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益气温阳活血化痰方对大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压的干预作用
目的 研究益气温阳活血化痰方(Yiqi Wenyang Huoxue Huatan Formula,YＷHHF)对大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压的干预作用及机制研究.方法 将50只SD大鼠随机分为5组:常氧对照(N)组、低氧高二氧化碳(HH)组、YWHHF高剂量(YH)组、YWHHF中剂量(YM)组、YWHHF低剂量(YL)组,每组10只.除N组置于仓外,其余各组均置于常压低氧高二氧化碳氧仓中,每天8h,每周6天,持续4周.YH、YM及YL组在进仓前0.5h分别予益气温阳活血化痰方0.6、0.3、0.15 g/kg灌胃,其余各组大鼠分别用等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃4周.采用右心导管法测量大鼠的肺动脉平均压(mPAP)、颈动脉平均压(mCAP)及右心室肥大指数(RVHI);光镜、电镜观察大鼠肺动脉形态学变化,测定肺动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)和管腔面积/管总面积(LA/TA)的比值;采用RT-PCR、Western blot分别检测大鼠内质网应激相关蛋白及mRNA(GRP78、CHOP、JNK、Caspase-12)的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测各组肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数(AI).结果 与N组比较,HH组mPAP、RVHI和WA/TA值增大,LA/TA减小(均P＜0.01),ERS相关蛋白及mRNA(GRP78、JNK、Caspase-12、CHOP)表达量均升高(P＜0.01),肺动脉平滑肌细胞AI减少(P＜0.01);与HH组比较,YH、YM、YL组mPAP、RVHI及WA/TA值减小,LA/TA增大(P ＜0.05,P＜0.01),ERS相关蛋白及mRNA表达量降低(P ＜0.05,P＜0.01),YH组及YM组肺动脉平滑肌细胞AI增加(P ＜0.05,P＜0.01)RVHI;与YL组比较,YH、YM组上述各项指标均有明显改善(P＜0.05,P＜0.01).结论 YWHHF可通过抑制JNK、Caspase-12、CHOP降低大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压,综合考虑以中剂量(0.3 g/kg)效果适宜.
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可溶性鸟苷酸环化酶表达变化在低氧高二氧化碳大鼠肺血管结构重建中的作用
一氧化氮(NO)在肺血管张力调节及结构重建的调控中起着重要作用.可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylate cyclase,sGC)是介导NO信息调控的关键酶,它由α、β两亚基共同组成的异源二聚体,肺组织主要同时表达α1和β1亚基.对离体低氧大鼠肺的研究表明,抑制sGC酶活性能促进低氧性肺血管收缩[1].慢性阻塞性肺疾病等呼气流量限制性呼吸系统疾病并发肺动脉高压的形成与发展不仅存在肺动脉血管收缩,而且表现肺血管结构的重建.我们复制与慢性阻塞性肺疾病的病理生理改变相似的低氧高二氧化碳大鼠模型,观察肺组织sGC基因表达及其酶活性的变化,结合肺血管显微、超微结构检查,旨在探讨sGC变化在低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠肺血管结构重建中的作用.
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低O2高CO2肺动脉高压及川芎嗪保护的大鼠血浆抗凝血酶-Ⅲ变化及意义
应用低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型,观察了不同时间低O2高CO2及川芎嗪保护血浆抗凝血酶-Ⅲ活性(AT-Ⅲ:C)、平均肺动脉压(mPAP)、右心室重量(RV/100gBW,RV/TV)的变化.结果显示,随低O2高CO2时间的延长,mPAP逐渐升高,AT-Ⅲ:C逐渐降低,两者呈良好负相关(r=-0.864,P＜0.001),2实验组的RV/100 g BW和RV/TV均高于对照组(P＜0.01或P＜0.001).血浆AT-Ⅲ活性与RV/100 g BW呈良好负相关(r=-0.612 P＜0.001).川芎嗪保护组AT-Ⅲ:C高于非保护组,mPAP,PV/100 g BW,PV/TV低于非保护组.表明慢性常压低O2高CO2肺动脉高压大鼠血浆抗凝血酶-Ⅲ活性降低,与肺动脉高压的形成及右心室肥大有关,川芎嗪能调控并改善它们的升降程度.
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益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞分泌功能的影响
目的 研究益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞分泌功能的影响.方法 建立人肺动脉内皮细胞低氧高二氧化碳模型；制备益肺活血复方不同给药剂量(生药10、20、40 g ·kg-1)的含药血清及生理氯化钠溶液血清；在细胞培养液中共同孵育12 h后,利用免疫组织化学法测定细胞内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,放射免疫分析法测定各组细胞上清液中内皮素-1(ET-1)的浓度,逆转录多聚酶链反应法测定ET-1 mRNA的表达水平.结果 低氧高二氧化碳条件下,人肺动脉内皮细胞ET-1的分泌、HIF-1α蛋白和ET-1 mRNA的表达明显增强(P＜0.05)；而中、高浓度益肺活血复方能够抑制人肺动脉内皮细胞合成分泌HIF-1α、ET-1 mRNA及ET-1(P＜0.05).结论 低氧高二氧化碳导致人肺动脉内皮细胞功能障碍,而中、高浓度的益肺活血复方可减少人肺动脉内皮细胞ET-1的分泌和ET-1 mRNA、HIF-1 α蛋白的表达,从而减轻人肺动脉内皮细胞功能紊乱的程度,益肺活血复方可能成为治疗低氧高二氧化碳性肺动脉高压的有效药物.
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三七皂苷在JNK介导的低氧高二氧化碳性肺动脉高压模型中的机制探讨
目的 研究JNK信号通路在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压(HHPH)发生发展中的动态变化,探讨三七皂苷(PNS)防治HHPH的机制.方法 复制慢性HHPH的SD大鼠模型,分为正常组(N,n=10),低O2高CO2组(H4w,n=10)及PNS治疗组(Hp4w,n=10).RT-qPCR及Westem blot检测JNK mRNA及蛋白表达情况.原代培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取2～5代对数生长期细胞,分为正常组(N)、低O2高CO2组(H)及PNS治疗组(R10、R50、R100),PNS治疗组分别用不同浓度(10、50、100 mg/L)的三七皂苷单体R1进行处理,24 h后收集细胞,RT-qPCR及WestemBlot检测JNK mRNA及蛋白表达情况.然后用R1及JNK抑制剂SP600125分别及联合处理PASMCs 5d,CCK8检测细胞增殖隋况.结果 ①与N组相比,H4w组和Hp4w组mPAP均明显增高(P＜0.05),同时Hp4w组mPAP明显低于H4w组(P＜0.05).②肺组织JNK mRNA在H4w组中表达高,N组低,Hp4w组介于两组之间(均P＜ 0.05);p-JNK蛋白在H4w组较N组高表达(P＜0.05),Up4w组较H4w组下降(P＜0.05).③PASMCs H组JNK mRNA及蛋白表达明显高于N组(P＜0.05),与H组相比,R1(10、50、100 mg/L)不同程度抑制了JNK mRNA及蛋白表达(P＜0.05).④PNS及SP600125处理组PASMCs均出现了明显的增殖受抑(P＜0.05).结论 JNK信号通路参与了大鼠HHPH的形成.PNS可减轻这一过程,其机制可能与PNS抑制JNK的表达与激活有关.
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川芎嗪注射液对慢性阻塞性肺疾病患者肺动脉高压的作用及其机制
目的:观察川芎嗪注射液对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺动脉高压的临床作用并探讨其可能机制.方法:将采集的确诊为COPD的22例患者随机分为2组(n=11):常规治疗组和川芎嗪治疗组,并随机抽取门诊体检正常者11例作为正常对照组.常规治疗组予以卧床休息、低流量吸氧、支气管舒张剂、糖皮质激素及抗生素等治疗,川芎嗪治疗组在常规治疗基础上加用川芎嗪注射液(60 mg/d静脉点滴),正常对照组不予任何治疗措施,治疗2周后检测3组的肺功能、动脉血气分析及肺动脉压,用敏感硫电极法检测血浆硫化氢(H2S)的浓度.结果:①经过2周治疗后,常规治疗组和川芎嗪治疗组肺功能、动脉血气分析、肺动脉压等各项指标均比治疗前有明显改善,但川芎嗪治疗组优于常规治疗组(P＜0.05);②川芎嗪组综合治疗后血浆H2S浓度明显高于治疗前和常规治疗组(P＜0.01).结论:川芎嗪注射液可能通过升高体内H2S浓度,有效地改善COPD患者肺功能状态.
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尼氟灭酸在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩中的作用
目的:探讨氯离子通道阻断剂—尼氟灭酸(NFA)在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)中的作用.方法:采用大鼠HHPV模型,二、三级动脉环分别随机分4组(n=8):常氧组(N组)、低氧高二氧化碳组(H组)、DMSO组(HD组)、尼氟灭酸组(NFA组).在急性低氧高二氧化碳介质中,采用NFA分别孵育肺二、三级肺动脉环,按照低氧高二氧化碳反应性测定的方法测定其二、三级肺动脉血管环张力的变化,并观察NFA对HHPV的影响.结果:①H组二、三级肺动脉均呈现双向性收缩变化(Ⅰ期快速收缩、快速舒张;Ⅱ期持续性收缩)与N组相比有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01);②NFA组二、三级肺动脉环的低氧高二氧化碳性血管收缩作用明显减弱,尤其是Ⅱ期的持续收缩,与HD组相比有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:氟离子通道阻断剂-尼氟灭酸可减轻大鼠二、三级肺动脉环的张力变化率(尤其是Ⅱ期的持续性收缩),从而发挥拮抗HHPV的作用.
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不同季节高原鼢鼠乳酸脱氢酶活力和同工酶谱
目的:探讨高原鼢鼠对洞道低氧高二氧化碳环境的代谢适应机制.方法:用酶活力分析法,分析春季、夏季和秋季高原鼢鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)活力、乳酸含量和组织LDH活力,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析血清和组织LDH同工酶谱.结果:高原鼢鼠血清LDH活力在春夏秋三季具有明显的差异,春季高于夏季,夏季高于秋季,血清乳酸含量表现出同样的变化趋势;春季血清中五种同工酶条带都清晰可见,夏季血清中LDH5和LDH4清晰可见,秋季血清中只能看见LDH5带.骨骼肌、心肌和脑组织LDH活力较高,而且从春季到秋季显著降低;肝、肾和肺组织LDH活力较低,肝组织LDH活力春季显著高于夏季和秋季,夏秋两季之间没有明显差异;肾和肺组织LDH活力在春季与夏季之间没有明显差异,但秋季明显降低.心、肝、肺、肾、脑和肌肉组织LDH同工酶谱,在春夏秋三季都显示出五条带,并表现出明显的组织差异;各组织同工酶含量也有不同程度的季节差异.结论:高原鼢鼠体内糖酵解过程具有明显的季节性变化,从春季到秋季依次降低,这与它们的季节性活动特点和洞道中氧气和二氧化碳的季节性波动有关.
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内质网应激在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压中的作用
目的:观察低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠的肺血管重塑并探讨内质网应激(ERS)在肺动脉高压中的作用.方法:将40只SD大鼠随机分为四组:常氧对照组(N)、低氧高二氧化碳组(HH)、ERS通路抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid)组(4-PBA)、ERS通路激动剂衣霉素(tunicamycin)组(TM),n=10.测量各组大鼠的肺动脉平均压(mPAP)、颈动脉平均压以及右心室肥大指数,免疫荧光α-SMA标记法鉴定各组肺中小动脉平滑肌细胞,电镜观察肺组织及肺中小动脉形态学变化,原位末端标记法(TUNEL)检测各组肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数,采用RT-PCR和Western blot分别检测各组大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12 (caspase-12) mRNA及蛋白质表达.结果:①与N组相比,HH组、4-PBA组、TM组mPAP、右心室游离壁重量/左心室加心室间隔重量[RV/(LV+S)]、肺动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)比值增加(P＜0.01),肺动脉管腔面积/管总面积(LA/TA)比值减小(P＜0.01),细胞凋亡指数降低(P＜0.05或P＜0.01).ERS相关蛋白质及mRNA的表达量升高,各差异均有统计学意义.②与HH组相比,4-PBA组mPAP和[RV/(LV+S)]、WA/TA值减小(P＜0.01),LA/TA值和细胞凋亡指数上升(P＜0.05或P＜0.01),ERS相关蛋白质和mRNA的表达量均下调(P＜0.05或P＜0.01);③与HH组相比,TM组mPAP、[RV/(LV+S)]、WA/TA值升高(P＜0.05或P＜0.01);肺动脉中膜层增厚,LA/TA值和细胞凋亡指数降低(P＜0.01).ERS相关蛋白质及mRNA的表达量均升高,除GRP78蛋白质表达量无明显变化外,其余各差异均有统计学意义.结论:低氧高二氧化碳诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重塑可能与肺动脉平滑肌细胞增殖过度及凋亡过少有关;ERS相关因子(JNK、caspase-12和CHOP)参与低氧高二氧化碳性肺动脉高压的调控.
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益气温阳活血化痰方对低氧高二氧化碳性肺动脉高压的 作用及其机制
目的:探讨益气温阳活血化痰方(YWHHF)经BMP-7/Smads通路抑制内皮-间质转分化(EndoMT),从而缓解低氧高二氧化碳性大鼠肺动脉压力的机制.方法:雄性健康清洁级SD大鼠50只,体重(180～220)g,随机分为5组(n=10):常氧组(N)、低氧高二氧化碳组(HH)、YWHHF高剂量组(YH)、中剂量组(YM)、低剂量组(YL).N组在常氧环境下饲养,其余四组在低氧高二氧化碳(9％ ～11％O2、5％ ～6％CO2)环境下饲养4周,8 h/日,每周6 d.YH、YM、YL组大鼠灌胃不同浓度的益气温阳活血化痰方(3 ml/kg),浓度分别为0.6、0.3和0.15 g/kg,HH组灌胃等体积生理盐水.4周后检测大鼠肺动脉平均压,肺灌流后取右心室游离壁及左心室加心室间隔测定右心室肥大指数.电镜观察肺超微结构变化,免疫荧光观察肺动脉结构变化,RT-PCR检测 α-SMA、CD31、BMP-7、Smad1/5/8的mRNA水平,Western blot检测 α-SMA、CD31、BMP-7、p-Smad1/5/8和Smad1/5/8的蛋白质水平.结果:与N组比,其余四组平均肺动脉压、右心室肥大指数均增大,镜下观察见肺有明显损伤,α-SMA mRNA及蛋白质表达升高,CD31、BMP-7、Smad1/5/8的mRNA水平降低,CD31、BMP-7、p-Smad1/5/8的蛋白质水平亦降低(P<0.05);与HH组比,中药组以上变化均有所减轻(P<0.05).结论:YWHHF通过抑制EndoMT从而缓解肺动脉高压,其机制可能与促进BMP-7/Smads通路的表达有关.
关键词： 低氧高二氧化碳 BMP-7/Smads通路 EndoMT 肺动脉高压 大鼠 -
格列苯脲调节大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩时ERK1/2信号的作用
目的:探究ATP敏感性钾离子通道在低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)中的作用及与细胞外信号调节激酶1/2(ERKl/2)信号通路的关系.方法:制备正常SD大鼠离体三级肺动脉环,建立大鼠离体肺动脉环灌流的模型,用格列本脲(Gly)、Gly+ U0126(ERKl/2抑制剂)联合孵育三级肺动脉环,按照低氧高二氧化碳反应性测定方法测定所有血管环的张力值.结果:①常氧状态下,三级肺动脉环的张力值无明显变化;②急性低氧高二氧化碳条件下,三级肺动脉环呈现双向性的收缩(与常氧状态下值相比,P＜0.05,P＜0.01);③经Gly孵育的三级肺动脉环,其Ⅱ期收缩幅度增强(与低氧高二氧化碳状态下值相比,P＜ 0.05,P＜0.01);④急性低氧高二氧化碳条件下,U0126能使Gly所致的三级肺动脉环Ⅱ期持续收缩幅度显著降低(与低氧高二氧化碳状态下值相比,P＜0.05,P＜0.01),Ⅰ期收缩和Ⅰ期舒张均没有明显变化(P均＞0.05).结论:ATP敏感性钾离子通道(KATP)阻断剂--Gly可能通过活化ERK1/2信号通路介导了大鼠HHPV的发生.
关键词： 低氧高二氧化碳 ATP敏感性钾离子通道 ERK1/2通路 格列本脲 -
TRPC6在低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌细胞增殖、凋亡中的作用
本文旨在探讨TRPC6在低氧高二氧化碳性肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖和凋亡中的作用.原代培养Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠PASMCs,采用平滑肌α-肌动蛋白免疫荧光染色法鉴定.选用4～6代的PASMCs,加入无血清DMEM饥饿24 h,随机分为5组:常氧组、低氧高二氧化碳组、DMSO组、TRPC6抑制剂SKF-96365组和TRPC6激动剂OAG组.常氧组置于37℃常氧培养箱(21％ O2,5％ CO2)中培养24 h,其余4组置于37℃低氧高二氧化碳培养箱(5％ O2,6％ CO2)中,用不同药物处理24 h.用逆转录聚合酶链式反应和Western blot分别检测TRPC6 mRNA和蛋白的表达;用CCK-8法检测细胞增殖情况;用原位末端标记法检测细胞凋亡;用Fura 2-AM双波长法检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i).结果显示,低氧高二氧化碳条件下,PASMCs的TRPC6 mRNA和蛋白表达上调,[Ca2+]i升高,细胞增殖增加,而凋亡减少;OAG可促进低氧高二氧化碳的上述作用,而SKF-96365能够逆转这些作用.以上结果提示,TRPC6参与了低氧高二氧化碳对PASMCs增殖和凋亡的调节.
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低氧高二氧化碳对大鼠肺动脉平滑肌细胞KATP通道表达的影响及其与p38 MAPK通路的关系
本文旨在探究ATP敏感性钾通道(KATp)在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中的表达及其与p38MAPK信号通路的关系.体外培养SD大鼠PASMCs,复制低氧高二氧化碳模型,采用RT-PCR技术及免疫印迹法检测KATP亚基磺酰脲类受体2B (sulfonylurea receptor 2B,SUR2B)和内向整流钾通道6.1 (Kir6.1) mRNA 及蛋白的表达水平.结果显示:(1)与常氧组(N组)、低氧高二氧化碳组(H组)、低氧高二氧化碳+溶剂DMSO对照组(HD组)、低氧高二氧化碳+p38 MAPK通路抑制剂SB203580组(HS组)相比,低氧高二氧化碳+p38 MAPK通路激动剂茴香霉素(Anisomycin)组(HA组)Kir6.1 mRNA与蛋白表达均明显降低(P＜0.01),N组、H组、HD组、HS组间Kir6.1 mRNA与蛋白表达差异不显著(P＞0.05);(2)与N组相比,H组、HD组、HS组、HA组SUR2B mRNA与蛋白表达均明显上升(P＜0.05),H组、HD组、HS组、HA组间SUR2B mRNA与蛋白表达差异不显著俨＞0.05).以上结果提示:(1)低氧高二氧化碳、SB203580均没有引起Kir6.1 mRNA与蛋白表达变化,而茴香霉素下调Kir6.1 mRNA与蛋白表达,Kir6.1可能受其它类型的MAPK通路的调节;(2)低氧高二氧化碳明显上调SUR2B mRNA与蛋白表达,而SB203580、茴香霉素不影响低氧高二氧化碳所引起的SUR2B表达上调,低氧高二氧化碳引起的SUR2B表达的升高可能是非p38 MAPK通路依赖性的.
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神经肌肉电刺激对低O2高CO2大鼠下肢骨骼肌miR-1相关通路的影响
目的:探讨神经肌肉电刺激(NMES)对慢性低O2高CO2大鼠腓肠肌的作用,并研究其对miR-1及相关蛋白通路的影响.方法:成年SD大鼠24只随机分成3组:对照组(NC组)、造模组(HH组)和电刺激组(HE组),每组8只.HH组和HE组大鼠置于低O2高CO2舱内造模,每天持续8 h,共4周.HE组在持续造模2周后,用电刺激仪对大鼠进行30 min,2 Hz和100 Hz,1:1交替循环模式的NMES,维持2周;NC组仅做捆绑及贴电极片处理.动物跑台测定大鼠耐力运动能力,免疫组织化学观察腓肠肌肌纤维类型转变,qRT-PCR检测miR-1水平,Western blot检测腓肠肌核内组蛋白脱乙酰基酶4(HDAC4)、肌细胞促进因子2(MEF-2)和过氧化体增殖物激活型受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白含量的变化.结果:与NC组比,HH组大鼠腓肠肌慢肌纤维比例明显下降,miR-1含量明显升高,HDAC4、MEF2及PGC-1α蛋白含量明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);大鼠耐力运动能力差异无统计学意义(P=0.054);与HH组比,HE组大鼠腓肠肌慢肌纤维比例明显升高,而miR-1含量下降,对应各蛋白含量均出现不同程度升高,大鼠耐力运动能力也得到了改善,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:慢性低O2高CO2可致大鼠腓肠肌慢肌纤维向快肌纤维转变,从而导致运动耐力下降,而NMES可部分逆转这种病理变化,改善大鼠耐力运动能力.miR-1-HDAC4-MEF2-PGCα信号通路可能参与其中.
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氯离子通道阻滞剂通过抑制MAPK通路减轻低氧高二氧化碳性肺血管收缩
目的:探究氦离子通道阻滞剂尼氟灭酸对低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)的影响及与MAPK信号通路的关系.方法:采用大鼠HHPV模型,将所有二级肺动脉环随机分为:常氧组(N组)、低氧高二氧化碳组(H组)、DMSO组(HD组)、尼氟灭酸组(NFA组)、尼氟灭酸+SB203580组(NFA+SB组)、尼氟灭酸+U0126组(NFA+U组),按照低氧高二氧化碳反应性测定的方法测定各组肺动脉环的张力变化.结果:NFA+SB组、NFA+U组二级肺动脉环的收缩峰值较HD组均明显下降(P＜0.05和P＜0.01),但Ⅰ期快速收缩和Ⅰ期快速舒张均无明显差异(均P＞ 0.05);NFA+SB组的收缩峰值较NFA组明显下降(P＜0.05),但NFA+U组的收缩峰值较NFA组无明显变化(P＞o.05).结论:氯离子通道阻滞剂可通过抑制MAPK信号通路,减轻二级肺动脉环Ⅱ期持续性收缩,并逆转为舒张状态,从而发挥拮抗HHPV的作用.
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慢性低氧对大鼠血浆尾加压素Ⅱ浓度和右心室尾加压素Ⅱ受体的影响
尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)早从鱼脊髓尾部下垂体中分离出,1998年首次在人体克隆出,是新发现的强血管活性肽,其缩血管作用对主动脉、肺动脉比内皮素-1(ET- 1)分别强10倍与4倍.UⅡ的特异性受体为G蛋白偶联受体GPR14,该受体广泛存在于神经系统、心血管组织,专家推测UⅡ是调节循环系统稳定的重要因子,但其生理和病理意义还远不清楚,UⅡ正成为国际上研究的热点之一.为此,我们在不同时间(1周、2周及4周) 的慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压、右心室肥大的大鼠模型上,观察了血浆UⅡ含量、右心室肌浆膜和肺动脉组织质膜上UⅡ受体变化的影响,以探讨UⅡ在慢性低氧性肺动脉高压和右心室肥大发病过程中的作用.
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三七皂苷单体R1对低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌细胞ERK1/2表达的影响
目的:探讨三七皂苷单体R1减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩(hypoxia hypercapnia-induced pulmonary vasoconstriction,HHPV)的作用及其与细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的关系.方法:原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞( PASMCs),随机分为6组:常氧组(N组),低氧高二氧化碳组(H组),DMSO对照组(HD组),R1干预组(R8、R40、R100组).采用免疫印迹法测定ERK1/2磷酸化蛋白表达,半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测计RK1、ERK2基因表达水平.结果:p-ERK蛋白在N组表达弱,与H、HD组比较,R8、R40、R100组均不同程度下调,以R8组为著,差异有统计学意义(P＜0.01)；ERK1 mRNA、ERK2 mRNA在N组弱表达,与H、HD组比较,R8、R40、R100组表达均不同程度降低(P＜0.01和P＜0.05),以R8组为著.结论:ERK1/2信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩；三七皂苷单体R1可能通过抑制ERK1/2通路减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩.
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益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞微结构及内分泌功能的影响
目的：观察益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞微结构及内分泌功能的影响。方法：建立人肺动脉内皮细胞低氧高二氧化碳模型；制备益肺活血复方不同给药剂量（生药10、20、40 g/kg）的含药血清；在细胞培养液中共同孵育12 h后，利用透射电镜观察细胞微结构变化，采用放射免疫法测定各组细胞培养液上清中内皮素-1（ET-1）及前列环素（ PGI2）的含量，采用硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮（ NO）的含量。结果：低氧高二氧化碳条件下，人肺动脉内皮细胞微结构损伤，而中、高剂量益肺活血复方组细胞微结构损伤减轻。各组细胞培养液或培养液上清中ET-1、NO、PGI2的含量比较，差异有统计学意义（F＝121．870、60．040、49．060，P均＜0．001）；模型组ET-1含量高于空白对照组，NO、PGI2含量低于空白对照组（P均＜0．01）；中、高剂量益肺活血复方组ET-1含量低于模型组，NO和PGI2含量高于模型组（P均＜0．01）。结论：低氧高二氧化碳导致人肺动脉内皮细胞微结构及功能障碍，而中、高剂量益肺活血复方可减轻其结构及功能损伤的程度。
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神经肌肉电刺激对慢性低氧高二氧化碳模型大鼠肺动脉高压的影响
目的 观察神经肌肉电刺激对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉高压的影响.方法 选取雄性SD大鼠18只,按随机数字表法分为正常对照组(对照组)、低氧高二氧化碳组(模型组)和低氧高二氧化碳+神经肌肉电刺激组(电刺激组),每组6只大鼠.模型组和电刺激组每天置于氧舱内(O2浓度9％至11％,CO2浓度5％至6％)8h进行造模,连续4周,对照组则吸入普通空气.每天造模结束后对电刺激组大鼠双侧腓肠肌进行神经肌肉电刺激30 min.4周后,处死大鼠,分离右心室(RV)和左心室加室间隔(LV+S),计算右心肥厚指数RVHI[RVHI=RV/(LV+S)],光镜下观察大鼠肺细小动脉结构形态变化,计算出管壁厚度占血管外径的百分比(WT％)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA％);采用蛋白质印迹法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、丙酮酸脱氢酶-E1(PDH-E1)、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)蛋白表达;同时采用微量酶标法检测(LDH)活性,采用ELISA法检测丙酮酸脱氢酶(PDH)的浓度.结果 与对照组比较,模型组的RVHI、WT％、WA％值均升高(P＜0.01),HIF-1α、PDK1蛋白表达水平增高(P＜0.01),PDH-1Eα蛋白表达下降(P＜0.01),LDH活性提高(P＜0.01),PDH浓度未见明显差异(P＞0.05).与模型组相比较,电刺激组的RVHI、WT％、WA％值均显著降低(P＜0.01),HIF-1α,PDK1蛋白表达明显下降(P＜0.01),PDH-E1α蛋白表达明显增高(P＜0.01),LDH活性显著下降(P＜0.01),PDH浓度未见明显差异(P＞0.05).结论 神经肌肉电刺激可能通过抑制HIF-1α蛋白表达,抑制PDK1、PDH-E1α活性、LDH活性,抑制肺组织氧化磷酸化向糖酵解转变,从而减轻肺血管重塑,改善慢性低氧高二氧化碳所致的大鼠肺动脉高压.
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4-氨基吡啶调节大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩时ERK1/2信号通路的作用
目的 探讨电压依赖性钾离子通道(KV)及细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)信号通路在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)中的作用.方法 制作正常SD大鼠离体二级肺动脉环,在常氧及低氧高二氧化碳条件下分别观察肺动脉环的张力变化.在急性低氧高二氧化碳条件下,分别用Kv阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)、ERK1/2信号通路抑制剂U0126、4-AP+ U0126孵育二级肺动脉环,测定各组血管环的张力值.结果 在急性低氧高二氧化碳条件下:①肺动脉环呈现双向性的收缩(与常氧状态比较,P＜0.05);②经4-AP孵育的二级肺动脉环收缩幅度增强,尤其是Ⅱ期持续收缩(P＜0.05);③U0126能使4-AP所致的二级肺动脉环的Ⅱ期持续收缩幅度显著降低(P＜0.05).结论 4-AP可增强大鼠的HHPV,而U0126能使4-AP所致的二级肺动脉环的Ⅱ期持续收缩幅度显著降低,提示ERK1/2信号通路可能在电压依赖性钾离子通道调节大鼠HHPV的机制中发挥重要作用.
