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新生幼虫期特异性基因(T668 cDNA)文献资料
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旋毛虫新生幼虫期特异性T668 cDNA在大肠埃希菌中的表达及鉴定
目的对旋毛虫新生幼虫期特异性T668 cDNA进行表达及鉴定,以获得基因工程抗原. 方法应用PCR技术,从pBK-CMV-T668重组质粒中扩增到不含信号肽序列的T668 cDNA片段,将目的基因克隆于原核表达载体pET28a(+),构建pETT668重组质粒,再将其转化到E. coli表达菌株DE3感受态细胞中,经IPTG诱导表达,以SDS-PAGE鉴定表达产物. 结果 pETT668表达蛋白的分子质量单位为49 ku,且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加,诱导5 h时表达量达到高峰;薄层扫描结果显示,目的蛋白占菌体总蛋白的34.6 %.Western-blotting 检测显示,表达蛋白可被感染旋毛虫家猪血清所识别. 结论旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在大肠埃希菌中获得高效表达,且表达蛋白具有良好的抗原性.
关键词： 旋毛虫 新生幼虫期特异性基因(T668 cDNA) 原核表达 鉴定
