体内已发现有大量miRNA,这些小的、非编码的miRNA调节因子在涉及人类健康和疾病的领域中发挥了关键作用.近,一些研究通过体外实验和动物模型证实miR-1在心脏、骨骼肌以及多种肿瘤进展中扮演了重要的角色并探讨了潜在的分子机制,miR-1有可能成为许多肿瘤的新的治疗靶点.作者就miR-1的基本特征及在肿瘤中发挥的作用作一综述.
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MicroRNA-1对施万细胞增殖的调节作用
目的:探讨microRNA-1(miR-1)对施万细胞增殖的影响及其作用的靶基因.方法:采用Edu染色法检测miR-1对原代培养的施万细胞增殖能力的影响,用双荧光素酶报告基因系统确定miR-1的靶基因.结果:miR-1能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于Edn1基因的3'UTR.结论:miR-1可以直接靶向Edn1的3′UTR,从而通过下调靶基因Edn1的表达抑制施万细胞的增殖.
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神经肌肉电刺激对低O2高CO2大鼠下肢骨骼肌miR-1相关通路的影响
目的:探讨神经肌肉电刺激(NMES)对慢性低O2高CO2大鼠腓肠肌的作用,并研究其对miR-1及相关蛋白通路的影响.方法:成年SD大鼠24只随机分成3组:对照组(NC组)、造模组(HH组)和电刺激组(HE组),每组8只.HH组和HE组大鼠置于低O2高CO2舱内造模,每天持续8 h,共4周.HE组在持续造模2周后,用电刺激仪对大鼠进行30 min,2 Hz和100 Hz,1:1交替循环模式的NMES,维持2周;NC组仅做捆绑及贴电极片处理.动物跑台测定大鼠耐力运动能力,免疫组织化学观察腓肠肌肌纤维类型转变,qRT-PCR检测miR-1水平,Western blot检测腓肠肌核内组蛋白脱乙酰基酶4(HDAC4)、肌细胞促进因子2(MEF-2)和过氧化体增殖物激活型受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白含量的变化.结果:与NC组比,HH组大鼠腓肠肌慢肌纤维比例明显下降,miR-1含量明显升高,HDAC4、MEF2及PGC-1α蛋白含量明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);大鼠耐力运动能力差异无统计学意义(P=0.054);与HH组比,HE组大鼠腓肠肌慢肌纤维比例明显升高,而miR-1含量下降,对应各蛋白含量均出现不同程度升高,大鼠耐力运动能力也得到了改善,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:慢性低O2高CO2可致大鼠腓肠肌慢肌纤维向快肌纤维转变,从而导致运动耐力下降,而NMES可部分逆转这种病理变化,改善大鼠耐力运动能力.miR-1-HDAC4-MEF2-PGCα信号通路可能参与其中.
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急性ST段抬高型心肌梗死患者血浆miR-1、miR-146b的表达及临床意义
目的 探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血浆miR-1、miR-146b的表达及临床意义.方法 选择STEMI患者79例(观察组)和非STEMI胸痛患者59例(对照组),两组性别、年龄、高血压史、糖尿病史、吸烟史构成及BMI、收缩压、舒张压及TC水平比较差异无统计学意义(P均>0.05).检测两组血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTn I)水平以及观察组入院时(T0)、入院12 h(T1)、24 h(T2)、48 h(T3)、7 d(T4)血浆miR-1、miR-146b表达情况.结果 观察组血浆CK-MB、cTnI表达水平高于对照组(P均<0.05).与对照组相比,观察组T0、T1、T2及T3时血浆miR-1、miR-146b表达水平均升高(P均<0.05).观察组在T1时血浆miR-1、miR-146b表达水平高,与其他时间点比较差异有统计学意义(P均<0.05).STEMI患者血浆miR-1、miR-146b表达水平与CK-MB、cTnI水平及冠脉造影评分呈正相关(P均<0.05).结论 STEMI患者血浆miR-1、miR-146b表达水平升高,有望成为STEMI诊断和治疗的新靶点.
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快通道麻醉对行手术治疗先天性心脏病患儿心肌氧化应激损伤及血清miR-1的影响
目的 探讨行手术治疗先天性心脏病患儿采用快通道麻醉(fast-track anesthesia,FTA)对心肌氧化应激损伤及血清miR-1的影响.方法 行手术治疗先天性心脏病患儿120例,随机分为观察组和对照组各60例,对照组采用常规麻醉,观察组采用FTA,比较2组动脉阻断前(T0)及动脉开放后15 min(T1)、30 min(T2)、60 min(T3)、180 min(T4)血清心肌肌钙蛋白Ⅰ (cardiac troponin Ⅰ,cTnI)、miR-1水平,丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Pearson相关法分析观察组血清miR-1水平与血清cTnI、MDA水平及SOD活性的相关性.结果 2组手术时间、体外循环时间、主动脉阻断时间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);观察组T0时血清cTnI[(0.25±0.02)μg/L]、MDA[(4.09±0.87)μmol/L] 、SOD活性[(43.28±9.68) u/mL]及miR-1(0.36±0.05)与对照组[(0.24±0.03)μg/L、(4.15±0.74)μmol/L、(42.76±8.54) u/mL、0.35±0.06]比较差异均无统计学意义(P＞0.05);观察组T1、T2、T3、T4时血清cTnI[(1.89±0.28)、(2.67±0.36)、(3.62±0.48)、(2.76±0.32)μg/L]、MDA[(5.21±0.78)、(6.47±0.95)、(8.23±1.15)、(6.09±0.91) μmol/L]、SOD活性[(52.45±9.36)、(64.73±11.36)、(75.75±11.57)、(59.57±8.74) u/mL]及miR-1水平(2.03±0.13、3.28±0.15、4.03±0.16、3.18±0.13)均低于对照组[cTnI:(2.85±0.30)、(3.35±0.40)、(5.51±0.62)、(4.12±0.55)μg/L;MDA:(6.63±1.06)、(7.94±1.21)、(9.82±1.28)、(7.26±0.98)μmol/L;SOD:(65.21±10.26)、(73.74±9.85)、(84.36±14.79)、(68.64±12.62) u/mL;miR-1:2.95±0.11、4.73±0.14、6.37±0.18、4.63±0.15](P＜0.05),且均高于T0时(P＜0.05);Pearson相关分析结果显示,观察组血清miR-1表达与血清cTnI、MDA含量及SOD活性均呈正相关(r=0.543,P＜0.001;r=0.723,P＜0.001;r=0.639,P＜0.001).结论 miR-1可作为评估先天性心脏病患儿手术中主动脉阻断和开放后心肌损伤和氧化应激程度的血清学标志物;FTA可显著减轻行手术治疗先天性心脏病患儿心肌损伤、氧化应激程度及血清miR-1水平,具有明显的心肌保护作用.
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原发性肝癌患者中血清miR-1的表达及意义
目的 探讨原发性肝癌(PHC)患者血清miR-1的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 采用实时定量PCR检测90例PHC患者及102例健康志愿者血清中miR-1的表达量.结果 PHC组中miR-1表达量[0.210(0.127 ～0.312)]明显低于健康对照组[0.780(0.618～1.121)]及PHC术后7d组[0.540(0.318～0.716)] (P＜0.001).在90例PHC患者中,miR-1表达水平与淋巴结有无转移密切相关,有淋巴结转移患者中miR-1表达水平显著低于无淋巴结转移患者(P=0.003).Kaplan-Meier分析显示miR-1低表达组的生存率远低于其高表达组,其中位生存期(月)分别为25.48和40.98(P＜0.001).Cox多变量分析显示miR-1水平是影响PHC患者生存率的独立危险因素之一,相对危险度为0.424 (95％ CI:0.183 ～ 0.984).结论 血清miR-1作为新的生物学指标对于PHC的诊断和预后的具有一定的价值.
关键词： 原发性肝癌 miR-1 实时荧光定量聚合酶链反应 -
miRNA-1在高血压左心室肥厚诊断中的价值
目的:探讨miRNA-1在高血压左心室肥厚诊断中的价值,为获取心脏疾病相关信息提供新的方法和途径.方法:收集210例入住我院心内科的患者,其中70例为高血压合并左室肥厚组(HBP-LVH组)、70例为高血压不合并左室肥厚组(HBP-NLVH组),以及70例门诊随机选择健康体检者为对照组,所有入选患者完善一般临床资料、常规检查,心脏超声检查测定室间隔厚度(IVSd)与左室后壁厚度(LVPWd).收集血浆后用qRTPCR检测miRNA-1的表达.结果:与对照组和HBP-NLVH组比较,HBP组的IVSd、LVPWd、miRNA-1显著升高,差异具有统计学意义(均P＜0.05).血浆miRNA-1在LVH诊断中的敏感度和特异度分别为94.6％和89.8％.miRNA-1水平与IVSd和LVPWd均表现为正相关,相关系数R分别为0.64和0.66.结论:miRNA-1在高血压左心室肥厚患者的外周循环血浆中特异性高表达,且与左心室肥厚呈正相关,诊断左心室肥厚有很好的敏感度和特异度.
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血清miR-1对急性心肌梗死的诊断价值研究
目的 探讨血清miR-1对急性心肌梗死的诊断价值.方法 选取2013年2月至2016年12月该院急诊就诊的胸痛患者148例,根据急性心肌梗死诊断标准将其分为心梗组(82例)和非心梗组(66例),并选取同期健康体检者74例作为健康对照组,检测3组血清miR-1、心肌肌钙蛋白I(cT nI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,分析心梗组中miR-1水平与cTnI、CK-MB水平的相关性,以及miR-1、cTnI、CK-MB诊断急性心肌梗死的灵敏度和特异度.结果 心梗组血清miR-1、cTnI、CK-MB水平明显高于非心梗组和健康对照组,而非心梗组血清miR-1、cTnI、CK-MB水平高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);心梗组中,miR-1水平与cTnI、CK-MB水平呈正相关(r值分别为0.733、0.779,P<0.05);受试者工作特征曲线分析显示,miR-1早期诊断急性心肌梗死的灵敏度和特异度分别为90.57% 和97.53%.结论 miR-1可以作为早期诊断急性心肌梗死和评估其严重程度的新指标,且灵敏度较cTnI和CK-MB高.
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大鼠miR-1慢病毒表达载体的构建与鉴定
目的 构建并鉴定大鼠miR-1慢病毒过表达系统.方法 采用EcoRⅠ酶双酶切将目的 基因从合成载体上酶切后连接入EcoRⅠ线性化慢病毒载体,连接产物转化后进行阳性克隆鉴定.成功构建的miR-1重组质粒与慢病毒辅助包装质粒及Lipofectamine 2000共转染293T细胞,产生慢病毒浓缩液并标定病毒滴度.重组慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),观察转染效率及miR-1表达水平.结果 测序结果显示目的 基因与Genebank序列完全一致;孔稀释法检测病毒滴度为3×108 TU/μL;以感染复数(MOI)50感染大鼠MSCs,感染效率达90%以上,聚合酶链反应显示miR-1高水平表达.结论 成功构建大鼠miR-1慢病毒表达载体并可高效转染大鼠MSCs,为进一步研究miR-1基因的相关功能提供了合适的载体.
