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应用Vero细胞制备狂犬病疫苗适条件的研究
我国目前用于预防狂犬病的主要是地鼠肾细胞疫苗,其产量和质量尚不能满足防病、灭病的需要.Vero细胞经WHO检定合格并推荐作为生产人用灭活狂犬病疫苗的传代细胞,不仅来源方便,繁殖速度快,维持时间长,容易控制外源因子污染,而且对狂犬病毒敏感,适合大规模生产.为此,我们对狂犬病毒在Vero细胞上传代的适条件进行了研究.
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病毒外源因子检测方法的探讨
目的对病毒类制品的外源因子检测方法进行验证和探讨.方法采用动物实验法观察动物病、死等感染情况;采用细胞培养法通过观察细胞病变及血吸附试验来判定外源因子感染情况.结果动物实验法和细胞培养法均能从不同的侧面反映出毒种或者疫苗的外源因子污染情况.结论动物实验法和细胞培养法可用于病毒类制品的毒种选育和疫苗生产中的外源因子检测,但在反映是何种外源因子污染上仍有不足.
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单克隆抗体在甲肝减毒活疫苗毒种检定中应用
目的利用单克隆抗体代替常规的人、猴免疫血清进行甲型肝炎减毒活疫苗毒种外源因子检查及鉴别试验.方法选择适宜的单克隆抗体浓度与甲肝病毒进行中和试验,观察单克隆抗体的中和作用;利用单克隆抗体中和毒种,进行外源因子检查,并应用于鉴别试验.结果此单克隆抗体可中和105细胞培养半数感染量(CCID50)甲肝病毒,比人、猴免疫血清的中和能力高约100倍;将此高效价的单克隆抗体中和毒种后进行血吸附及非血吸附外源因子检查,结果均为阴性;此单克隆抗体还可用于毒种鉴别试验.结论此高效价的单克隆抗体可代替人、猴免疫血清应用于毒种的外源因子检查及鉴别试验.
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柱层析法纯化传代Vero细胞狂犬病疫苗上样量的选择
传代Vero细胞狂犬病疫苗较原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗具有效价高,工艺简单,无外源因子污染,易于大规模生产的优点.其浓缩液经过Sepharose 4FF凝胶柱层析纯化后[1],其杂蛋白去除率可达99%以上,一、二期临床试验证明副反应率极低,且免疫效价可达4.5IU/ml以上,高于<中国生物制品规程>所规定的2.5IU/ml要求.在深入研究纯化工艺佳条件时,发现待纯化的浓缩疫苗上样量的多少直接影响纯化后疫苗的质量.对此,我们做了研究,结果报告如下.
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新生牛血清中微生物的电镜检测及结果分析
目的探索利用电镜快速、有效的进行新生牛血清外源因子检测.方法利用膜表面富积法制备新生牛血清样品,在电镜下观察样品,并与其它检测方法比较.结果利用电镜检查,实验组的外源因子检测阳性率远高于对照组;所检市售国内外品牌新生牛血清均有不同程度的外源因子存在.结论电镜法检测新生小牛血清是一种快速、广谱的外源因子检测方法,并具有检测精度高的优点;它为新生牛血清的质量监测提供了一种新的参比方法.
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细胞培养用牛血清现状与进展
牛血清用于细胞培养已超过50年,虽然其污染外源因子的风险不能完全排除,但是至今许多贴壁细胞系和原代细胞还需采用添加牛血清的培养基进行大规模培养.本文综述了牛血清的基本营养成分、生长因子和其他功能性成分以及牛血清中常见的外源病毒及应检测的病毒种类,并比较屠宰法和供体牛法获取血清的优缺点.
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我国生物制品生产用细胞外源因子污染情况检测
目的 对我国目前生物制品生产用细胞外源因子污染情况进行检测.方法 按照《中国生物制品规程》2000版规定的细胞外源因子检测方法,对我国生物制品生产用细胞进行细菌、真菌、支原体及一般外源病毒污染检测.结果 自2003～2006年3月间共检测了用于生物制品生产用细胞库细胞79株.结果显示,被检测的79株细胞中,支原体污染细胞10株,污染阳性率为12.7%;外源病毒污染细胞5株,污染率为6.3%;这5株外源病毒污染的细胞中,2株293细胞体外接种至人二倍体细胞后,致细胞形态明显异常;2株Vero细胞接种鸡胚后,致鸡胚全部死亡;1株Vero细胞接种乳鼠及成鼠后第7天,致接种动物全部死亡,组织病理学检查结果显示,接种待检细胞组小鼠脑组织有不同程度的病变.结论 目前我国生物制品生产用细胞存在一定程度的外源因子污染.
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关于加强生物制品生产用胰酶质量控制的思考
采用细胞培养技术获得疫苗抗原成分或重组表达的目的蛋白,是当前世界各国生物制品普遍采用的生产方式.细胞培养过程中,通常使用适宜浓度的胰蛋白酶(简称胰酶),将细胞从培养容器表面消化下来,进行细胞传代培养,或者将组织消化成含有单个细胞的悬液,再形成次代细胞.胰酶除了具有消化细胞的功能外,在某些病毒性疫苗生产过程中,如细胞培养制备的流感疫苗[1]和轮状疫苗[2],往往在病毒增殖培养阶段加入适量的胰酶作用于病毒抗原,暴露与细胞结合的受体位点,可以增加病毒的活性.对于某些重组制品,如重组胰岛素,通常使用胰酶作为剪切酶,将胰岛素原转化为具有生物活性的胰岛素[3].
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国内外关于人用疫苗病毒安全性检测的研究
人用疫苗产品安全性检测的重点是确定生产基质及原辅料有无潜在病毒污染.按照2010版中国药典(以下简称CP)病毒外源因子检查,并与欧洲药典7.0版(以下简称EP7.0)和美国药典(以下简称USP34/NF29)进行比较,发现2010版CP在细胞基质病毒外源因子检测要求上比2005版CP有较大的提高,并对检测结果有效性的控制进一步加强.USP34/NF29规定检测的病毒种类繁多,并且根据种属来源的特异性及病毒的亲嗜性,列出了敏感指示细胞系,而2010版CP对上述部分内容未作规定或欠详细表述.因此在今后药典的标准提高方面,应结合国内外相关病毒外源因子检测的实际情况,加强疫苗安全性；以EP7.0或USP34/NF29标准为依据进行药品研发及药品审评工作的人员应注意其中的差别,勿混淆套用.
