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Rhesus盒检测技术
为了研究Rhesus盒的检测技术及意义,根据RHD基因上游盒、下游盒及杂交盒的DNA序列特异性设计引物,用PCR-SSP和错配PCR技术检测上游、下游和杂合的Rhesus盒.结果表明:DNA标准品验证本技术可靠,随机非血统关系RhD阳性者中,RHD+/RHD-型占9.00%,RHD+/RHD+型占91.00%;RhD阴性者中RHD+/RHD-型占26.14%,RHD+/RHD+型占3.92%,RHD-/RHD-型占69.94%.结论:Rhesus盒检测技术可用于分析RhD单倍型基因结构,用于遗传、临床输血及新生儿溶血病等研究.
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人RHD基因Rhesus盒的检测及其意义
为了解人RHD基因的组合情况,进一步研究RHD基因遗传结构和预测新生儿溶血病,采用PCR-SSP方法,设计4条引物,用同一PCR反应条件同时检测人RHD基因的上游、下游和杂交的Rhesus盒.结果显示:RHD-/RHD-纯合子个体只检出杂交Rhesus盒,无上、下游Rhesus盒,RHD+/RHD-杂合子个体能同时检出上、下游和杂交Rhesus盒,RHD+/RHD+纯合子个体只检出上、下游Rhesus盒,无杂交Rhesus盒.50例RhD阳性样本中5例(10%)为RHD+/RHD-型,其余(90%)均为RHD+/RHD+型.98例无血缘关系RhD阴性汉族人样本中,54例(55.1%)为RHD-/RHD-纯合子,36例(36 7%)为RHD+/RHD-杂合子即RHD基因单体型(可用于对RHD基因单体型进一步分析),8例(8 2%)为RHD+/RHD+纯合子.2例弱D型样本同时检出上、下游和杂交Rhesus盒,为RHD+/RHD-型.16例Del型中10例(62.5%)同时检出上、下游和杂交Rhesus盒,为RHD+/RHD-型,6例(37.5%)只检出上、下游Rhesus盒,无杂交Rhesus盒,为RHD+/RHD+型.这些样本RHD基因10个外显子的检测结果验证了本方法的正确性.结论:本方法所需引物少,操作简便,结果判断直观,适合临床应用.在RhD阴性中国汉族人中存在为数不少的RHD无效基因(非缺失型和部分缺失型占44.9%).
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维吾尔族Rhesus盒的研究
目的:研究维吾尔族Rhesus盒的意义.方法:根据RHD基因上游盒、下游盒及杂交盒的DNA序列特异性设计引物,用聚合酶链反应-序列特异性引物和错配PCR技术检测上游、下游和杂合的Rhesus盒.结果:维吾尔族随机非血缘关系RH阴性者94.44%为RHDˉ/RHDˉ型,2.78%为RHD+/RHDˉ型,2.78%为RHD+/RHD+型.结论:Rhesus盒检测方法是一种分析RHD基因结构是纯合子或杂合子的技术,可用于遗传学或新生儿溶血病的研究.
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中国汉族和维吾尔族RHD基因结构的比较研究
目的对比研究中国汉族和新疆维吾尔族随机非血缘关系RhD阴性个体RHD基因结构.方法采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法检测RHD基因的上、下游和杂交的Rhesus盒,以及RHD基因的10个外显子.结果 RhD阴性个体RHD基因型检测结果显示,新疆维吾尔族人与同组汉族人RHD-/RHD-基因型组差异有统计学意义(94.44% vs 61.40%,P<0.01),两者与RHD+/RHD-基因型组(该组代表RHD单基因组)比较差异有统计学意义(2.78% vs 34.21%,P<0.01),但与RHD+/RHD+型组比较差异无统计学意义(2.78% vs 4.39%,P>0.05).78名汉族RhD阴性个体RHD单基因结构研究显示,53名(67.95%)为RHD(1-10)型(其中非表达的14名),15名(19.23%)为RHD-CE(2-9)-D2基因型,5人(6.41%)为RHD-CE(2-7)-D2基因型,2人(2.56%)与RHD-CE(3-6)-D型相似,1人(1.28%)为RHD-CE(5-6)-D型,2人为RHD-CE(6)-D或点突变.2名新疆维吾尔族RhD阴性个体RHD单基因型中1人为RHD(1-10)型,1人为RHD-CE(2-9)-D2.结论汉族RhD-/RHD+单基因型常见非表达的等位基因依次为RHD-CE(2-9)-D2、RHD(1-10)、RHD-CE(2-7)-D2.新疆维吾尔族携带汉族常见而在白人罕见的非表达的RHD等位基因RHD-CE(2-9)-D2,显示维吾尔族和汉族两大民族基因的融合特征.
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汉族与维族Rhesus盒的比较研究
目的研究汉族与维族Rhesus盒的异同及其意义.方法根据RHD基因上游盒、下游盒及杂交盒的DNA序列特异性设计引物,用聚合酶链反应-序列特异性引物和错配PCR技术检测上游、下游和杂合的Rhesus盒.结果在随机非血缘关系Rh阴性汉族人中61.40%为RHD-/RHD- 型,34.21%为RHD+/RHD-型,4.39%为RHD+/RHD+型.而在新疆维吾尔族人中,检测结果分别为94.44%、2.78%和2.78%.其它6份部分少数民族样本均为RHD-/RHD-型.RHD-/RHD-型组和RHD+/RHD-型组中,新疆维吾尔族人的检测结果与汉族人相比差异有统计学意义(P<0.01).在RHD+/RHD+型组,两者相比差异无统计学意义(P>0.05).结论新疆维吾尔族人Rh血型既有东方人的特点,也有白人的特点,是一个特殊的中华民族,这与人类学研究结果相符.
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汉族和维吾尔族Del型基因型及其常见等位基因差异的研究
目的 比较中国汉族和维吾尔族(维族)人群Del型基因结构和遗传特点,了解二者Del型常见突变类型及其基因组合情况.方法 采用微柱凝胶法检测随机非血缘关系的中国222名汉族人和55名维族人的RhD血型,RhD(-)者用改良间接抗球蛋白试验(IAT)确认;单克隆抗体鉴定Rh表型;吸收放散微柱凝胶法检测Del型;PCR-SSP方法检测RHD上游、下游和杂合Rhesus盒;PCR扩增RHD第9外显子,测序验证;PCR-SSP检测RHD基因1227位点,测序验证.结果 222例随机非血缘关系汉族血清学RhD(-)标本和55例随机非血缘关系维族血清学RhD(-)标本分别检出43例和1例Del型;汉族RhD(-)标本中,RHD基因型为RHD-/RHD-和RHD +/RHD-、RHD+/RHD+者的比例分别为70.72％ (157/222)和27.03％(60/222)、2.25％(5/222);维族RhD(-)标本中,只有1例RHD基因型为RHD +/RHD+,其余98.18％ (1/54)标本为RHD-/RHD-;汉族和维族RhD(-)个体RHD基因型总体分布存在差异(P＜0.05);汉族和维族RhD(-)个体的RHD-/RHD-基因型呈明显差异(P＜0.05);43例随机非血缘关系的汉族Del型标本RHD基因1227位点检测:1例1227G、3例1227G/A和39例1227A,结合Rhesus box检测结果,基因组合情况分别为RHD1227G/-、RHD1227G/A、RHD1227 A/-和RHD1227A/A.1例维族Del型标本等位基因组合为RHD1227A/A.所有RHD-/RHD-纯合子样本均未检测到RHD基因1227位点.吸收放散试验为Del型者93.02％ (40/43)、等位基因为RHD1227A或A/G个体均携带C抗原.结论 中国汉族和维族Del型人群RHD基因型绝大部分是RHD +/RHD-杂合子,都存在RHD;中国汉族和维族Del型等位基因以RHD1227A为主,且与C抗原相关联.
