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可利用小鼠诱导多能性干细胞的建立及鉴定
目的 建立小鼠诱导多能性干细胞(iPSCs)模型,为干细胞和iPSCs研究提供可利用资源.方法 取C57BL/6J小鼠12.5d的胚胎成纤维细胞,感染含有Sox2、Oct4、Klf4和c-Myc的慢病毒进行重编程.病毒感染后12d挑取iPSCs的克隆进行扩大培养,进行碱性磷酸酶染色鉴定.体外悬滴培养检测拟胚体(EB)的形成,并皮下接种BABL/c裸鼠检测畸胎瘤形成.全反式维甲酸诱导iPSCs克隆株定向分化.PCR法进行种属鉴定并检测支原体.结果 得到了12个碱性磷酸酶阳性的小鼠iPSCs克隆株,体外可以形成拟胚体,其中9个克隆株可以在BALB/c裸鼠体内形成畸胎瘤.全反式维甲酸可诱导iPSCs定向分化为平滑肌细胞.iPSCs克隆株种属鉴定为鼠源性,无支原体的污染,细胞资源中心入库保藏.结论 成功建立了小鼠iPSCs模型,为干细胞、iPSCs重编程机制及定向分化研究提供可利用的资源.
关键词： 诱导多能干细胞 病毒感染 碱性磷酸酶染色 反转录-聚合酶链反应 小鼠 -
毛细胞白血病并发乳腺癌治疗缓解一例
患者,女,54岁.于2004年12月查体发现血小板减少,肝脾正常,骨髓增生减低,有核细胞较少,骨髓涂片及血片中淋巴细胞比例明显增高,中性粒细胞碱性磷酸酶染色阳性率90%,积分245分,糖原染色(+),当地医院考虑慢性再生障碍性贫血,给予十一酸睾酮、泼尼松等药物治疗后复查血小板计数为86×109/L.
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不同浓度厄贝沙坦对前成骨细胞分化和矿化的影响
背景：有研究发现，血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对骨的保护作用强于较血管紧张素转换酶抑制剂。目的：观察不同浓度血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦对小鼠前成骨细胞分化和矿化的影响。
方法：选取对数生长期小鼠前体成骨细胞株MC3T3-E1，分4组培养，分别加入含0(对照)，0.001，0.01，0.1 mmol/L厄贝沙坦的成骨诱导培养基培养。诱导培养10 d，采用碱性磷酸酶染色观察细胞分化情况；诱导培养21 d，采用茜素红染色观察细胞矿化情况；诱导培养1，4，7，14，21 d，RT-PCR检测细胞成骨细胞内骨钙素、碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2mRNA的相对表达量。
结果与结论：①碱性磷酸酶染色：0.001，0.01，0.1 mmol/L厄贝沙坦组碱性磷酸酶活性均高于对照组(P<0.05)，其中以0.01 mmol/L效果明显；②茜素红染色：0.001，0.01，0.1 mmol/L厄贝沙坦组钙结节数量及面积均高于对照组(P<0.05)，其中以0.01 mmol/L效果明显；③RT-PCR检测：0.01 mmol/L厄贝沙坦组诱导培养不同时间点的碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙素mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.05)；④结果表明：0.01 mmol/L厄贝沙坦可显著促进成骨细胞的分化和矿化。 -
大鼠仔鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养与鉴定
目的分离培养骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行鉴定.方法取周龄大鼠骨髓用percoll分离液分离,DMEM(含20%胎牛血清)培养、传代,碱性磷酸酶和苏丹Ⅳ染色,流式细胞仪测MSCs表面标志CD44和CD45.结果碱性磷酸酶染色和苏丹Ⅳ染色阴性,CD44、CD45表达甚微.结论所分离培养的细胞为未分化的具有较强增殖能力的细胞,可认为是间充质干细胞.
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胸腹水脱落细胞碱性磷酸酶染色的临床价值
目的 探讨胸腹水脱落细胞碱性磷酸酶染色的临床应用价值.方法 对32例恶性与31例非恶性疾病患者的胸腹水脱落细胞进行碱性磷酸酶染色分析.结果 32例恶性肿瘤患者胸腹水脱落细胞碱性磷酸酶染色中有14例(占43.8%)同时可见单个散在及成团脱落细胞呈不同程度阳性(2分～4分);而非恶性组中仅2例(占6.5%)偶见单个散在脱落细胞呈阳性,且其阳性强度都很低(均为1分),两组比较差异有极显著性(P＜0.001).结论 作胸腹水脱落细胞碱性磷酸酶染色对协助临床鉴别诊断良、恶性疾病具有重要参考价值.
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内毒素性休克早期猕猴肾脏超微结构的改变及酶细胞化学观察
目的:探讨内毒素休克早期猕猴肾脏的损伤.方法:11只猕猴随机分成2组:对照组5只,静脉注射生理盐水;内毒素组6只,静脉注射LPS,剂量为2.8 mg/kg.内毒素攻击后120 min,处死动物,取肾脏标本采用光镜、电镜铅离子捕获法做超微结构碱性磷酸酶(ALPase)及酸性磷酸酶(ACPase)细胞化学检查.结果:组织学观察显示肾髓质、皮质结构完整,肾小球结构完好;透射电镜可见模型组肾小球血管内皮和足突细胞损伤、血液成分渗出;肾小管上皮细胞损伤.肾实质细胞内溶酶体破坏;电镜酶细胞化学可见:模型组酸性磷酸酶活性增强,溶酶体颗粒增多.肾小管上皮细胞碱性磷酸酶活性急剧增强,在细胞器内弥散分布.对照组无明显病变.结论:在猕猴内毒素性休克早期,溶酶体增多和损伤引起了肾小球和肾小管损伤.在此同时,肾脏实质细胞内中和内毒素的作用也增强.
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202例感染性骨髓象分析
目的：分析202例初诊患者感染性骨髓象的特点，为临床上感染的诊断提供依据。方法回顾性分析2014年1月至2015年2月江西省人民医院202例初诊感染性骨髓象患者，分析其骨髓片与血片中性粒细胞碱性磷酸酶染色结果。以同一时间段31例骨髓移植供体或血象、骨髓象均大致正常患者为正常对照组。结果两组临床表现中除发热有明显差异外，其它均无显著差异。202例感染性骨髓象报告中增生极度活跃2例（占0.99%）、明显活跃83例（占41.09%）、活跃108例（占53.47%）、减低7例（占3.47%）、极度减低2例（占0.99%）。31例正常对照组中明显活跃5例（占16.13%）、活跃26例（占83.87%）、减低1例（占3.13%）。202例感染性骨髓象粒系所占比例22.25%-87.00%(64.28%±10.69)，与正常对照组40.50%-60.50%(53.14±5.51)%比较P值＜0.05有统计学差异。202例感染性骨髓象患者中186例中粒细胞左移，所有患者均检出中毒颗粒，中性粒细胞胞质内空泡变性34例，核固缩、核溶解改变21例和杜小体3例。正常对照组无形态学改变。202例感染性骨髓象患者碱性磷酸酶阳性率36%-100%（88%±14），积分为102%-400%（305.31%±80.85）分。正常对照组NAP阳性率7%-42%（27%±6），积分为11%-96%（59.5%±13.8）分。两组比较P值＜0.01，有统计学差异。结论感染性骨髓象特点是粒细胞系统比例绝对增加，粒细胞系统出现形态学的改变及碱性磷酸酶染色阳性率与积分增加，这可以为临床上感染的诊断提供依据。
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两种成熟中性粒细胞碱性磷酸酶染色积分比较
目的 比较中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色后,中性分叶核粒细胞及中性杆状核粒细胞NAP阳性率及积分的差异.方法 各种疾病患者36例.取每例患者骨髓片1张,进行NAP染色.中性分叶核粒细胞及中性杆状核粒细胞分别计数NAP阳性率及积分.结果 中性分叶核粒细胞NAP阳性率、积分均数分别为(69.92±20.92)%、116.11±67.49;中性杆状核粒细胞NAP阳性率、积分均数分别为(35.83±23.70)%、54.36±50.29;两种细胞NAP阳性率呈正相关(r＝0.671 0);两种细胞NAP积分呈正相关(rs＝0.767 7).结论 中性分叶核粒细胞NAP阳性率、积分约为中性杆状核粒细胞的2倍,并呈明显正相关.某些疾病引起中性粒细胞核左移或骨髓两种细胞比例改变,可能会伴随NAP积分改变.这对研究疾病NAP积分改变机制具有重要意义.
