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鼻咽癌基因治疗研究的新进展
目的:总结鼻咽癌基因治疗研究进展,为临床治疗及基础研究提供参考.方法:在万方、中国知网、pubmed数据库检索近年关于鼻咽癌基因治疗的研究资料,并进行综合分析.结果:鼻咽癌基因治疗在基础研究方面取得满意的效果,在临床应用中副作用少、医从性好.具体方法有免疫基因治疗,自杀基因治疗,基因替代治疗,基因沉默治疗和反义基因治疗.结论:基因治疗将成为鼻咽癌治疗的重要手段.
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反义基因治疗对慢性增生性胆管炎的抗增殖作用
目的:探讨并对比PCNA、c-Myc、edc2 kshRNA对PC的过度增殖和成石潜力的影响,以期筛选PC抗增殖治疗的佳靶点.方法:经十二指肠乳头向胆总管内逆行插入尼龙缝合线建立慢性增生性胆管炎的大鼠实验模型.三种反义治疗组则以尼龙缝合为导引向胆总管内分别注入0.5 mL的PCNA、c-Mye或cdc2 k shRNA.结果:PCNA shRNA治疗组的胆道黏膜上皮和胆管壁胶原纤维的过度增殖程度均明显低于c-Myc、cdc2 k shRNA治疗组;此外,PCNAshRNA治疗组胆管壁的黏蛋白基因表达及黏蛋白分泌也低于c-Myc、cdc2 k shRNA治疗组.结论:PCNA shRNA治疗能够更为有效的抑制PC病变胆管的胶原纤维过度增生及黏液过度分泌,更有望达到预防胆道再狭窄和结石术后复发的目的.
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血管内皮生长因子反义cDNA对人肺癌抑瘤作用的体外实验研究
目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)反义cDNA对肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其对肿瘤细胞生长、增殖过程的作用.方法:以脂质体介导VEGF反义cDNA转染肺癌细胞,通过原位杂交法检测细胞VEGF nRNA,免疫组化法检测细胞VEGF蛋白和PCNA增殖活性,ELISA法检测分泌型VEGF蛋白,MTT法测定细胞生长率,研究VEGF反义cDNA对肿瘤细胞的作用.结果:转染后肺癌细胞内源性VEGF mRNA和蛋白的表达受抑,细胞生长及增殖受抑.结论:VEGF反义cDNA转染可降调节肿瘤细胞的VEGF生成并抑制其生长与增殖.
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骨桥蛋白反义基因在肺癌浸润与转移中的作用
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)反义基因对肺癌细胞增殖和浸润转移的影响.方法 (1)PCR扩增获得人OPN基因,pcDNA3.1(+)载体连接.酶切、测序.(2)脂质体介导将pcDNA3.1-ANOPN基因转入ECA 109,G418筛选获得稳定表达ANOPN基因的转染细胞A54-ANOPN,及表达空载体的A54-vect细胞,空白对照A54.RT-PCR检测mRNA.体外观察对比各组间倍增时间、黏附、侵袭及迁移能力的差异.结果 成功构建了pcDNA3.1-ANOPN质粒,测序结果与GenBank中公布的序列同源性为100%.与A54-vect、A54相比,A54-ANOPN细胞OPN mRNA表达明显降低;倍增时间增加;黏附、侵袭及迁移能力明显降低.结论 ANOPN基因的稳定表达明显抑制肺癌细胞的恶性表型.
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骨桥蛋白反义基因在食管癌浸润与转移中的作用
目的:探讨骨桥蛋白(OPN)反义基因对食管癌细胞增殖和转移的影响,为食管癌基因治疗提供理论依据.方法:PCR扩增获得人OPN基因,连接pcDNA3.1(+)载体,酶切、测序.脂质体介导将pcDNA3.1-ANOPN基因转入ECA 109,G418筛选获得稳定表达ANOPN基因的转染细胞ECA-ANOPN、表达空载体的ECA-vect细胞及空白对照ECA.RT-PCR检测ANOPN mRNA、免疫组织化学检测ANOPN基因蛋白表达.体外观察各组细胞生长速度、倍增时间,Transwell小室法检测细胞黏附、侵袭迁移能力的差异.结果:载体构建正确,测序结果与GenBank中公布的序列同源性为100%.与ECA-vect、ECA组比较,ECA-ANOPN细胞OPN的表达率明显降低(P<0.05),生长速度明显减慢(P<0.05),倍增时间增加(P<0.05),透膜细胞数明显降低(P<0.01).结论:ANOPN基因的稳定表达明显抑制ECA 109细胞的恶性表型.
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婴幼儿呼吸道合胞病毒感染的治疗
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus RSV)是引起婴幼儿毛细支气管炎重要的病原体.其主要临床表现为喘息.部分患儿可出现反复喘息发作而发展为哮喘.对RSV感染尚无特效治疗药物,仍然以支持对症治疗为主,目前的研究热点是中西医结合治疗,反义基因治疗,高渗盐水雾化吸入治疗等.
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反义IGF-1RNA基因治疗脑胶质瘤的实验研究
目的构建反义胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达质粒(pCEP4-IGF-1A)治疗大鼠C6脑胶质瘤.方法 RT-PCR扩增300bpIGF-1cDNA,测序,构建反义IGF-1表达质粒,体外转染C6细胞,观察其体外增殖速率及对C6胶质瘤的治疗作用.结果反义IGF-1序列正确,反义IGF-1A转染的C6细胞生长明显受抑,体内成瘤性消失,荷瘤鼠肿瘤全部消失,6个月观察期内肿瘤无复发.结论反义IGF-1表达质粒能抑制C6细胞体外生长,体内杀伤肿瘤效果明显.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 胶质瘤 反义基因治疗 -
反义血管内皮生长因子治疗原发性肝癌
原发性肝癌(Hepatic cell cancer,HCC)是我国常见恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率居恶性肿瘤的第二位.到目前为止,手术切除肿瘤仍是公认的治疗肝癌的首选方法,然而其根治率仅占15%,大部分病人对其他疗法如化疗、放疗等不甚敏感.近来,生物治疗已经成为人们关注的一个焦点,它包括免疫治疗和基因治疗,其中反义基因治疗已经成为HCC生物疗法的第二代新型技术.下面就血管内皮生长因子反义基因(antisense vascular endothelial growth factor,antisense VEGF)对HCC治疗作综述.
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阻断转化生长因子β1自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响
[目的]观察阻断转化生长因子β1(TGFβ1)自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响.[方法]将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG-63,G418筛选14 d后获得转染细胞系MG-TGFβ1(-).取MTT法检测转染细胞增殖活性,并观察细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力.[结果]与MG-63和空载体转染细胞MG-pcDNA3相比,MG-TGFβ1(-)细胞增殖活性明显受到抑制.MG-TGFβ1(-)的软琼脂克隆形成数(28.2±5.6)比MG-63组(48.6±8.1)和MG-pcDNA3组(45.2±4.7)明显减少,裸鼠体内形成肿瘤的体积(83.4±27.4)mm3也明显小于MG-63组(191.3±21.5)mm3和MG-pcDNA3组(204.2±30.7)mm3.[结论]反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型,进一步的研究将有助于提高骨肉瘤的治疗效果.
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端粒酶反义hTERT基因治疗对卵巢癌细胞生长抑制作用及其对顺铂疗效的影响
目的:探讨端粒酶反义hTERT对卵巢癌细胞生长抑制作用及对顺铂疗效的影响.方法:以TRAP-PCR-ELISA法检测卵巢癌SKOV3、ES-2 细胞中端粒酶活性;以MTT法及流式细胞术测定反义hTERT对卵巢癌细胞生长的抑制作用、细胞周期阻滞及细胞凋亡的诱导作用及对CDDP疗效的影响.结果:SKOV3及ES -2细胞中端粒酶活性分别为2.17U、2.27U.反义hTERT能降低卵巢癌细胞端粒酶活性 ,以剂量依赖性方式抑制癌细胞生长;反义hTERT 10μmol/L作用24、72h后G1期细胞所占比例分别为33.16%、53.47%,细胞凋亡发生率分别为11.66%、13.93%;而联合应用顺铂时 ,G1期细胞比例分别为42.17%、38.98%,细胞凋亡发生率分别为18.66%、27.61%.当反义hTERT取10、20、40μmol/L时,卵巢癌SKOV3、ES-2细胞对顺铂的敏感性分别增加10. 4 ～25.5倍、11.7～20.2倍.结论:端粒酶反义hTERT基因治疗能通过抑制端粒酶活性、增强细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡等途径抑制卵巢癌细胞生长,与CDDP合用能增强对癌细胞的杀伤作用.
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TGF-β2反义寡核苷酸抑制抗青光眼术后滤过泡瘢痕的实验研究
目的观察TGF-β2反义寡核苷酸对青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生的影响.方法制备兔青光眼滤过手术模型.右眼结膜下注射TGF-β2反义寡核苷酸(A组);左眼分别注射TGF-β2错义寡核苷酸(B组)、PBS(C组),于造模后第4、7、14、28 d取术区结膜囊标本进行免疫组织化学染色和电镜观察.结果A组眼压术后第14 d和第21 d比B组(P＜0.01)和C组(P＜0.05)显著降低;滤泡平均生存时间A组(17.2 d)较B组(14.5 d)、C组(13.5 d)明显延长(P＜0.05);A组α-SMA和PCNA阳性成纤维细胞数明显少于B、C组;成纤维细胞的超微结构A组和B、C组比较无明显区别.结论TGF-β2反义寡核苷酸可降低兔青光眼滤过术后眼压,延长滤泡生存时间,抑制兔青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生.
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反义VEGF对视网膜新生血管的干预研究
目的将反义VEGF质粒用脂质体包裹注入视网膜新生血管模型小鼠眼中,观察其对新生血管的抑制作用.方法将出生7 d的C57BL/6J小鼠44只放人高氧环境中饲养,另外8只于空气环境中饲养.5 d后出高氧环境,随机取36只分成3组.将质粒与脂质体以1:5(W/V)的比例混合,室温下静置30 min.大剂量组玻璃体腔内注入质粒PCR3.1/Anti-VEGF121 0.085 μg;小剂量组玻璃体腔内注入质粒PCR3.1/Anti-VEGF121 0.038 μg;PCR3.1组玻璃体腔内注入质粒PCR3.1 0.053μg,之后空气环境饲养5 d.解剖镜下视网膜铺片观察视网膜血管的分布情况;组织切片任意选取不包括视乳头的20张切片,计数突出内界膜位于视网膜表面的细胞核数;VEGF免疫组化染色阳性细胞.结果视网膜铺片原中周部血管紊乱分布部位,血管分布均匀.而对照组(注射PCR3.1)则无变化.内皮细胞计数小剂量组、大剂量组较高氧组、对照组显著减少,在P17的VEGF在毛细血管的血管内皮细胞的表达均有显著降低,但程度上有差异.结论反义VEGF质粒对于视网膜新生血管的产生有抑制作用,在一定程度上减少了视网膜新生血管的产生,对血管内皮细胞表达VEGF有抑制作用.
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人NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的探讨人NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞株增殖和凋亡的影响,探索胃癌治疗的新方法.方法采用脂质体法将构建好的人NHE1基因反义真核表达载体转染至SGC-7901胃癌细胞中,比较观察细胞转染前后生长曲线、双层软琼脂克隆形成能力、裸鼠成瘤能力以及细胞周期和细胞凋亡率的变化.结果 NHE1反义基因能使SGC-7901胃癌细胞生长速度减慢,双层软琼脂集落形成能力、体外生长增殖能力降低,细胞凋亡率增加,裸鼠体内成瘤能力显著降低.结论反义NHE1基因能抑制SGC-7901胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有良好的胃癌治疗效果,提示NHE1基因可成为胃癌治疗的新靶点,具有一定的临床应用前景.
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人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用
目的探讨人端粒酶蛋白催化亚单位(hTRT)反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法采用基因重组技术,构建hTRT正、反义真核表达载体,采用脂质体法导入SGC-7901细胞,检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细胞周期、软琼脂中克隆形成率及裸鼠体内成瘤性的变化。结果成功构建hTRT正、反义真核表达载体，并导入SGC-7901胃癌细胞株中，获得稳定表达正、反义基因的细胞系7901-S、7901-AS1和7901-AS2。7901-AS1和7901-AS2出现显著生长抑制现象，端粒酶活性明显下降，细胞凋亡增加，异型性减小，G0/G1期细胞增加,S和G2M期细胞减少,增殖指数减小,软琼脂中无克隆形成，裸鼠体内成瘤消失。结论 hTRT反义基因治疗可以明显抑制SGC-7901细胞的增殖，部分逆转肿瘤细胞的恶性表型，其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的，提示hTRT基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。
关键词： 人端粒酶蛋白催化亚单位 反义基因治疗 胃癌 -
NHE-1反义基因对胃癌细胞的酸化作用及其意义
目的 探讨Na+-H+交换泵-1(Na+-H+ exchanger1,NHE-1)反义基因转染对人胃癌细胞内pH值(intracellular pH,pHi)的调节作用及其在肿瘤基因治疗中的价值.方法 构建人NHE-1基因反义真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中, 采用荧光探针检测转染前后细胞内pH值的变化以及对细胞增殖和凋亡的影响.结果 转染反义基因的细胞pHi明显降低,增殖能力降低,细胞凋亡率增加.结论 NHE-1基因的表达在肿瘤细胞pHi及增殖和凋亡调节中起重要作用.
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hTRT反义基因转染对肝癌细胞端粒酶亚单位及细胞周期的影响
目的探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位(Human telomerase reverse transcriptase, hTRT)反义基因转染对HepG2肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响.方法采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2细胞(HepG2-S)以及hTRT反义基因转染的HepG2细胞(HepG2-AS)的细胞周期,采用RT-PCR法检测上述细胞hTRT、端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白1(TP1)以及c-myc和bcl-2基因的变化,同时采用Western blot检测hTRT蛋白质的变化.结果 HepG2-AS出现G0/G1期阻滞,增殖指数增加,凋亡率亦明显增加,进一步研究发现,HepG2-AS端粒酶亚单位hTRT在蛋白质和mRNA水平均表达减少,而TP1、hTR无明显变化,bcl-2和c-myc mRNA的表达亦明显下调.结论 hTRT反义基因不仅可以下调HepG2细胞 hTRT mRNA和蛋白质的表达,而且可以下调c-myc、bcl-2 mRNA的表达,从而一方面降低端粒酶活性,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率,抑制肝癌细胞的生长.
关键词： 人端粒酶蛋白催化活性亚单位 反义基因治疗 肝癌 -
WT1基因与白血病靶向治疗
WT1基因编码一种双向转录因子,对人类泌尿生殖系统的发育和wilms'瘤的发生发展有重要意义.WT1基因也参与人类的造血调控,参与造血细胞增殖、分化、凋亡等各个过程及白血病的形成,在多种白血病中均有异常高表达,故被认为是一种新的白血病抗原,用于制备白血病疫苗、表达WT1白血病细胞的体外净化及体内抗原特异性治疗,近年来利用反义RNA技术进行反义基因治疗也有较快发展.WT1成为白血病基因治疗和特异性免疫治疗的新靶点.
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NHE1反义基因磁性纳米微粒对胃癌细胞NHE1蛋白表达及裸鼠成瘤力的影响
目的:探讨NHE1反义基因磁性纳米微粒对胃癌细胞NHE1蛋白表达及裸鼠成瘤力的影响,探索胃癌基因治疗新方法.方法:构建NHE1反义基因真核表达载体和NHE1反义基因磁性纳米微粒,将NHE1反义基因转染至SGC-7901胃癌细胞中,通过免疫组织细胞化学SP法检测NHE1蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,观察双层软琼脂集落形成能力及转染前后生长曲线的变化.电镜水平比较观察转染与未转染细胞形态学变化,并观察裸鼠成瘤能力的改变.结果:氧化铁磁性纳米颗粒成功地将NHE1反义基因转染至SGC-7901胃癌细胞中,转染NHE1反义基因的SGC-7901胃癌细胞NHE1蛋白表达降低,细胞生长速度减慢、体外生长增殖能力降低,透射电镜下细胞线粒体数量增多、体积增大,内质网扩张,核偏向一侧,极性增强,裸鼠成瘤能力下降.结论:NHE1反义基因磁性纳米微粒能使SGC-7901胃癌细胞的NHE1蛋白表达明显下调,裸鼠成瘤能力降低,NHE1蛋白在胃癌细胞生长中起重要作用,NHE1 基因可能成为基因治疗胃癌的一个理想靶点.
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NHE1反义基因磁性纳米微粒对SGC-7901胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨NHE1反义基因磁性纳米微粒对SCC-7901胃癌细胞株增殖和凋亡的影响,探索胃癌基因治疗的新方法.方法:构建NHE1反义基因真核表达载体和NHE1反义基因磁性纳米微粒,将NHE1反义基因转染至SGC-7901胃癌细胞中,比较观察细胞转染前后生长曲线、细胞周期和细胞凋亡率的变化.结果:氧化铁磁性纳米颗粒成功地将NHE1反义基因转染至SGC-7901胃癌细胞中.NHE1反义基因能使SGC-7901胃癌细胞生长速度减慢、体外生长增殖能力降低,转染NHE1反义重组质粒的SGC-7901胃癌细胞增殖指数为34.73%,低于SGC-7901细胞的38.95%;NHE1反义基因使SGC-7901胃癌细胞凋亡率增加,转染NHE1反义重组质粒的SGC-7901胃癌细胞凋亡率为11.75%,显著高于SGC-7901胃癌细胞凋亡率(3.85%,P＜0.01).结论:NHE1反义基因磁性纳米微粒能抑制SGC-7901胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有良好的治疗效果,有一定的临床应用前景.
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TGF-β2反义寡核苷酸抑制抗青光眼术后滤过泡瘢痕的实验研究
目的:观察TGF-β2反义寡核苷酸对青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生的影响.方法:制备兔青光眼滤过手术模型.右眼结膜下注射TGF-β2反义寡核苷酸(A组);左眼分别注射TGF-β2错义寡核苷酸(B组)、PBS(C组),于造模后4,7,14,28 d取术区结膜囊标本进行免疫组织化学染色和电镜观察.结果:A组眼压术后14 d和21 d比B组(P＜0.01)和C组(P＜0.05)显著降低;滤泡平均生存时间A组(17.2 d)较B组(14.5 d)、C组13.5 d)明显延长(P＜0.05);A组α-SMA和PCNA阳性成纤维细胞数明显少于B、C组;成纤维细胞的超微结构A组和B、C组比较无明显区别.结论:TGF-β2反义寡核苷酸可降低兔青光眼滤过术后眼压,延长滤泡生存时间,抑制兔青光眼滤过术后结膜囊成纤维细胞的转化、增生.
