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丙氨酰-谷氨酰胺二肽诱导热休克蛋白70对大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的影响
目的 探讨丙氨酰-谷氨酰胺二肽(Ala-Gln)诱导热休克蛋白70(HSP70)对大鼠梗阻性肾病模型(UUO)肾间质纤维化的影响及机制.方法 20只Wistar大鼠随机分成4组:假手术组、UUO模型组、GLN治疗组和QUE组,每组5只.从建立UUO模型前1 d开始,GLN治疗组和QUE组分别按剂量1.125 g/kg给予Ala-Gln溶液(Ala-Gln+0.9% NaC1液配成浓度为3% 的溶液)腹腔注射,假手术组和UUO模型给予相应剂量0.9% NaC1液腹腔注射,QUE组提前6h腹腔注射给予栎黄皮桐(quercetin)一种热休克蛋白阻滞剂,剂量400 mg/kg,每天1次.术后第7天处死大鼠.常规HE染色及Masson染色观察肾间质纤维化情况.Western印迹检测肾脏HSP70的表达水平.免疫组织化学染色检测肾脏NF-κb、a-SMA的表达水平.结果 GLN治疗组Ala-Gln能诱导大鼠肾脏特异性高表达热休克蛋白70(HSP70),其他3组大鼠肾脏HSP70均呈低表达.与UUO模型组、QUE组相比,GLN治疗组肾脏NF-κB、a-SMA的表达水平明显降低,肾小管损伤和肾间质纤维化的程度明显减轻[肾小管损害百分比(26.2%±1.6%比78.4%±3.5%、80.2%±3.3%)和肾间质损害分值(1.32±0.08、3.67±0.22、3.70±0.20),P<0.05].结论 Ala-Gln可通过诱导HSP70高表达,延缓大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的进程,其机制可能与HSP70下调NF-κB及α-SMA表达,抑制肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT)有关.
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诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA
背景：微小 RNA(miRNA)是一类非编码小分子 RNA，miRNA参与调控基因表达，在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。
目的：验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。
方法：体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞，常氧培养传代至P2；37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h；免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达，免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组：miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组，采用 miRNA 芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异；real-time qPCR方法验证芯片检测结果。
结果与结论：心脏肌成纤维细胞中过表达 miR-1、miR-499后，心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化，与空白对照组相比，其余3组 GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高，Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明，特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物，具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。 -
急性胰腺炎大鼠胰腺星形细胞激活与纤维化改变的研究
目的检测急性胰腺炎早期转化生长因子-β1(TGF-β1)信使RNA的表达,Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ)以及α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)的生成,探讨胰腺星形细胞在胰腺炎早期纤维化启动中的作用及其意义.方法采用阻断胰腺导管同时腹腔注射雨蛙素(50μg·kg-1·d-1)的方法诱导急性胰腺炎大鼠模型,假手术组施行开腹手术并腹腔注射生理盐水.分别于0、72、120h处死大鼠,取完整胰腺组织用免疫组化方法检测Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,再以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA的表达情况.结果假手术组大鼠胰腺组织胰腺星形细胞染色偶尔阳性,实质无明显改变,胶原染色阴性,TGF-β1mRNA无表达.模型72 h组胰腺炎症改变,Collagen-Ⅰ、α-SMA检测表现胰腺间质以及腺泡周围的黄染,涉及广泛,深浅不一,较正常组变化明显;TGF-β1mRNA表达明显增强.模型120h组,光镜检查炎症表现更甚,间质组织增生.Collagen-Ⅰ、α-SMA表现也呈进行性进展,TGF-β1mRNA表达比较72h模型组略有降低.结论研究表明,在急性胰腺炎早期即出现TGF-β1的激活,并刺激胰腺星形细胞(α-SMA阳性细胞)激活、增生,并使Collagen-Ⅰ逐渐生成沉积,提示胰腺的纤维化进程的启动,且随时间延长胰腺星形细胞激活逐渐增多,相关纤维化组分沉积增加.
