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RGD和细胞穿膜肽共修饰脂质体的构建及其体外功能评价
目的 制备RGD和TAT共修饰载紫杉醇(PTX)脂质体(RGD/TAT-LP-PTX),研究其理化性质和体外抗肿瘤作用.方法 薄膜分散法制备RGD/TAT-LP-PTX,研究其理化性质;检测肝癌HepG2细胞对RGD/TAT-LP的摄取效率以及脂质体的摄取机制.共聚焦实验研究肿瘤细胞对脂质体的摄取.MTT检测RGD/TAT-LP-PTX对HepG2细胞的增殖抑制作用.结果 RGD/TAT-LP-PTX的粒径134.5 ±8.4 nm,电位为22.35±2.55 mV,紫杉醇的包封率84.6％.RGD/TAT-LP在4h摄取效率是2h的1.65倍(P＜0.05);HepG2细胞在4h对RGD/TAT-LP的摄取效率分别是TAT-LP、RGD-LP和LP的2.2倍、2.7倍和3.9倍(P＜ 0.01);RGD/TAT-LP-PTX在24 h HepG2细胞的存活率是48 h的1.75倍(P＜0.05);给药48 h后,TAT-LP-PTX、RGD-LP-PTX和LP-PTX的细胞存活率分别是RGD/TAT-LP-PTX组的1.65倍、1.74倍和2.1倍(P＜0.01).结论 RGD和TAT共修饰紫杉醇脂质体是一种潜在高效的肿瘤靶向给药系统.
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RGD与细胞穿膜肽共修饰miRNA脂质体的构建及抗肿瘤研究
目的 制备RGD和细胞穿膜肽TAT共修饰载microRNA-34a脂质体(RGD/TAT-miLPs-34a),对其理化性质进行表征,研究脂质体与人骨肉瘤MG63细胞的亲和力和增殖抑制作用.方法 采用薄膜分散法制备RGD/TAT-miLPs-34a;定量细胞摄取实验研究MG63细胞对RGD/TAT-miLPs-34a的摄取效率以及对脂质体摄取的影响因素.定性共聚焦实验观察肿瘤细胞对脂质体的摄取.MTT实验研究RGD/TAT-miLPs-34a对MG63细胞的细胞毒性;构建骨肉瘤异位瘤模型,研究不同脂质体对肿瘤的生长抑制率.结果 MG63细胞在与脂质体共同孵育4h后,RGD/TAT-miLPs-34a组摄取效率为(185.3±17.5)％,TAT-miLPs-34a组为(67.5±8.6)％,RGD-miLPs-34a组为(82.7±9.5)％,miLPs-34a组为(40.9±7.8)％,差异有统计学意义,H=27.93,P＜0.001.RGD/TAT-miLPs-34a 4 h摄取效率是2h摄取效率(101.3±12.4)％的1.83倍,差异有统计学意义,z=5.58,P=0.001.骨肉瘤MG63细胞给药48 h后,RGD/TAT-miLPs-34a组MG63细胞存活率为(18.5±5.3)％,TAT-miLPs-34a组为(36.1±5.2)％、RGD-miIPs-34a组为(44.8±6.7)％,miLPs-34a组为(67.7±8.9)％,生理盐水组为(98.7±3.6)％,差异有统计学意义,H=19.271,P＜0.001.荷瘤裸鼠治疗实验miLPs-34a组对肿瘤生长的抑制率为(19.4±3.2)％,RGD-miLPs-34a组为(39.6±4.8)％,TAT-miLPs-34a组为(42.6±6.5)％,RGD/TAT-miLPs-34a组为(73.7±7.1)％,生理盐水组为0,差异有统计学意义,F=145.237,P＜0.001.结论 细胞穿膜肽与RGD共修饰载miRNA脂质体能够有效识别并穿透肿瘤细胞膜进入肿瘤细胞,是一种潜在高效的骨肉瘤靶向给药系统.
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RGD修饰共载多烯紫杉醇和苏拉明脂质体乳腺癌靶向治疗研究
目的 构建RGD修饰共栽多烯紫杉醇(docetaxel,DOC)和苏拉明(suramin,Su)的靶向脂质体(RGDLP-D OC/Su),研究RGDLP-DOC/Su对乳腺癌的靶向性和治疗效果.方法 用薄膜分散法制备RGDLP-DOC/Su,研究其粒径、电位和包封率等理化性质.以PBS组为对照,将MCF-7细胞和血管内皮细胞HUVEC细胞分为未修饰共载药脂质体组(LP-DOC/Su)、RGD修饰多烯紫杉醇脂质体组(RGDLP-DOC)、RGD修饰苏拉明脂质体组(RGDLP-Su)和RGD修饰共栽药脂质体组(RGDLP-DOC/Su).MTT法检测不同脂质体对MCF-7细胞和HUVEC细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7细胞和HUVEC细胞对脂质体摄取效率.构建乳腺癌MCF-7细胞体外肿瘤球模型,研究脂质体的肿瘤球穿透能力;构建裸鼠乳腺癌异位模型,研究不同脂质体对肿瘤的生长抑制能力.结果 RGDLP-DO C/Su的粒径为(130±15.5)nm,电位为(4±1.55) mV,DOC与Su的包封率分别为(82.5±5.5)％和(85.6±8.1)％.MTT实验结果显示,乳腺癌MCF-7细胞给药48 h后,对乳腺癌MCF-7细胞抑制率LP-DOC/Su为(36.4±2.01)％,RGDLP-DOC为(48.5±3.12)％,RGDLP-Su为(32.2±2.84)％,RGDLP-DOC/Su为(78.7±5.44)％.RGD修饰DOC脂质体和Su脂质体联合对MCF-7乳腺癌细胞增殖抑制率存在交互效应,F=230.075,P＜0.001.HUVEC细胞给药48 h后,对HUVEC细胞抑制率LP-DOC/Su为(34.5±2.58)％,RGDLP-DOC为(44.8±2.95)％,RGDLP-Su为(42.6±3.11)％,RGDLP-DO C/Su为(88.2±6.18)％,RGD修饰DOC脂质体和Su脂质体对HUVEC细胞增殖抑制率存在交互效应,F=197.093,P＜0.001.MCF-7细胞对RGDLP的摄取效率是普通脂质体的2.4倍,差异有统计学意义,t=35.877,P＜0.001;HUVEC细胞对RGDLP的摄取效率是普通脂质体的3.1倍,差异有统计学意义,t=70.159,P＜0.001.相比于PBS组,LP-DOC/Su、RGDLP-DOC、RGDLP-Su和RGDLP-DO C/Su对肿瘤生长的抑制率分别为(21.4±5.5)％、(38.5±7.2)％、(28.6±6.4)％和(72.5±8.3)％,RGD修饰DOC脂质体和Su脂质体对肿瘤生长的抑制率存在交互效应,F=37.420,P＜0.001.PBS、LP-DOC/Su、RGDLP-DOC、RGDLP-Su和RGDLP-DOC/Su组肿瘤质量分别为(5.82±0.35)、(4.57±0.28)、(3.58±0.37)、(4.16±0.45)和(1.60±0.22)g,各组间肿瘤质量差异有统计学意义,F=203.515,P＜0.001.结论 RGDLP-DOC/Su与乳腺癌MCF-7细胞和HUVEC细胞均具有良好的亲和性,能够有效抑制乳腺癌细胞增殖和肿瘤生长,RGDLP-DOC/Su是一种潜在高效的肿瘤靶向和新生血管靶向给药系统.
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肿瘤抑素研究进展
肿瘤生长分化需要新的血管满足自身对营养物质和氧气的需要,这个过程称为血管再生,因此学者提出干扰血管生成就可以抑制肿瘤生长.肿瘤抑素(α3(IV)NC1)是一种来源于IV型胶原α3链蛋白水解的C-末端非胶原(NC1)结构,它具有潜在的抗血管生成作用而引起关注,α3(IV)NC1能抑制肿瘤扩散,促进内皮细胞凋亡和抑制不同的肿瘤血管生成,从而有望成为未来治疗癌症的药物.这篇综述调查研究了IV型胶原和具有抗血管生成作用的α3(IV)NC1的发现,以及它的信号传导机制.
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转铁蛋白和RGD肽共修饰脂质体的制备及其肺癌组织细胞的靶向性
目的:构建转铁蛋白(transferrin,TF)与整合素受体结合肽(RGD)共修饰脂质体(TF/RGD-LP),从体内外评价TF/RGD-LP的肺癌组织细胞靶向性.方法:薄膜分散法制备整合素受体结合肽RGD修饰的脂质体(RGD-LP),采用后插入法制备TF与RGD共修饰脂质体TF/RGD-LP,分析脂质体的理化性质.将肺癌A549细胞分为TF/RGD-LP、TF-LP、RGD-LP和LP组,每组设5个复孔.细胞摄取实验和肿瘤细胞球穿透实验研究TF/RGD-LP与肺癌A549细胞的亲和力和肿瘤组织的穿透能力,通过荷瘤裸鼠活体成像实验检测TF/RGD-LP的肺癌组织细胞靶向性.结果:所制备TF/RGD-LP粒径为(122.8±11.5)nm,电位为(6.4 ±3.85) mV.体外细胞摄取实验表明,肺癌A549细胞对TF/RGD-LP的摄取效率分别是TF-LP、RGD-LP和LP的2.8、2.2和3.9倍,TF-LP(P=0.006)、RGD-LP(P=0.007)和LP(P=0.001)的主效应有统计学意义,三者间有交互效应(P=0.006);肿瘤细胞球摄取实验以及裸鼠肿瘤组织活体成像实验表明,TF/RGD-LP具有良好的肺癌组织靶向性.结论:TF/RGD-LP具有良好的肺癌组织细胞靶向性,是一种潜在的肺癌组织细胞靶向给药系统.
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转铁蛋白与RGD共修饰脂质体对卵巢癌的靶向作用
采用薄膜分散法制备了长循环脂质体(LP)及RGD修饰的脂质体(RGD-LP),采用后插入法制备转铁蛋白(TF)修饰脂质体(TF-LP)和TF与RGD共修饰脂质体(TF/RGD-LP).所制备的TF/RGD-LP粒径为(128.4±14.5) nm,ζ电位为(2.55±4.15)mV.A2780细胞摄取试验表明,TF/RGD-LP组的荧光值分别是TF-LP和RGD-LP的2.3倍和2.9倍.体外卵巢癌肿瘤球试验结果定性证明了TF/RGD-LP是4种脂质体中肿瘤组织穿透能力强的.构建了裸鼠卵巢癌异位肿瘤模型,通过近红外成像试验考察各组脂质体的体内分布,结果也证明TF/RGD-LP具有良好的卵巢癌靶向性.
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双功能RGD-TAT肽修饰脂质体的构建及其脑胶质瘤靶向性研究
目的：制备双功能RGD-TAT肽修饰的脂质体（RGD-TAT peptide modified liposomes，RGD-TAT-LPs），并对其脑胶质瘤靶向性进行研究。方法采用薄膜分散法制备双功能RGD-TAT-LPs并进行表征；细胞摄取实验研究脑胶质瘤C6细胞对普通脂质体（liposomes，LPs）、RGD修饰脂质体（RGD-LPs）、TAT修饰脂质体（TAT-LPs）和RGD-TAT-LPs的摄取效率。构建脑胶质瘤原位肿瘤模型，研究不同脂质体在荷瘤裸鼠的体内分布。结果 RGD-TAT-LPs的粒径为（116.5±11.3）nm，电位为（23.2±3.5）mV。细胞摄取实验结果显示：C6细胞对 RGD-TAT-LPs 的摄取效率分别是 LPs、TAT-LPs 和 RGD-LPs 的4.7倍、2.3倍和2.9倍，差异有统计学意义（P＜0.01）。脂质体体内分布实验结果显示RGD-TAT修饰脂质体组荷瘤小鼠脑部荧光强。结论 RGD-TAT-LPs是一种潜在高效的肿瘤靶向给药系统。
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整合素受体介导共载紫杉醇和姜黄素脂质体的构建及其抗肿瘤研究
目的：制备整合素受体精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp, RGD）修饰共载紫杉醇和姜黄素脂质体（RGDLP-PTX/Cu），研究其卵巢癌细胞靶向性以及对卵巢癌的治疗效果。方法采用薄膜分散法制备RGD修饰共载紫杉醇和姜黄素脂质体（RGDLP-PTX/Cu）。观察脂质体的粒径，电位以及包封率；通过细胞摄取实验研究卵巢癌细胞(A2780)对普通脂质体（LP）和RGD修饰脂质体（RGDLP）的摄取效率。流式细胞仪检测不同载药脂质体诱导肿瘤细胞凋亡；构建卵巢癌裸鼠异位模型，考察不同载药脂质体对肿瘤生长抑制作用。结果 RGDLP-PTX/Cu的粒径在（94.8±11.2）nm，电位为（-3±2.45）mV， PTX与Cu的包封率分别为81.8%和84.6%。细胞摄取实验结果显示，A2780细胞对RGDLP的摄取效率是LP的3.6倍；凋亡实验表明RGDLP-PTX/Cu诱导卵巢癌细胞凋亡的能力显著强于RGDLP-PTX、RGDLP-Cu和LP-PTX/Cu(P<0.01)；荷瘤裸鼠肿瘤生长抑制实验结果表明：RGDLP-PTX/Cu具有良好的抗卵巢癌作用(P<0.01)。结论 RGD修饰共载紫杉醇和姜黄素脂质体具有良好的卵巢癌细胞靶向性和抗卵巢癌作用，是一种潜在高效的卵巢癌靶向给药系统。
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RGD与细胞穿膜肽共修饰脂质体靶向抑制肺癌A549细胞的研究
目的：制备整合素受体精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp,RGD）和细胞穿膜肽(transcriptional actirator protein, TAT共修饰载紫杉醇（paclitaxel,PTX）脂质体（liposomes，LP（）RGD/TAT-LP-PTX），对其理化性质进行表征，并考察脂质体与肺癌A 549细胞的亲和力以及对A 549细胞增殖的抑制作用。方法采用薄膜分散法制备RGD/TAT-LP-PTX，考察脂质体的粒径，电位以及包封率；通过定量细胞摄取实验考察肺癌A 549细胞对RGD/TAT-LP的摄取效率。构建A 549肿瘤球模型，定性共聚焦实验观察肿瘤细胞和肿瘤球对脂质体的摄取。噻唑蓝实验考察RGD/TAT-LP-PTX对肺癌A 549细胞的增殖抑制作用。结果 RGD/TAT-LP-PTX的粒径在（118.5±11.4）nm，电位为（21.58±2.42）mV，紫杉醇的包封率为86.5%。细胞摄取实验结果显示，RGD/TAT-LP在4 h摄取效率是2 h的1.88倍，差异具有统计学意义（P<0.05）；肺癌A 549细胞在与脂质体共同孵育4 h后对RGD/TAT-LP的摄取效率分别是TAT-LP、RGD-LP和LP的2.1倍、2.8倍和5.1倍，差异具有统计学意义（P<0.01）；MTT实验结果显示，在相同给药浓度下，不同脂质体组间细胞存活率有显著性差异（P<0.01）。结论整合素受体RGD和细胞穿膜肽TAT共修饰载紫杉醇（PTX）脂质体能够有效识别高表达整合素受体的肿瘤细胞，穿透肿瘤细胞膜进入肿瘤细胞，是一种潜在高效的肿瘤靶向给药系统。
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RGD修饰紫杉醇脂质体靶向抑制肝癌HepG2细胞
目的 制备整合素受体RGD修饰的紫杉醇脂质体(PTX-RGDLPs),并对其肝癌HepG2细胞靶向性和抑制效果进行评价.方法 采用薄膜分散法制备RGD修饰的脂质体,研究其形态、粒径、电位、体外血清稳定性.通过定性和定量的细胞摄取实验研究HepG2肝癌细胞与RGDLPs的亲和力.MTT实验研究紫杉醇脂质体对HepG2肝癌细胞的增殖抑制能力.结果 所制备的TFLPs平均粒径为(118.5±11.2) nm,Zeta电位为(-2.55 ±0.43)mV.体外细胞摄取实验表明,HepG2细胞对RGDLPs的摄取率是普通长循环脂质体(LPs)的3.1倍,差异具有显著统计学意义(P＜0.01).与生理盐水组和普通脂质体组相比,RGD修饰的紫杉醇脂质体对肝癌HepG2细胞的毒性是普通紫杉醇脂质体的2.8倍,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 该脂质体制备方法简单,与LPs相比,经RGD修饰可显著提高肿瘤细胞对脂质体的摄取,RGDLPs是一种潜在高效的肝癌靶向给药系统.
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RGD修饰紫杉醇脂质体的制备及其肺癌靶向治疗研究
目的:制备RGD修饰载紫杉醇(paclitaxel,PTX)脂质体(RGDLP-PTX),研究其理化性质,并探究其肺癌靶向治疗作用.方法:采用薄膜分散法制备RGDLP-PTX.荧光分光光度法研究A549细胞和NCI-H446细胞对普通脂质体(LP)和RGD修饰脂质体(RGDLP)的摄取效率.噻唑蓝实验研究不同紫杉醇浓度对A549细胞和NCI-H446细胞的细胞毒性;流式细胞仪检测RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的凋亡诱导作用.用A549细胞构建肺癌裸鼠异位肿瘤模型,研究RG-DLP-PTX的体内抗肿瘤作用.结果:RGDLP-PTX的粒径为(106.3±15.2)nm,电位为(6.23±2.2)mV;A549细胞对RG-DLP-PTX的摄取效率是LP-PTX的4.4倍,差异有统计学意义(P＜0.01);NCI-H446细胞对RGDLP-PTX的摄取效率是LP-PTX的3.8倍,差异有统计学意义(P＜0.01);RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性;在相同紫杉醇浓度下,RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的增殖抑制率显著强于LP-PTX和游离紫杉醇,差异有统计学意义(P＜0.01);RGDLP-PTX,LP-PTX和游离紫杉醇诱导肺癌A549细胞的凋亡率分别为48.3％,27.4％和35.5％,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);NCI-H446细胞凋亡率分别为41.3％,22.8％和34.1％,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).RGDLP-PTX,LP-PTX和游离紫杉醇对肺癌肿瘤的抑制率分别为69.3％,47.5％和24.4％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:RGD修饰载紫杉醇脂质体能够高效抑制肺癌细胞的增殖和肿瘤的生长,是一种有效的肺癌靶向给药系统.
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RGD和TAT共修饰紫杉醇脂质体的构建及其体外抗肿瘤研究
目的:制备三肽序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)和细胞穿膜肽TAT共修饰紫杉醇(PTX)脂质体(RGD/TAT-LP-PTX),对其理化性质进行表征,并研究脂质体与乳腺癌MCF-7细胞的亲和力和增殖抑制作用.方法:采用薄膜分散法制备RGD/TAT-LP-PTX,考察脂质体的粒径、电位以及包封率;通过定量细胞摄取实验研究乳腺癌MCF-7细胞对RGD/TAT-LP的摄取效率以及脂质体的摄取机制.定性共聚焦实验观察肿瘤细胞对脂质体的摄取.MTT实验研究RGD/TAT-LP-PTX对乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒性;构建乳腺癌MCF-7细胞肿瘤球模型,研究脂质体对肿瘤球的穿透能力.结果:RGD/TAT-LP-PTX的粒径为(138.8±12.4) nm,电位为(25.85±2.75) mV,紫杉醇的包封率为88.3％.细胞摄取实验结果显示:RGD/TAT-LP在孵育4h时的摄取效率是2h的1.79倍(P＜0.05);乳腺癌MCF-7细胞在与脂质体共同孵育4h后对RGD/TAT-LP的摄取效率分别是TAT-LP,RGD-LP和LP的2.25倍、2.72倍和4.58倍(P＜0.01);RGD/TAT-LP-PTX对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率随时间的延长而增长,RGD/TAT-LP-PTX在孵育48 h时对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率是24 h的1.78倍(P＜0.05);在给予RGD/TAT-LP-PTX,TAT-LP-PTX,RGD-LP-PTX和LP-PTX四种脂质体药物48 h后,RGD/TAT-LP-PTX组的抑制率是TAT-LP-PTX,RGD-LP-PTX和LP-PTX的1.65倍、1.82倍和2.55倍(P＜0.01).RGD/TAT-LP对肿瘤球的穿透能力明显强于其他脂质体.结论:RGD和细胞穿膜肽TAT共修饰PTX脂质体能够有效识别并穿透肿瘤细胞膜进入肿瘤细胞,是一种潜在高效的乳腺癌给药系统.
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巨噬细胞对血管内皮细胞增殖、Hoxb2、血管内皮生长因子受体和整合素αvβ3表达的影响
目的建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制.方法实验分4组:ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304.将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化:采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体αvβ3表达的变化.结果ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P＜0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体αvβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P＜0.01).结论ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体αvβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成.
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解离素对细胞粘附功能的影响
解离素(disintegrin)是一类从多种蛇毒和水蛭毒素中分离出来的,含有精-甘-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列或赖-甘-天冬氨酸(Lys-Gly-Asp,KGD)序列,半胱氨酸含量丰富,分子量为5～9KDa的小分子多肽[1].
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RGD修饰共载紫杉醇与microRNA-34a脂质体对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用
目的 探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)修饰共载紫杉醇与microRNA-34a脂质体(RGD miLPs-34a/PTX)的体内药代动力学以及体内对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法 采用荧光分光光度法检测RGD miLPs-34a/PTX的体外血清稳定性和体内药代动力学.构建肺癌裸鼠移植瘤模型,近红外活体成像研究RGD miLPs-34a/PTX在荷瘤裸鼠的体内分布.荷瘤裸鼠治疗实验检测RGD miLPs-34a/PTX对肿瘤的生长抑制作用.结果 RGD miLPs-34a/PTX在50％血清中具有良好的稳定性.药代动力学实验表明,在荷瘤小鼠血液中的microRNA-34a的消除速率明显快于miLPs-34a/PTX和RGD miLPs-34a/PTX组,差异有统计学意义(P＜0.05);活体成像实验结果显示,RGDmiLPs-34a/PTX在肿瘤组织的荧光分布显著强于miLPs-34a/PTX.肿瘤生长抑制实验结果显示,RGDmiLPs-34a/PTX对肿瘤生长的抑制作用显著强于其他脂质体组,差异有统计学意义(P＜0.01).各给药组对肿瘤生长抑制能力显著强于生理盐水组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 体内研究证实RGD修饰的共载紫杉醇和miRNA脂质体能够延长药物体内循环时间,达到长循环效果,具有良好的体内肿瘤靶向性和体内肿瘤治疗效果.
关键词： 整合素受体 紫杉醇 microRNA-34a 肺癌 -
双功能RGD-R8修饰阿霉素脂质体的制备及其体外评价
目的制备串联的RGD-R8肽修饰阿霉素(DOX)脂质体(RGD-R8-LP-DOX),对其理化性质进行表征,并研究脂质体与乳腺癌MCF-7细胞的亲和力和增殖抑制作用.方法采用薄膜分散法制备RGD-R8-LP-DOX,研究脂质体的形态、粒径、电位以及包封率;定量细胞摄取实验研究乳腺癌MCF-7细胞对RGD-R8-LP的摄取效率以及对脂质体摄取的影响因素.定性共聚焦实验观察肿瘤细胞对脂质体的摄取.MTT实验研究RGD-R8-LP-DOX对乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒性.结果RGD-R8-LP-DOX的粒径为(115.8±11.5)nm,电位为(23.45±4.68)mV,阿霉素的包封率为95.6％.细胞摄取实验结果显示,RGD-R8-LP在4h摄取效率是2h的1.75倍,差异有统计学意义(P＜0.05);MCF-7细胞在与脂质体共同孵育4h后对RGD-R8-LP的摄取效率分别是R8-LP、RGD-LP和LP的2.1倍、2.9倍和3.8倍,差异有统计学意义(P＜0.01);RGD-R8-LP-DOX与乳腺癌MCF-7细胞孵育24 h后的存活率是48 h的1.8倍,差异有统计学意义(P＜0.05);在给药48 h后,R8-LP-DOX、RGD-LP-DOX和LP-DOX的细胞存活率分别是RGD-R8-LP-DOX组的1.6倍、1.8倍和2.4倍,差异有统计学意义(P＜0.01).结论整合素受体特异性配体RGD和细胞穿膜肽R8串联的RGD-R8肽修饰阿霉素脂质体能够有效穿透肿瘤细胞膜进入肿瘤细胞,是一种潜在高效的乳腺癌给药系统.
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转铁蛋白与RGD共修饰脂质体的制备及其肿瘤靶向性评价
目的 制备转铁蛋白与RGD共修饰脂质体(TF/RGD-LP),研究其体内外卵巢癌靶向性.方法 采用薄膜分散法制备RGD修饰脂质体(RGD-LP).采用后插入法制备转铁蛋白修饰脂质体(TF-LP)和TF/RGD-LP.研究脂质体的粒径和电位;通过细胞摄取实验研究卵巢癌细胞对普通脂质体(LP)、RGD-LP、TF-LP和TF/RGD-LP的摄取效率.构建卵巢癌细胞肿瘤球模型,考察脂质体的肿瘤球穿透能力;构建卵巢癌裸鼠异位模型,考察不同脂质体在荷瘤裸鼠的体内分布.结果 TF/RGD-LP的粒径为(95.5 ±8.7)nm,电位为(3.05±1.25)mV.细胞摄取实验结果显示,卵巢癌A2780细胞对TF/RGD-LP的摄取效率分别是LP、TF-LP和RGD-LP的5.7、2.7倍和2.9倍,差异具有统计学意义(P＜0.01).细胞肿瘤球穿透实验和脂质体体内分布实验结果显示TF/RGD-LP具有良好的肿瘤靶向性和穿透能力.结论 TF/RGD-LP是一种潜在、高效的卵巢癌靶向给药系统.
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RGD修饰共载紫杉醇与microRNA-34a脂质体靶向抑制A549肺癌细胞的初步研究
目的 制备整合素受体修饰共载紫杉醇(paclitaxel,PTX)和microRNA-34a脂质体(RGDmiLPs-34a/PTX),研究与A549肺癌细胞的亲和力以及对肺癌细胞的靶向抑制效果.方法 采用薄膜分散法制备RGDmiLPs-34a/PTX.考察脂质体的粒径、电位以及包封率;通过定量细胞摄取实验以及定性的共聚焦实验考察A549细胞对普通脂质体(LP)和RGD修饰脂质体(RGDLP)的摄取效率.MTT实验考察不同脂质体对A549细胞的细胞毒性;构建肺癌细胞肿瘤球模型,考察不同脂质体对肿瘤球的穿透能力以及不同载药脂质体对肿瘤球的生长抑制能力.结果 RGDmiLPs-34a/PTX的粒径为(125.0±11.8)nm,电位为(21.00±4.85)mV,PTX与microRNA-34a的包封率分别为81.5％和94.6％.细胞摄取实验结果显示,A549细胞对RGDLP的摄取效率是LP的2.6倍,二者差异具有统计学意义(P＜0.01);定性的细胞摄取实验和肿瘤球穿透实验结果显示RGDLP组的荧光强度明显强于LP组,与定量的实验结果相一致.MTT实验表明RGDmiLPs-34a/PTX对A549肺癌细胞的毒性显著强于miLPs-34a/PTX、RGDmiLPs-34a和RGDLP-PTX;肿瘤球抑制实验结果显示,miLPs-34a/PTX、RGDmiLPs-34a、RGDLP-PTX和RGDmiLPs-34a/PTX分别使肿瘤球体积减小到原体积的81％、77％、64％和37％.与miLPs-34a/PTX、RGDmiLPs-34a、RGDLP-PTX相比,RGDmiLPs-34a/PTX对肿瘤球抑制率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 整合素受体RGD修饰共载紫杉醇和microRNA-34a脂质体具有良好的肺癌细胞靶向性和肺癌细胞抑制作用,是一种潜在高效的肺癌靶向给药系统.
关键词： 整合素受体 microRNA-34a 紫杉醇 脂质体 肺癌 -
整合素受体和细胞穿膜肽共修饰紫杉醇脂质体抑制食管癌Ec9706细胞的研究
目的：制备整合素受体RGD和细胞穿膜肽R8共修饰载紫杉醇( PTX)脂质体( RGD/R8-LP-PTX),对其理化性质进行表征,并观察脂质体与食管癌Ec9706细胞的亲和力和增殖抑制作用。方法：采用薄膜分散法制备RGD/R8-LP-PTX,观察脂质体的粒径,电位以及包封率；通过定量细胞摄取实验观察食管癌Ec9706细胞对RGD/R8-LP的摄取效率以及对脂质体摄取的影响因素。定性共聚焦实验观察肿瘤细胞对脂质体的摄取。 MTT实验观察RGD/R8-LP-PTX对食管癌Ec9706细胞的细胞毒性；构建食管癌Ec9706细胞肿瘤球模型,观察脂质体对肿瘤球的生长抑制能力。结果： RGD/R8-LP-PTX的粒径在124．8±9．4 nm,电位为21．35±3．55 mV。食管癌Ec9706细胞对RGD/R8-LP的摄取以及 RGD/R8-LP-PTX 对食管癌 Ec9706细胞的增殖抑制率具有时间依赖性；食管癌Ec9706细胞对RGD/R8-LP的摄取效率显著高于R8-LP、RGD-LP和LP,差异有统计学意义(P<0．01)；在给药48 h后,R8-LP-PTX、RGD-LP-PTX和LP-PTX的细胞存活率分别是RGD/R8-LP-PTX组的1．6倍、1．7倍和2．2倍,差异有统计学意义(P<0．01)。给药7天后,生理盐水组肿瘤球持续生长,体积增大1．48倍,LP-PTX组肿瘤球体积增大到原体积的1．12倍, RGD/R8-LP-PTX组、R8-LP-PTX组和 RGD-LP-PTX组肿瘤球体积减小到原体积的36%、59%和64%,差异具有统计学意义(P<0．01)。结论：整合素受体RGD和细胞穿膜肽R8共修饰载紫杉醇(PTX)脂质体能够有效穿透肿瘤细胞膜进入肿瘤细胞,是一种有效的食管癌化疗靶向给药系统。
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成骨细胞在骨内种植体表面的粘附机制
细胞粘附是细胞行为的基础,成骨细胞在种植体表面的粘附是一系列特异的、动态的蛋白质及信号介导的细胞活动.现在认为,成骨细胞通过胞膜蛋白受体介导其粘附的机制有两种,即整合素受体机制和硫酸肝素受体机制.本文就成骨细胞的这两种粘附机制进行综述.
