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基于microRNA-34a/SIRT1/p53通路探讨三七皂苷R1对血管内皮细胞衰老的影响
该研究旨在探讨三七皂苷R1能否通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路发挥延缓H2O2诱导的血管内皮细胞衰老的作用.以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,建立H2O2诱导的衰老模型,以白藜芦醇作为阳性对照药,实验分为青年组、H2O2模型组、三七皂苷R1组、白藜芦醇组.药物组提前加入三七皂苷R1(30 μmoL·L-1)或白藜芦醇(10 μmoL· L-1)干预24 h,然后用H2O2(100 μmoL·L-1)造模4h,后换成完全培养基培养24h.采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,QRT-PCR检测miRNA-34a,SIRT1和p53的核酸表达,Western-blot技术检测SIRT1,p53和衰老相关蛋白p21,p16的蛋白表达.结果发现,与模型组相比,三七皂苷R1组和白藜芦醇组可有效减低衰老内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率,增强细胞增殖能力和SOD活力,减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,抑制了miRNA-34a和p53的核酸表达,促进了SIRT1的核酸表达,此外抑制了p53,p21和p16的蛋白表达,促进了SIRT1的蛋白表达,差异均有统计意义(P＜0.05).该研究表明,H2O2诱导的衰老的内皮细胞可以作为衰老研究的模型,三七皂苷R1延缓血管内皮细胞衰老的效果明显,其机制可能是通过调控miRNA-34a/SIRTl/p53通路延缓了血管内皮细胞衰老的进程.
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电针调控microRNA-34a对缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞分化的影响
目的 探讨电针曲池和足三里是否是通过调控microRNA-34a(miR-34a)促进缺血再灌注损伤大鼠缺血周边区神经干细胞分化为星形胶质细胞.方法 将108只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组再分为3 d、7 d、14 d 3个时间点,每个时间点12只.另取16只大鼠随机分为电针+二甲基亚砜(DMSO)组(n=8)和电针+miR-34a抑制剂组(n=8).构建大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型.电针组造模后第2天进行电针患侧肢体曲池(LI11)、足三里(ST36),疏密波1/20 Hz,以肢体轻轻抖动为度,每次30 min,每天1次,共14 d.同时,造模后第2天至第14天各组大鼠腹腔注射5-溴代-2'-脱氧尿苷(BrdU),每天2次,每次注射间隔8 h;DMSO溶解液、miR-34a抑制剂在造模前进行侧脑室注射;免疫荧光染色检测BrdU、巢蛋白(Nestin)与神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的共定位情况;逆转录实时定量聚合酶链反应检测缺血周边区miR-34a相对表达量.结果 电针组各时间点Longa神经行为学评分低于模型组(t>2.084,P<0.05).模型组患侧肢体的爪印面积(右前爪、右后爪)、大压强(右前爪、右后爪)与同时间假手术组比较均下降(P<0.05),模型组随着时间延长右后爪印面积增加(P<0.05).电针组患侧肢体的爪印面积(右前爪、右后爪)与同时间模型组比较增加(P<0.05).电针干预3 d和7 d后,电针组患侧大压强(右前爪、右后爪)与模型组比较无显著性差异(P>0.05);14 d后电针组大于模型组(P<0.05).电针干预3 d至7 d,电针组右后爪印面积与右前大压强逐渐增加,一定程度上呈时间依赖性(P<0.05).模型组和电针组缺血周围区均表达Nestin+/GFAP+细胞和BrdU+/GFAP+细胞,且电针组3 d、7 d和14 d后Nestin+/GFAP+、BrdU+/GFAP+双阳性共标的细胞较模型组表达均增加(t>3.292,P<0.05),且在7 d达到峰值.脑缺血7 d后模型组缺血周边区miR-34a的表达较假手术组明显增加(P<0.01);而电针组和+DMSO组miR-34a表达进一步升高(P<0.05);电针+miR-34a抑制组miR-34a表达和BrdU+/GFAP+细胞数较电针组均减少(P<0.05).结论 电针曲池和足三里可以促进缺血再灌注损伤大鼠缺血周边区神经干细胞分化为星形胶质细胞,可能是通过调控miR-34a的表达.
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microRNA-Let-7a及microRNA-34a在肺癌细胞中的抗癌效应及其分子机制研究
目的：体外研究分析基因调控因子微RNA（microRNA）-Let-7a和microRNA-34a在肺癌细胞系中的抗癌效应及其相应的分子机制。方法在适当的培养基及温度环境中培养A549和NCI-H446两株肺癌细胞系，培养过程中分别转染microRNA-Let-7a和microRNA-34a的2组作为试验组，并设定阴性对照组和未转染组，比较每组的细胞周期及细胞凋亡的情况。结果在转染的肺癌细胞系中抑制了细胞的增殖，A549细胞系let-7a、34a转染组细胞增殖在48 h后明显被抑制，细胞凋零百分比分别为（11.25±0.252）、（14.07±2.133），NCI-H 446两株细胞系内let-7 a、34 a转染组细胞凋零百分比分别为（10.53±2.171）、（11.97±0.315）。细胞停滞于G0/G1期的百分比明显升高（P<0.05），同时诱导了细胞的凋亡。结论基因调控因子microRNA-Let-7 a和microRNA-34 a在肺癌细胞中能抑制细胞周期，引起细胞凋亡，抗癌效应通过下调bcl 2和C-myc及上调P 53的表达水平的分子机制得以实现。
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microRNA-34a在肺癌细胞凋亡中的作用
目的 探讨microRNA-34a在肺癌细胞凋亡中的作用.方法 将A549肺癌细胞株分为3组:microRNA-34a转染组、对照组和未转染组.分析microRNA-34a在A549肺癌细胞中的表达,microRNA-34a对A549肺癌细胞生长周期、细胞增殖、细胞凋亡的影响,microRNA-34a对A549肺癌细胞Bcl-2、P53和C-MYC蛋白以及mRNA表达的影响.结果 miRNA-34a转染组microRNA-34a的表达明显高于对照组(P＜0.05).miRNA-34a转染组G0/G1细胞明显高于对照组和未转染组(P＜0.05).miRNA-34a转染组48 h和96 h的增殖率明显低于对照组和未转染组(P＜0.05).miRNA-34a转染组的细胞凋亡明显高于对照组和未转染组(P＜0.05).miRNA-34a转染组的Bcl-2蛋白和C-MYC蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05);miRNA-34a转染组的P53蛋白表达水平明显高于对照组(P＜0.05).miRNA-34a转染组的Bcl-2 mRNA和C-MYC mRNA表达水平明显低于对照组Bcl-2 mRNA和C-MYC mRNA表达水平(P＜0.05);miRNA-34a转染组的P53 mRNA表达水平明显高于对照组P53 mRNA表达水平(P＜0.05).结论 microRNA-34a抑制A549肺癌细胞增殖,促进A549肺癌细胞的凋亡,机制可能为下调Bcl-2和C-MYC基因,上调P53基因.
关键词： microRNA-34a 肺癌 凋亡 机制 -
阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者外周血淋巴细胞中microRNA-34a的表达
目的 检测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)52例患者外周血淋巴细胞的microRNA-34a(miR-34a)水平,探讨影响miR-34a表达的相关因素.方法 检测患病组患者miR-34a的表达水平,与对照组比较,对miR-34a表达水平、睡眠呼吸监测结果及蒙特利尔认知评估量表(MoCA)测试结果进行相关分析.结果 患病组及对照组血液miR-34a表达随年龄增长而增加,在≥50岁患病组、重度患病组及伴有高血压的患病组中,血液miR-34a水平较对照组明显升高,与年龄及呼吸暂停长持续时间正相关,与低血氧饱和度和MoCA问卷中的记忆得分负相关.结论 OSAHS患者较对照组miR-34a表达上调,年龄、睡眠呼吸暂停病情及高血压是miR-34a表达上调的重要影响因素.
关键词： 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气 microRNA-34a 衰老 蒙特利尔问卷 -
miRNA-34a对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在人脑胶质瘤组织中的表达以及其对胶质瘤SHG-44细胞增殖和凋亡的影响.方法:20例胶质瘤组织标本均取自于青岛医学院附属医院神经外科(2007年01月至2010年12月),作为对照的正常脑组织取自5位重症脑外伤需行减压手术的患者.Real-time PCR检测胶质瘤组织中miR-34a的表达.体外转染miR-34a mimics至SHG-44细胞中,MTT实验、流式细胞术检测SHG-44细胞的增殖、细胞周期及凋亡.结果:miR-34a在人脑胶质瘤组织中的表达量明显低于正常脑组织,其在Ⅲ、Ⅳ期胶质瘤组织中表达量明显低于Ⅰ、Ⅱ期胶质瘤组织.miR-34a mimics体外转染组与空白组相比,其细胞增殖抑制率明显提高[(37.24±5.72)％ vs(4.19±0.63)％,P＜0.01]；miR-34a mimics转染组SHG-44细胞G1期比例明显高于空白对照组[(61.78±2.01)％ vs(50.91±1.19)％,P＜0.05]；且miR-34a转染组细胞凋亡率与空白组细胞相比显著升高[(15.28±3.65)％,vs (2.07 ±0.84)％,P＜0.01].结论:miR-34a在人脑胶质瘤组织中低表达,miR-34a可抑制SHG-44细胞的增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡.
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载microRNA-34a脂质体靶向治疗肺癌干细胞靶的研究
目的：制备载microRNA-34 a脂质体（miLPs-34 a），研究其肺癌干细胞靶向性以及对肺癌干细胞的生长抑制能力。方法采用薄膜分散法制备载microRNA-34 a脂质体，考察脂质体的粒径，电位以及包封率；考察载microRNA-34 a脂质体的血清稳定性。通过细胞摄取实验考察肺癌干细胞对miLPs-34 a的摄取效率。MTT实验考察microRNA-34 a对肺癌干细胞的细胞毒性；构建肺癌干细胞肿瘤球模型，考察脂质体对肿瘤球的生长抑制能力。构建肺癌裸鼠异位模型，考察脂质体对肿瘤生长抑制效果。结果 miLPs-34 a的粒径在136.55±11.4 nm，电位为21.45±4.55 mV，microRNA-34 a的包封率为94.6%。miLPs-34 a在24 h内，50%的血清中具有良好的血清稳定性。细胞摄取实验结果显示，A 549肺癌干细胞对miLPs-34 a的摄取效率是microRNA-34 a的3.1倍(P<0.01)；MTT实验表明miLPs-34 a对肺癌干细胞的毒性显著强于microRNA-34 a(P<0.01)；肿瘤球抑制实验结果表明miLPs-34 a对肿瘤球的生长抑制能力显著强于microRNA-34 a，差异具有统计学意义（P<0.01），miLPs-34 a具有良好的抗肺癌作用。荷瘤裸鼠肿瘤生长抑制实验结果表明miLPs-34 a对裸鼠肿瘤生长的抑制能力显著强于microRNA-34 a，二者差异具有统计学意义（P<0.05）。结论载microRNA-34 a脂质体具有良好的肺癌干细胞靶向性和抗肺癌干细胞生长作用，是一种潜在高效的肺癌干细胞靶向给药系统。
关键词： 肿瘤干细胞 microRNA-34a 脂质体 肺癌 -
MicroRNA-34a通过靶基因c-Met抑制施万细胞增殖
目的:探讨坐骨神经横断后,microRNA-34a(miR-34a)对c-Met(肝细胞生长因子受体)的调控作用及对施万细胞增殖的影响.方法:采用Real-time PCR检测miR-34a和c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达变化:Edu染色法检测miR-34a对原代培养的施万细胞增殖能力的影响:双荧光素酶报告基因系统检测miR-34a对c-Met 3'UTR的直接靶向作用.结果:miR-34a与c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达呈负相关,能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于c-Met基因的3'UTR.结论:miR-34a可以直接靶向c-Met的3'UTR,从而通过下调靶基因c-Met的表达抑制施万细胞的增殖.
关键词： microRNA-34a c-met 施万细胞 增殖 -
MicroRNA-34a在大鼠心肌梗死后的细胞凋亡中的作用
目的 探讨microRNA-34a(miR-34a)在大鼠心肌梗死后的心肌细胞凋亡过程中的作用.方法 建立大鼠心肌梗死模型,检测缺血区心肌组织miR-34a、bcI-2、bax和cIeaved-caspase-3的表达.在体外培养大鼠心肌细胞株H9C2,构建低氧无血清损伤模型(1%O2,94%N2,5%CO2),并将H9C2细胞转染miR-34a inhibitor下调miR-34a水平,观察细胞凋亡情况.同时H9C2细胞转染miR-34a mimics,观察miR-34a对细胞凋亡的影响.荧光实时定量PCR检测miR-34a的表达,Western BIot检测bcI-2、bax和cIeaved-caspase-3的表达.结果 心肌梗死组大鼠和低氧无血清培养饥饿诱导的H9C2细胞中miR-34a表达均增多,bcI-2/bax比值下降,心肌梗死模型组大鼠cIeaved-caspase-3表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);转染miR-34a mimics的H9C2细胞bcI-2/bax比值下降(P<0.05);转染miR-34a inhibitor能抑制低氧无血清损伤所致的心肌细胞bcI-2/bax下降(P<0.05).结论 miR-34a在大鼠心肌梗死后的心肌细胞中表达增加,可能具有促进心肌细胞凋亡的作用.
关键词： 心肌梗死 H9c2 microRNA-34a 凋亡 -
食管鳞状细胞癌组织中miR-34a的表达及其临床意义
[目的]研究食管鳞状细胞癌组织中miR-34a表达水平及其临床意义.[方法]采用实时反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测75例食管鳞状细胞癌组织及配对癌旁组织中miR-34a的表达水平,2-△△Ct法计算食管鳞状细胞癌组织中miR-34a相对表达量,进一步结合临床、病理及随访资料进行统计分析.[结果]miR-34a在75例食管鳞癌组织中相对表达量高于癌旁组织;多因素分析显示,吸烟史和临床分期是食管鳞癌组织中miR-34a表达的独立影响因素.miR-34a低表达组的无进展生存期和总生存期均明显劣于高表达组;多因素分析显示miR-34a低表达是无进展生存期和总生存期缩短的独立影响因素.[结论]食管鳞癌组织中miR-34a表达水平可作为预测预后的一项重要指标.
关键词： 食管肿瘤 鳞状细胞癌 microRNA-34a 无进展生存期 总生存期 -
miRNA-34a 对人胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响
目的：研究 microRNA-34a(mir-34a)在人胃癌细胞中的表达水平及对胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响。方法通过实时定量 PCR(RT-PCR)检测人正常胃黏膜上皮细胞 GES 及人胃癌细胞株 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平。体外将表达人 mir-34a ( has-mir-34a)慢病毒感染人胃癌 SGC-7901细胞。荧光显微镜观察评估细胞感染情况,MTT 实验、流式细胞术检测感染后胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期及凋亡情况。结果胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平较正常胃黏膜上皮细胞 GES 明显降低,其中以胃癌 SGC-7901细胞降低为明显(P <0．01)。与阴性对照组相比, mir-34a 感染组 SGC-7901细胞增殖明显减慢( P <0．01), G1/ G0期细胞比例显著增加(P <0．05),细胞凋亡率显著升高(P <0．01)。结论 mir-34a 在多种人胃癌细胞,尤其是SGC-7901细胞中呈低表达。 mir-34a 可以抑制胃癌 SGC7901细胞的增殖,诱导细胞周期停滞及细胞凋亡。
关键词： 胃癌 SGC-7901 细胞 微小 RNA microRNA-34a 增殖 凋亡 -
microRNA-34a和Notch1信号通路在颞叶癫痫模型大鼠海马中的表达及作用机制
目的 探讨microRNA(miR)-34a和Notch1信号通路在颞叶癫痫模型大鼠海马中的表达及作用机制.方法 将大鼠根据随机数字表法分为模型组(40只)和对照组(40只),模型组采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品建立颞叶癫痫模型;对照组注射等量9 g/L盐水.在建模后24 h、3 d、7 d、15 d、1 个月采用Racine分级法评估大鼠行为学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应检测海马中miR-34a及Notch1 mRNA 的表达水平;Western blot检测Notch1蛋白的表达水平.结果 模型组miR-34a 24 h、3 d、7 d、15 d时表达水平分别为2.55±0.29、2.11±0.17、1.68±0.49、1.84±0.42,与对照组(1.00±0.00)比较差异均有统计学意义(t=-1.55、-1.11、-0.68、-0.84,均P<0.05).模型组Notch1 mRNA 24 h、3 d、7 d、15 d、1个月时表达水平分别为1.44±0.31、1.27±0.13、1.52±0.28、0.91±0.33、0.80±0.09,24 h和7 d表达水平与对照组(1.00±0.00)比较差异均有统计学意义(t=-0.44、-0.52,均 P<0.05).模型组15 d时Notch1 mRNA表达水平较24 h和 7 d 降低(t=-0.54、-0.62);1 个月时表达水平较24 h、3 d、7 d 降低(t=-0.64、-0.46、-0.72),差异均有统计学意义(均P<0.05).模型组Notch1蛋白24 h、3 d、7 d、15 d、1个月时表达水平分别为0.78±0.09、0.57±0.13、0.55±0.16、0.42±0.13、0.33±0.09,24 h时表达水平与对照组(0.51±0.15)比较差异有统计学意义(t=-0.20,P<0.05).模型组Notch1蛋白15 d时表达水平较24 h降低(t=-0.26,P<0.05);1 个月时表达水平较24 h、3 d降低(t=-0.36、-0.24),差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 颞叶癫痫大鼠模型海马中miR-34a表达水平上调,可能通过激活Notch1信号通路参与癫痫的发生与发展.
关键词： microRNA-34a 颞叶癫痫 Notch1 -
MicroRNA-34a对人晶状体上皮细胞衰老的影响
目的 探讨MicroRNA-34a(MiR-34a)对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)衰老的影响.方法 通过慢病毒介导构建稳定过表达MiR-34a的HLEC-B3细胞株,荧光显微镜下观察细胞转染情况,采用qRT-PCR检测MiR-34的表达.采用β-半乳糖苷酸(SA-β-gal)染色检测HLEC-B3细胞的衰老情况.结果 成功转染的细胞显示红色荧光.MiR-34a组MiR-34a的相对表达量(18.69±3.71)显著高于空载体组(1.00±0.02)(P＜0.05),成功构建过表达MiR-34a的HLEC-B3细胞株.MiR-34a组和空载体组SA-β-gal染色阳性率分别为(87.67±4.51)％、(7.33±3.21)％,MiR-34a组高于空载体组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 过表达MiR-34a促进HLEC衰老,提示MiR-34a可能参与了年龄相关性白内障的形成,有可能成为治疗年龄相关性白内障的新靶点.
关键词： 人晶状体上皮细胞 microRNA-34a 衰老 -
卡铂联合MicroRNA-34a抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖和肿瘤生长的作用研究
目的 探讨卡铂联合MicroRNA-34a对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞的增殖抑制作用和对裸鼠异位瘤的生长抑制作用.方法 将HXO-RB44细胞分成卡铂干预组、MicroRNA-34a干预组、联合干预组和生理盐水对照组.MTT检测卡铂联合MicroRNA-34a干预对HXO-RB44细胞的毒性.流式细胞技术检测卡铂联合MicroRNA-34a干预诱导HXO-RB44细胞凋亡和对细胞周期的影响.构建裸鼠视网膜母细胞瘤异位肿瘤模型,检测卡铂联合MicroRNA-34a干预对裸鼠肿瘤的生长抑制能力.结果 给药48 h后,HXO-RB44细胞的存活率:分别为卡铂干预组(58.5±4.4)％、MicroRNA-34a干预组(64.3±3.1)％、联合干预组(27.8±2.2)％,差异有统计学意义(P＜0.01);HXO-RB44细胞的凋亡率:分别为卡铂干预组(13.5±1.4)％、MicroRNA-34a干预组(8.2±1.1)％、联合干预组(31.5±2.2)％,差异有统计学意义(P＜0.01);联合干预组较生理盐水对照组S期细胞增加,G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞减少(均为P＜0.01);荷瘤裸鼠治疗实验结果显示卡铂干预组、MicroRNA-34a干预组和联合干预组的肿瘤生长抑制率分别为44.6％±1.3％、36.5％±1.3％和75.3％±1.5％,与生理盐水对照组差异均有统计学意义(均为P＜0.01).结论 卡铂联合MicroRNA-34a能够有效抑制HXO-RB44细胞的增殖和肿瘤的生长.
关键词： 卡铂 microRNA-34a 视网膜母细胞瘤 -
MicroRNA-34a对小鼠气道平滑肌细胞增殖和ORMDL3表达的影响
目的 探讨支气管哮喘小鼠模型中microRNA-34a(miR-34a)对气道平滑肌细胞(ASMC)增殖与血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)表达的影响.方法 以卵清蛋白(OVA)诱导复制的小鼠哮喘模型和培养的ASMC为研究对象,筛选与ORMDL3密切相关的miRNA;利用miR-34a-mimic使miR-34a过表达;用苏木精-伊红染色和MTT法探究其对ASMC增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测ORMDL3的表达变化.结果 OVA诱导下小鼠气道组织中miR-34a被抑制(P <0.05).miR-34a-mimic可减少哮喘小鼠ASMC异常增殖(P <0.05);miR-34a-mimic抑制ASMC在490nm下的光密度值和相对细胞活性(P <0.05);miR-34a-mimic下调哮喘小鼠气道组织中ORMDL3的表达,并抑制体外培养ASMC中ORMDL3的表达(P<0.05).结论 miR-34a可抑制ASMC的增殖和ORMDL 3基因表达,为今后哮喘发病机制的研究提供新的思路.
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microRNA-34a对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响
目的 研究microRNA-34a对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响.方法 选取南充市川北医学院附属医院2015年3月至2016年3月收治的100例胶质瘤患者为研究对象,采集胶质瘤组织样本,选取同期在我院接受减压术治疗的40例脑外伤患者为对照,术中采集正常脑组织样本.采用实时荧光定量PCR检测microRNA-34a在胶质瘤组织与正常脑组织样本中表达水平.将转染后人脑胶质瘤细胞系U87分为空白对照组、无义序列转染组及microRNA-34a转染组,检测microRNA-34a对人脑胶质瘤细胞系U87增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响.结果 胶质瘤组织microRNA-34a相对表达量为(0.53±0.48),显著低于正常脑组织的(1.38±0.25),差异有统计学意义(P<0.05).不同恶化程度胶质瘤组织microRNA-34a相对表达量差异有统计学意义(P<0.05).microRNA-34a转染组转染后48 h细胞生长抑制率、转染后细胞凋亡率显著高于空白对照组与无义序列转染组,划痕24 h后细胞迁移数、细胞12 h穿膜数显著低于空白对照组与无义序列转染组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 microRNA-34a具有抑制胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭,促进肿瘤细胞凋亡等作用.
关键词： 胶质瘤 microRNA-34a 细胞生物学 增殖 凋亡 -
MicroRNA-34a对尿路上皮癌细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响
目的 研究microRNA-34a (miR-34a)对膀胱肿瘤细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响.方法 在5637细胞株中过表达miR-34a,运用小室迁移实验和小室侵袭实验检测细胞迁移力和侵袭力;运用血球计数板法和新型四唑氮盐(MTS)法检测细胞增殖力.结果 过表达miR-34a后,5637细胞迁移力和侵袭力均下降(P＜0.01),细胞增殖受抑(P＜0.01).结论 过表达miR-34能抑制膀胱肿瘤细胞株5637的迁移、侵袭和增殖.
关键词： 尿路上皮癌 迁移 侵袭 增殖 microRNA-34a -
RGD修饰共载紫杉醇与microRNA-34a脂质体对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用
目的 探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)修饰共载紫杉醇与microRNA-34a脂质体(RGD miLPs-34a/PTX)的体内药代动力学以及体内对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法 采用荧光分光光度法检测RGD miLPs-34a/PTX的体外血清稳定性和体内药代动力学.构建肺癌裸鼠移植瘤模型,近红外活体成像研究RGD miLPs-34a/PTX在荷瘤裸鼠的体内分布.荷瘤裸鼠治疗实验检测RGD miLPs-34a/PTX对肿瘤的生长抑制作用.结果 RGD miLPs-34a/PTX在50％血清中具有良好的稳定性.药代动力学实验表明,在荷瘤小鼠血液中的microRNA-34a的消除速率明显快于miLPs-34a/PTX和RGD miLPs-34a/PTX组,差异有统计学意义(P＜0.05);活体成像实验结果显示,RGDmiLPs-34a/PTX在肿瘤组织的荧光分布显著强于miLPs-34a/PTX.肿瘤生长抑制实验结果显示,RGDmiLPs-34a/PTX对肿瘤生长的抑制作用显著强于其他脂质体组,差异有统计学意义(P＜0.01).各给药组对肿瘤生长抑制能力显著强于生理盐水组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 体内研究证实RGD修饰的共载紫杉醇和miRNA脂质体能够延长药物体内循环时间,达到长循环效果,具有良好的体内肿瘤靶向性和体内肿瘤治疗效果.
关键词： 整合素受体 紫杉醇 microRNA-34a 肺癌 -
RGD修饰共载紫杉醇与microRNA-34a脂质体靶向抑制A549肺癌细胞的初步研究
目的 制备整合素受体修饰共载紫杉醇(paclitaxel,PTX)和microRNA-34a脂质体(RGDmiLPs-34a/PTX),研究与A549肺癌细胞的亲和力以及对肺癌细胞的靶向抑制效果.方法 采用薄膜分散法制备RGDmiLPs-34a/PTX.考察脂质体的粒径、电位以及包封率;通过定量细胞摄取实验以及定性的共聚焦实验考察A549细胞对普通脂质体(LP)和RGD修饰脂质体(RGDLP)的摄取效率.MTT实验考察不同脂质体对A549细胞的细胞毒性;构建肺癌细胞肿瘤球模型,考察不同脂质体对肿瘤球的穿透能力以及不同载药脂质体对肿瘤球的生长抑制能力.结果 RGDmiLPs-34a/PTX的粒径为(125.0±11.8)nm,电位为(21.00±4.85)mV,PTX与microRNA-34a的包封率分别为81.5％和94.6％.细胞摄取实验结果显示,A549细胞对RGDLP的摄取效率是LP的2.6倍,二者差异具有统计学意义(P＜0.01);定性的细胞摄取实验和肿瘤球穿透实验结果显示RGDLP组的荧光强度明显强于LP组,与定量的实验结果相一致.MTT实验表明RGDmiLPs-34a/PTX对A549肺癌细胞的毒性显著强于miLPs-34a/PTX、RGDmiLPs-34a和RGDLP-PTX;肿瘤球抑制实验结果显示,miLPs-34a/PTX、RGDmiLPs-34a、RGDLP-PTX和RGDmiLPs-34a/PTX分别使肿瘤球体积减小到原体积的81％、77％、64％和37％.与miLPs-34a/PTX、RGDmiLPs-34a、RGDLP-PTX相比,RGDmiLPs-34a/PTX对肿瘤球抑制率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 整合素受体RGD修饰共载紫杉醇和microRNA-34a脂质体具有良好的肺癌细胞靶向性和肺癌细胞抑制作用,是一种潜在高效的肺癌靶向给药系统.
关键词： 整合素受体 microRNA-34a 紫杉醇 脂质体 肺癌 -
宫颈脱落细胞miR34a检测在HR-HPV阳性患者分流中的作用分析
目的 探讨宫颈脱落细胞miR34a检测在HR-HPV阳性患者分流中的作用.方法 采用第二代杂交捕获技术(HC2)进行宫颈癌初筛,HPV阳性者行TCT及miRNA检查.TCT结果异常者(≥意义不明确的非典型鳞状细胞)阴道镜下活检行病理学检查.TCT阴性者行阴道镜检查,阴道镜异常者阴道镜下活检取材,比较不同级别宫颈病变中miR34a水平,探讨miR34a、Pap在宫颈病变中的诊断作用.结果 ①Pap对宫颈高度鳞状上皮内病变预测值的灵敏度为64.90％,特异度为80.70％,AUC为0.728(95％CI:0.657～0.779,P<0.001).②miRNA34a对宫颈高度鳞状上皮内病变预测值的灵敏度为77.00％,特异度为62.30％,AUC为0.824(95％CI:0.756～0.892,P<0.001),cut off值为0.623.③miRNA34a对宫颈高度鳞状上皮内病变预测值的灵敏度高于Pap检测,特异度低于Pap.④宫颈脱落细胞miRAN34a值随着宫颈病变加重逐渐降低.结论 检测宫颈脱落细胞miR34a水平可有效分流HR-HPV阳性患者,敏感性高于Pap检查.
关键词： microRNA-34a 宫颈细胞学检查 HPV 宫颈癌 筛查
