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ABO血型系统中1种新A2等位基因的发现及在中国福建地区汉族人群中A2亚型调查
本研究探讨ABO血型系统中A2亚型在中国福建地区汉族人群中的分布频率及其分子机制.采用血清学方法鉴定1例A2亚型标本,PCR扩增ABO基因第6、7外显子及第6内含子,PCR产物经割胶纯化后直接测序,并对含有突变位点的扩增片段进行单倍体序列分析；用抗-A1单克隆血清筛查福建地区3176例A或AB型汉族无偿献血者.结果表明,该例A2亚型的基因型鉴定为A/ Olv,与A101相比,其第7外显子存在467C＞T和607G＞A突变,分别导致多肽链P156L和E203K替换；经标准血清学方法检测,3176例随机A或AB型献血者(同时期健康献血者约16527人)未检出A2亚型.结论:首次发现467C＞T和607G＞A组合的A2等位基因,A2亚型在福建地区汉族人群中罕见.
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一个中国汉族ABO血型B亚型家系中发现新的B等位基因
目的研究中国汉族人群ABO血型中B亚型的分子遗传背景,发现并鉴定ABO新等位基因.方法随机选择10个正常的B型志愿捐血者样本作对照,对6例血型血清学鉴定为B亚型的样本,采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法、ABO基因第6及第7外显子PCR产物直接测序,进行基因定型;并对B等位基因的第6外显子、第6内含子及第7外显子进行基因克隆和单倍体测序分析. 结果 2例血清学为Bx、BW的B亚型样本中,发现一个新的B等位基因.该等位基因与B101等位基因相比,差异仅在第7外显子nt695位T>C突变.进一步对其中一个Bx血型的个体进行家系调查,结果该家系的11人中,7人带有该新B等位基因.而其余的4例B亚型样本及10例对照样本,ABO基因的第6、7外显子未发现新的点突变. 结论首次发现695T>C变异的新B等位基因,该等位基因nt695位由T转变为C,232位氨基酸由亮氨酸转变为脯氨酸,可导致糖基转移酶活性的降低,表明ABO基因的第232位氨基酸对决定糖基转移酶活性至关重要.
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Bel亚型α1,3半乳糖基转移酶新等位基因的鉴定
目的 分析1例罕见B放散型的ABO血型分子背景,鉴定ABO新等位基因.方法 对1例正反定型未能鉴定其ABO血型的捐血者,分别采用ABO基因第6及第7外显子直接序列测定及单倍体克隆测序进行基因分型,以及检测ABO基因CBF/NF-Y微卫星增强子区域.结果 血清学鉴定为Bel的个体中发现了一个突变的B等位基因,该等位基因与B101等位基因相比,差异在nt905位A>G突变.该突变导致α1,3半乳糖基转移酶Asp302gly,定为Bel新基因,Genbank注册号为FJ009674.ABO基因微卫星增强区域序列测定为G/C型.结论 αl,3-D-半乳糖基转移酶基因中nt905A>G突变可能是Bel分子遗传机制之一,第302位氨基酸变异大大影响了糖基转移酶的活性.
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4例Ax亚型血清学及分子遗传分析——发现一个新的Ax等位基因
目的 对4例正反定型不符的献血者标本进行分子遗传分析,分析其分子生物特征.方法 采用吸收放散进行红细胞弱抗原检测,SSP-PCR方法进行基因分型,采用PCR产物直接测序分析其序列.结果 该4例标本均为Ax或AxB亚型,测序结果表明,第六、七外显子含有4个碱基错义突变,分别为nt467T＞C,nt526G＞C,nt539G＞A,nt646T＞A.一个碱基无义突变nt537G＞A.其中nt526G＞C,nt539G＞A两个错义突变和nt537 G＞A无义突变是在Ax亚型个体中首次发现.结论 Ax亚型可能是多个碱基突变,引起氨基酸的改变,导致糖基转移酶活性的降低,从而使红细胞上表达的A抗原大大减少.
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罕见B放散型分子遗传背景的分析
目的 分析一例罕见B放散型的ABO基因分子遗传背景.方法 对一例血型血清学正反定型不符的无偿捐血者样本进行了包括吸收放散、血型物质检测等系列血清学实验后,采用PCR-SSP方法、第6、7外显子PCR产物直接测序,进行ABO基因定型;并对第6、7外显子及第6内含子进行基因克隆序列分析,以及采用PCR扩增样本的ABO基因5'端调控(CBF/NF-Y增强子)区域,扩增产物经胶回收后进行直接序列测定.结果 经过吸收放散等血型血清学实验鉴定为Bel表现型,在此样本中发现了一个ABO*B变异等位基因,它是在ABO基因的第7外显子695核苷酸位出现T>C突变,导致232位氨基酸由Leu转交为Pro.ABO基因微卫星增强区域序列测定为4个43个碱基长度的重复,第1个重复中nt41为C/G杂合,其余3个重复序列中nt41均为G,定为G/C型(B101/O01等位基因型).结论 在中国人群中再次报道nt695位突变的ABO新等位基因,表明ABO基因的第232位氨基酸对决定ABH糖基转移酶活性是至关重要的.
