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EPEC粘附相关蛋白融合表达载体的构建及表达
目的 构建与EPEC粘附相关蛋白IntiminC300、EspA、BfpA融合表达载体,并进行表达. 方法 用PCR方法从EPEC染色体中调取intiminC300、espA、bfpA基因,用基因重组的方法把3个基因片段用2个(Gly4Ser)3连接肽串联克隆到载体pQE30的多克隆区,转化宿主菌M15,用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot检测表达的融合蛋白. 结果 酶切和测序表明成功构建了融合表达载体,SDS-PAGE检测表达蛋白的分子质量单位分别为36、43和76 kd,与理论值相符,Western blot显示表达的融合蛋白均能被抗His标签抗体识别. 结论 本研究成功构建了EPEC粘附相关融合蛋白表达载体,并表达目的蛋白,为进一步研究融合蛋白的免疫原性奠定了基础.
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上海市浦东新区致泻性大肠埃希菌病原谱的建立和分析
目的 建立基于分子生物学技术结合传统分离方法检测5种致泻性大肠埃希菌(DEC),并应用于浦东新区腹泻人群的DEC监测,从而构建DEC感染病原谱,以了解浦东新区感染性腹泻患者DEC的感染情况.方法 从GenBank基因数据库中筛选5种DEC毒力基因序列,合成引物探针,优化设计TaqMan实时荧光PCR法结合传统分离方法,终获得单克隆菌株.应用该方法对2014年的11家腹泻监测点1 846份粪便拭子进行DEC检测.结果 1846件粪便拭子中DEC总阳性率为14.90％(275/1846),其中检出致病性大肠埃希菌102株(5.53％),产毒性大肠埃希菌102株(5.53％),侵袭性大肠埃希菌3株(0.16％),聚集性大肠埃希菌68株(3.68％).结论 TaqMan实时荧光聚合酶链反应(PCR)结合传统分离方法分离DEC体现出非常高的准确性和检测效率,同时避免了志贺菌的漏检;为期1年的监测数据显示,DEC已成为细菌性感染性腹泻病原谱中首位病原,其组成结构呈多样性及显著的季节性特点.
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4株EPEC(O111:K58)的分离鉴定及血清学试验
[目的]探讨引起食物中毒的致病性大肠埃希菌(EPEC)O111:K58的分离鉴定及血清学试验.[方法]依据GB/T 4789.6-2003对4份食物中毒患者肛拭或粪便进行培养分离,经染色镜检,生化反应,血清学试验作出鉴定,并对该起食物中毒进行流行病学调查.[结果]从食物中毒患者的3份肛拭和1份粪便均检出并确证为致病性大肠杆菌EPEC(O111:K58);并确定导致食物中毒的病因是由致病性大肠肝菌EPEC(O111:K58)引起.[结论]致病性大肠埃希菌引起的食物中毒可达到快速检验和鉴定.
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致泻大肠埃希菌实验室检测工作的探讨与分析
致泻大肠埃希菌引发的肠道感染疾病越来越多,在肠道病原菌中所占比重已超过志贺菌成为常见的腹泻病原菌[1,2].近年来,嘉兴市陆续出现了多起由该菌引起的食物中毒和门诊病例,2002年本市所辖某县检出了一例由O157:H7(EHEC)引起的病例[3],2005年在本市食物中毒和门诊病例的腹泻病人标本中陆续检出3株与腹泻有关的O125:K70(EPEC)、O164:K?(EIEC)、O25:K19(ETEC),这引起了笔者的高度重视.
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2010年福建南平及永安监测点致泻大肠杆菌的监测报告
目的:为了解福建省腹泻病人中致泻大肠杆菌的感染情况.方法:应用多重PCR或单重PCR方法检测致泻大肠杆菌的EPEC/EHEC eaeA基因、EHEC stx基因、EAEC aggR基因、EIECipaH、EIEC virA、ETEC ST、ETEC LT、EPECbp基因.API 20E生化鉴定条进行生化试验.血清学鉴定.结果:2010年度共分离得19株致泻大肠杆菌,检出率为10.9％.1株EAEC;1株tEPEC；4株aEPEC; 13株ETEC.19株分离的致泻大肠杆菌经API 20E鉴定均为大肠埃希菌.1株tEPEC与EPEC三种多价诊断血清型均不凝集,而1株aEPEC血清型为O111:K58(B4).13株ETEC菌株血清型:多数为O6:K15,1株O25:K19(L),3株未能分型.结论:监测结果对于我们了解福建省致泻大肠杆菌感染情况,预警潜在发生疫情的可能性有其重要性.这些菌种的获得可以为下一步研究其毒力特征、分子分型及耐药性积累原始材料.
