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广州地区汉族人群人类血小板同种抗原及HLA-Ⅰ抗原基因分型库的建立
目的 建立广州地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1-6、9及15 系统和HLA- Ⅰ抗原基因分型库, 探讨其基因多态性的分布,为有效避免血小板输注同种免疫的发生提供实验基础.方法 随机抽取广州地区无血缘关系的健康机采血小板无偿献血者(均为汉族)的血样805份,采用PCR-SSP 方法做HPA-1-6 、9及15系统基因分型,利用Luminex-SSO 方法做HLA-A、B、Cw抗原分型.结果 HPA的基因频率分别为HPA-1a 0.998、 1b 0.002, 2a 0.952、2b 0.048,3a 0.553、3b 0.447, 4a 0.999、4b 0.001,5a 0.976、5b 0.024,6a 0.982、6b 0.018,9a 1.000、9b 0.000, 15a 0.518、15b 0.481;HPA-3、15a/b对偶抗原有aa、ab和bb 3种表型,HPA-1、2和4-6未发现bb表型, HPA-9未发现ab、bb表型;HPA-3a、3b,15a、15b的不配合率高.经χ2 检验, 实验结果符合Hardy-Weinberg 遗传定律.HLA- Ⅰ抗原基因频率较高的表达有A·02 0.286 A·24 0.162 A·11 0.323 B·46 0.147 B·75 0.100 C·01 0.177 C·03 0.289 C·07 0.179.结论广州地区汉族HPA-1-6、9及15 系统基因频率分布和HLA- Ⅰ类抗原分布存在明显的多态性,与其它资料相比显示出种族和地域性差异;建立HPA-1-6、9及15 系统和HLA- Ⅰ抗原基因分型库对于临床输血有重要意义.
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新疆汉族人群血小板抗原1-5、15系统基因多态性分析
目的 调查研究与血小板输注无效关系密切的人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)1-5及15系统基因在新疆汉族人群中的遗传多态性.方法 采用聚合酶链一序列特异性引物(PCR.SSP)法对101例无血缘关系的新疆汉族血样进行HPA基因分型.结果 新疆汉族HPA-1a、2a、3a、4a、5a、15a基因频率分别是0.985 1、0.920 8、0.544 6、1、0.950 5、0.465 3,HPA-1b、2b、3b、4b、5b、15b基因频率分别是0.014 9、0.079 2、0.455 4、0、0.0495、0.534 7,新疆汉族HPA基因频率与维吾尔族人群相比,HPA-1a、1b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05).结论 HPA-1、2、3、5、15系统均具有多态性,HPA-3、15系统具有高度多态性.
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青岛地区汉族人群HPA-1-5,15多态性分布研究
目的 研究青岛地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1-5,15抗原分布多态性.方法 采用 PCR-SSP方法 对青岛地区918名无血缘关系固定血小板无偿捐献者进行HPA1-5及HPA-15系统的基因分型.结果 各被检系统等位基因频率分别是1a= 0.9940,1b= 0.0060, 2a=0.9319,2b=0.0681,3a=0.5822,3b=0.4178,4a=0.9897,4b=0.0104,5a=0.9804,5b=0.0196,15a=0.4913,15b=0.5087;HPA基因频率分布与国内资料比较, HPA-1与北方人群(河南),HPA-2 与南方人群(四川)差异有统计学意义;与台湾人群HPA-2,-4,与日本人群HPA-2,-3,-5,与美国黑人HPA-1,-2,-5,与白人HPA-1,-4,-5,-15分别有统计学显著性差异.结论 青岛地区汉族人群HPA分布具有本地人群特点.本组HPA数据分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,可以作为北方汉族人群HPA基因分布频率数据库和青岛本地化血小板供者HPA资料库.
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人类血小板抗原1～4系统基因分型
目的:建立人类血小板抗原1～4系统序列特异性引物(PCR-SSP)分型方法.方法:合成14条引物,采用PCR-SSP方法对25名健康献血者的HPA-1～4系统进行基因分型;分型结果与采用等位基因特异性寡核苷酸点杂交(PCR-ASO)获得的结果进行比较.结果:以PCR-SSP方法对HPA 4个系统进行分型均取得了明确、满意的结果,且与PCR-ASO方法获得的结果完全一致.结论:人类血小板抗原PCR-SSP基因分型方法具有简便、快速、准确等优点,具有广泛的应用前景.
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人类血小板抗原基因分型参考品的制备及鉴定
目的 构建22型人类血小板抗原(HPA)基因分型参考品(质控DNA),并对其进行测序鉴定.方法 提取人血液基因组DNA,以其为模板,通过特异性引物扩增出各HPA(1a～16a)基因片段,胶回收后克隆至pUCm-T载体,随后转化E.coli DH5α,提取质粒酶切鉴定并测序;再以构建成功的HPA-1a～16a质粒为模板,通过定点突变获得HPA-1b～16bw基因片段,经克隆、转化后,作酶切鉴定并测序.结果 获得了HPA-1a～16a、HPA-1b～16bw基因片段,克隆出各型HPA基因分型参考品质粒,其序列与GenBank中公布的数据完全一致.结论 各型HPA基因分型参考品质粒的成功构建,解决了基因频率较低型别(HPA-1b～16bw)质控DNA难以获得的实际问题,为HPA基因分型方法的研究奠定了基础.
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辽宁地区血小板志愿捐献者HPA基因资料库的建立
目的 对辽宁地区血小板志愿捐献者进行HPA基因分型,建立已知HPA基因型的血小板捐献者资料库.方法 采用PCR-SSP方法对随机抽取的130名血小板捐献者进行HPA-1-6和HPA-15抗原系统共14个抗原的基因分型.结果 辽宁地区血小板志愿捐献者HPA的基因频率分别是:HPA-1a 0.992 5、1b 0.007 5、2a 0.930 5、2b 0.069 5、3a 0.581 0、3b 0.419 0、4a 1.000 0、4b 0.000、5a0.981 0、5b 0.019 0、6a 0.988 5、6b 0.011 5、15a 0.4615、15b 0.538 5.结论 辽宁地区血小板志愿捐献者HPA-1-6和HPA-15抗原系统的基因频率符合Hardy-Wein-berg遗传定律,与其它地区和国家的同类资料相比显示出种族和地域性差异,由此建立起了辽宁地区已知HPA基因型的血小板捐献者资料库.
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贵州地区随机人群血小板抗原基因频率调查和不配合率分析
目的 研究贵州地区随机人群HPA-1-5,15基因多态性分布特点及不配合率分析,为本地区HPA免疫性疾病的防治和建立HPA资料库提供参考数据.方法 采用PCR-SSP方法对本地区1 270例随机人群进行HPA-1-5,15系统基因分型、计算基因频率和等位基因不配合率,得出相关数据,并与国内外不同地区人群进行比较,阐明本地区特点.结果 本地区HPA-1、2、4、5以aa基因型为主基因型,表型频率0.883-0.997,除8例HPA-2bb纯合子外,HPA-1、4、5未检出bb基因型;HPA-3和15高度杂合,表型频率分别为3aa=0.371、3ab =0.486、3bb=0.143、15aa=0.265、15ab=0.493、15bb =0.242.本地HPA各系统与其他地区比较差异显著的有,HPA-1、5高加索人、埃及和美国白人,HPA-2成都和埃及,HPA-3广州和青岛,HPA-4青岛,HPA-15与各地均无差异.不配合率由高到低依次为HPA-15 =0.375、HPA-3=0.362、HPA-2 =0.110、HPA-5=0.051、HPA-1=0.012、HPA-4=0.004.结论 本地区随机人群HPA-1-5、15系统1、2、4和5以aa基因型为主,3和5高度杂合,呈多态性分布.在本地区应该高度警惕HPA-3和15系统同种抗体导致的PTP、PAT和PTR的可能性,其次为HPA-2和5,由HPA-1和4系统产生同种免疫的机率较低.本研究证实HPA多态性分布存在人群、地域和人种的差异.
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贵州汉族人群人类血小板抗原基因多态性分析
目的 研究贵州地区汉族人群HPA-1～5、15基因多态性分布特点,为本地区HPA免疫性疾病的防治和HPA基因分型库的建立提供参考数据.方法 采用PCR-SSP方法对本地区700例汉族人群无血缘关系的健康献血员进行HPA-1～5、15系统基因分型,计算基因型及基因频率,总结出多态性分布特点,并与国内其他地区和国外不同人种进行比较,阐明本地区特点.结果 各系统均呈多态性分布.HPA-1和4接近∞基因型单线分布;HPA-2和-5少量杂合,ab杂合子依次为64和30例,4例-2bb;HPA-3和-15高度杂合,aa基因型依次为242和210例,ab型依次为347和350例,且有较多的bb基因型,依次为111和140例.与其他地区和不同国家人群人种的比较均或多或少存在差异,并随地域和人种的差别而增加.结论 贵州地区汉族人群HPA-1～5、15系统基因均呈多态性分布,以HPA-15、-3、-2和-5的a与b基因杂合率较高,对于临床HPA免疫性疾病的防治应给予高度重视.
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北方汉族人群血小板抗原1～6、15系统基因多态性分析
目的 了解中国北方汉族人群HPA-1～6、15系统的基因多态性及分布差异.方法 采用Luminex结合序列特异性寡核苷酸探针(FLOW-SSO)方法对904名籍贯为北方汉族的深圳市机采血小板无偿捐献者做HPA-1～6、15系统基因分型.采用聚合酶链反应·序列特异性引物(PCR-SSP)方法对有疑问的标本及罕见抗原(如HPA-1 b/1b、2b/2b、4a/4b等)做进一步确认.结果 本组北方汉族人群来自河南、陕西、山东、黑龙江、吉林5个省,以HPA-3、15基因型的杂合度高,杂合度约在50％左右,HPA-1、2、4、5、6以a/a纯合子为主(88％以上),将北方这5个地区汉族人群的HPA基因频率和基因型频率两两比较,在HPA-2、5、6、15系统中存在显著性差异.吉林、陕西和山东汉族人群HPA-2a/2b基因型频率为0.027 8、0.1159、0.110 3,同时HPA-2b基因频率为0.013 9、0.058 0、0.055 1;吉林和黑龙江汉族人群HPA-5a/5b基因型频率为0.0741、0.007 5,同时HPA-5b基因频率为0.037 0、0.003 8;山东、陕西和吉林汉族人群HPA-6a/6b基因型频率为0、0.029 0、0.037 0,同时HPA-6b基因频率为0、0.014 5,0.018 5;黑龙江、河南和吉林汉族人群HPA-15b/15b基因型频率为0.270 7、0.188 6、0.185 2,同时HPA-15b基因频率为0.530 1、0.4478、0.425 9(均为P＜0.05),符合Hardy-Weinbery遗传定律.结论 中国北方汉族人群中HPA-1～6、15分布不论基因频率还是基因型频率都存在明显的地域性,地域性较南方汉族人群更为明显.
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南昌地区机采血小板捐献人群中人类血小板抗原基因多态性初步分析
人类血小板抗原(HPA)在临床与输血实践中具有非常重要的意义.HPA不合可致同种免疫反应,导致输血后紫癜、血小板输注无效、新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜等[1].我们应用序列特异性引物聚合酶链式反应(PCRSSP)技术,对本中心机采捐献血小板者的血小板抗原(HPA)基因多态性进行了初步分析,现报告如下.
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2458名中国汉族人类HPA-1～6、15基因多态性的研究
目的 分析中国汉族人群HPA-1～6、15系统的基因多态性,研究中国南、北方汉族人群HPA-1～6、15的基因分布.方法 采用Luminex结合序列特异性寡核苷酸探针(flow-sequence specific oligonucleotide probes,FLOW-SSO)方法对2458名深圳市机采血小板无偿捐献者(其中南方人群1 554人,北方人群904人)进行HPA-1～6,15系统基因分型.采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-sequence specific primer,PCR-SSP)方法对有疑问的标本及罕见抗原(如HPA-1b/1b、2b/2b、5b/5b等)做进一步确认.结果 中国汉族人群中HPA-1 ～6、15基因频率分别为,HPA-1a0.991 7,HPA-1b 0.008 3,HPA-2a 0.955 2,HPA-2b 0.044 8,HPA-3a0.558 6,HPA-3b 0.441 4,HPA-4a0.9980,HPA-4b0.0020,HPA-5a0.986 2,HPA-5b0.013 8,HPA-6a0.985 6,HPA-6b0.0144,HPA-15a0.545 2,HPA-15b 0.454 8.南、北方汉族人群HPA-1～6、15比较,在HPA-1和HPA-3系统(x2=15.032 0、5.418 8,P＜0.05)；基因频率分布差异有统计学意义.经x2检验,符合Hardy-Weinbery遗传定律.结论 中国汉族人群中HPA-3和HPA-15杂合程度高,在中国南北方汉族人群中HPA -1和HPA-3系统基因多态性分布存在明显的地域差异.为了给免疫性血小板减少症患者提供相合血小板输注,在中国建立血小板供者资料库是必要的.
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原发性干燥综合征患者血清TPO及HPA的表达及临床意义
目的 研究原发性干燥综合征患者血清促血小板生成素(TPO)和人类血小板抗原(HPA)的表达水平及临床意义,旨在为临床治疗提供相关理论依据.方法 选取我院临床免疫科2014年2月至2016年2月收治的原发性干燥综合征患者60例作为观察组,另选取来我院做健康体检者60例作为对照组,观察被检者促血清血小板生成素(TPO)与人类血小板抗原(HPA)的表达水平,同时检测其他相关临床指标表达水平.结果 血小板减少组、曾有血小板减少组及血小板正常组患者一般资料比较无差异(P＞0.05);观察组血清TPO表达水平明显高于对照组(P＜0.05),观察组血清HPA表达水平与对照组比较无差异(P＞0.05);观察组根据有无血小板减少症再分为血小板减少组、曾有血小板减少组及血小板正常组血清TPO表达水平明显高于对照组(P＜0.05),血小板减少组、曾有血小板减少组及血小板正常组三组患者组内比较无差异(P＞0.05);血小板减少组、曾有血小板减少组、血小板正常组血清HPA表达水平与正常比较无差异(P＞0.05),4组间两两比较无差异(P＞0.05);血小板正常组患者lgA、CIC表达水平明显高于血小板减少组及曾有血小板减少组(P＜0.05),血小板减少组、曾有血小板减少组及血小板正常组患者WBC、RBC、ESR、CRP、lgG、lgM、C3、C4、SSA-Ab、SSBAb、HB、lgE各临床指标间比较无差异(P＞0.05);lgA、CIC两指标组间多重比较:血小板减少组CIC表达水平与曾有血小板减少组及血小板正常组比较无差异(P＞0.05),曾有血小板减少组CIC表达水平与血小板正常组比较有差异(P＜0.05);血小板减少组lgA表达水平与曾有血小板减少组比较无差异(P＞0.05),血小板正常组lgA表达水平与血小板减少组及曾有血小板减少组比较均有差异(P＜0.05),血清TPO表达水平与各临床指标间均无相关性(P＞0.05),血清HPA表达水平与临床指标间无相关性(P＞0.05),HB与抗SSA-Ab抗体呈负相关(r=-0.335,P＜0.05);HB与抗SSB-Ab抗体呈负相关(r=-0.290,P＜0.05);抗SSB-Ab抗体与C4及CIC呈正相关(r=0.289,r=0.312,P＜0.05);PLT与IgA呈正相关(r=0.426,P＜0.05).结论 血清TPO及HPA的表达水平可能与原发性干燥综合征发病机制无直接相关性,原发性干燥综合征的发病原因可能是由于患者本身疾病导致的免疫力紊乱所致.
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HPA1-5.15基因多态性与深静脉血栓形成的相关性
目的:探讨人类血小板抗原(HPA)1-5.15基因多态性与深静脉血栓(DVT)形成的相关性.方法:在贵州地区汉族人选择40例初发深静脉血栓形成患者为DVT组,另40例健康体检者40例为对照组,分别提取外周血基因组DNA,应用序列特异性引物-多聚酶链反应技术扩增目的基因,对HPA基因进行分型,采用Hardy-Weinberg平衡检验HPA基因频率群体分布,x2检验比较DVT组和对照组频数差异.结果:DVT组与对照组实际基因型分布与理论基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05),符合Hardy-Weinberg平衡定律,具有人群代表性；比较对照组和DVT组6个基因多态性差异无统计学意义(P＞0.05).结论:贵州地区汉族人HPA1-5.15基因多态性不是深静脉血栓形成的危险因素,与深静脉血栓形成无明显关系.
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贵阳地区汉族人群人类血小板抗原1～5,15基因多态性与2型糖尿病合并周围神经病变的相关性研究
目的 探讨人类血小板抗原1～5,15(HPA-1～5,15)基因多态性与贵阳市汉族2型糖尿病合并周围神经病变的发生是否具有相关性.方法 2型糖尿病合并周围神经病变患者75例(DPN组),不合并周围神经病变患者24例(非DPN组),健康体检者100例(对照组).采用酚/氯仿方法提取DN A,用多聚酶链反应-序列特异性引物方法进行基因组分型.结果 DPN组、非DPN组的HPA-1aa、2aa、3aa型基因频率均明显高于对照组,而DPN组与非DPN组之间差异无显著性；DPN组、非DPN组的HPA-1a、2a、3a等位基因频率明显高于对照组,而DPN组与非DPN组之间差异无显著性.HPA-4、5、15的基因型、等位基因频率在对照组、DPN组与非DPN组之间比较差异均无显著性.结论 HPA-1～5,15基因多态性与贵阳市汉族人群2型糖尿病合并周围神经病变的发生可能无关.
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岳阳地区血小板捐献者HPA1～17,HLA-A和B基因多态性研究
目的 研究湖南省岳阳地区机采血小板捐献者人类血小板抗原(HPA) 1～17及人类白细胞抗原HLA-A和B基因分布及多态性.方法 分别采用PCR-SSP法和PCR-SSO法对200名岳阳地区机采血小板捐献者进行HPA1～17和HLA-A和B基因分型,计算基因频率、基因型频率,并与其他人群进行比较.结果 岳阳人群HPA1～17系统中,HPA7～14和HPA16～17的基因型均为aa型,不具有多态性;HPA1,2,4和5主要以aa型为主,aa基因型频率分别是0.970 0,0.900 0,0.985 0和0.980 0,未检出bb型;仅在HPA3,6和15中检出bb型,bb基因型频率分别是0.185 0,0.035 0和0.465 0;杂合度高的是HPA15,其aa,ab和bb基因型频率分别是0.305 0,0.230 0和0.465 0,HPA3杂合度居次,其aa,ab和bb基因型频率分别是0.380 0,0.435 0和0.185 0.HLA-A位点检出12个等位基因,频率高的3个是A*11(0.3325),A*02(0.295 0)和A*24(0.205 0);HLA-B位点检出28个等位基因,频率高的5个是B* 40(60)(0.177 5),B* 46(0.142 5),B* 13(0.100 0),B*51(0.082 5)和B* 15(75)(0.077 5).结论 岳阳地区机采血小板捐献者HPA1～17和HLA-A,B基因多态性与南方汉族接近,但也呈现出自身特点,需建立该地HLA/HPA基因分型血小板供者库服务于临床.
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徐州地区汉族人群血小板HPA基因多态性的研究
目的 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测徐州地区汉族人群血小板特异性抗原(HPA)基因多态性.方法 2010年期间对徐州地区100名无血缘关系的汉族成年人进行HPA1～17基因及新等位基因Caba+分型研究.根据HPA基因分型试剂盒的要求,调整DNA模板浓度；根据人类生长激素基因(HGH)的保守片段设计内参引物进行PCR-SSP,在包含引物混合液的96孔反应板中,按照相同的循环条件扩增PCR产物；用x2检验比较基因分布期望值与观察值,以验证是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡.结果 在徐州地区汉族人群的HPA1～17系统中,呈多态性分布的等位基因是HPA1a,HPA2a,HPA3a,HPA4a,HPA5a,HPA6a和HPA15a,其频率分别为0.995 0,0.935 0,0.590 0,0.9950,0.980 0,0.975 0和0.575 0,HPA7～14,16～17及新等位基因Caba+呈单线性分布.结论 徐州地区汉族人群HPA的基因有地区特点,人类血小板抗原HPA的基因具有民族多态性.
关键词： 人类血小板抗原 基因分型 基因频率 序列特异性引物聚合酶链反应 -
维吾尔族血小板抗原1～5、15系统基因多态性分析
目的:调查研究与血小板输注无效关系密切的人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)1～5及15系统基因在维吾尔族人群中的遗传多态性;分析民族差异,确定各系统临床意义,从而建立已知基因型血小板供者库.方法:采用聚合酶链-序列特异性引物技术(PCR-SSP)对153例无血缘关系的纯维吾尔族血样进行了HPA基因分型.结果:维吾尔族HPA-1a、2a、3a、4a、5a、15a基因频率分别是 0.911 8、0.888 9、0.545 8、0.993 5、0.921 6、0.441 2,维吾尔族HPA-1b、2b、3b、4b、5b、15b基因频率分别是0.088 2、0.111 1、0.454 2、0.006 5、0.078 4、0.558 8,维吾尔族HPA基因频率与汉族人群相比,HPA-1a、1b、3a、3b、5a、5b基因频率差异具有统计学意义(P＜0.05);与西藏藏族人群相比,HPA- 3a、3b、5b基因频率差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:维吾尔族人群中HPA1～5、15系统12个等位基因都可以检测到.在不同的个体中它们以纯合子或杂合子状态表达,但未检测到纯合子1b或纯合子4b型个体.HPA- 1、2、3、4 、5、15系统均具有多态性,其中HPA-3、15系统具有高度多态性,这使免疫暴露的机会增加.维吾尔族人群与汉族人群的HPA-1a、1b、3a、3b、5a、5b基因频率存在明显差异,与藏族人群的HPA- 3a、3b、5b基因频率存在明显差异.
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新疆柯尔克孜族人群血小板抗原1～6、15系统基因多态性分析
目的 探讨新疆柯尔克孜族人群人类血小板抗原HPA1-6,15(Gov)系统多态性,分析HPA基因在柯尔克孜族人群中的遗传多态性.方法 采用聚合酶链-序列特异性引物(PCR-SSP)法105例无血缘关系的新疆柯尔克孜族血样进行HPA基因分型.结果 新疆柯尔克孜族HPA-1a、2a、3a、4a、5a、6a、15a基因频率分别是0.900 0、0.923 8、0.576 2、1、0.952 4、1、0.566 7;HPA-1b、2b、3b、4b、5b、6b、15b基因频率分别是0.100 0、0.076 2、0.423 8、0、0.047 6、0、0.433 3,新疆柯尔克孜族HPA基因频率与新疆汉族相比,HPA-1a、1b、2a、2b、15a、15b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05).与新疆维吾尔族相比,HPA-15a、15b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05).结论 新疆柯尔克孜族人群中HPA-1、2、3、5、15系统均具有多态性,其中HPA-3,15系统具有高度多态性,这使免疫暴露的机会增加.
