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实时定量PCR监测B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植后的IgH水平及意义
本研究评价实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测IgH水平对B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植(HSCT)后残留肿瘤细胞监测的意义.采用家族一致性TaqMan探针联合等位基因特异性寡核苷酸(ASO)上游引物技术检测22例B细胞恶性肿瘤患者HSCT前后骨髓单个核细胞的IgH水平动态变化.IgH水平以内参基因GAPDH进行归一化.结果表明,RQ-PCR实验可重复灵敏度为1个拷贝.9例IgH单克隆重排患者,在HSCT后1个月骨髓中IgH的拷贝数较初治时明显降低(6.67×103/106 GAPDH vs 29/106 GAPDH,p＜0.01).3例移植后15个月IgH的拷贝数持续小于102/106 GAPDH,18个月后IgH水平为0的患者获得了完全的临床和分子遗传学缓解(CCyR);5例移植后3个月以内IgH拷贝数持续小于102/106 GAPDH,随后IgH拷贝数持续小于103/106 GAPDH的患者临床获得完全缓解(CR).1例患者移植后近3个月时IgH拷贝数为4.5×103/106 GAPDH,4个月时临床复发.RQ-PCR检测8例干细胞采集物的肿瘤污染水平为3.68×102(0-1720)/106 GAPDH,外周血采集物中的肿瘤污染小于骨髓[75(0-890)/106 GAPDH vs 1.1×103(527-1720)/106 GAPDH,p＜0.05].采集物可用于RQ-PCR检测的8例患者无论肿瘤污染程度如何,临床均无复发.采集物中肿瘤污染的水平与初治及移植后1个月的IgH水平呈正相关(r值分别为0.810、0.708,p＜0.05).结论:RQ PCR能够有效监测B细胞恶性肿瘤患者移植后IgH水平动态变化.移植后3个月内IgH拷贝数大于103/106 GAPDH可能是预测患者复发的标志.
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IgH重排的实时定量PCR检测及反应参数研究
为了探讨以通用引物应用PCR技术扩增克隆性免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的佳实验条件及SYBRGreen Ⅰ实时定量PCR检测该基因的可行性,以通用引物对克隆性IgH重排进行扩增,对影响PCR扩增的退火温度、引物浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、镁离子浓度、循环次数等实验因素进行了系统研究,找出佳反应参数,并以通用引物进行了SYBR green Ⅰ实时定量PCR对IgH重排基因的检测,测定了该法检测IgH重排基因的敏感性.结果表明:佳退火温度为60℃,佳引物浓度为0.8 μmol/L,0.5 U的Taq酶量效果满意,适dNTP浓度为100μmol/L,适镁离子浓度为3.0 mmoL/L,佳循环次数为40次.SYBR Green Ⅰ实时定量PCR可以实现对克隆性IgH重排的扩增和荧光信号的检测分析,其对IgH重排基因检测的敏感性为10 4/ml.结论:确定了应用PCR技术检测克隆性IgH重排的适反应条件,实现了用通用引物对克隆性IgH重排稳定、特异的扩增,初步实现了以通用引物和应用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR对IgH重排的检测.
关键词： PCR IgH重排 SYBR Green Ⅰ 实时定量PCR -
实时荧光定量PCR检测MM患者IgH基因重排的表达
目的：通过对多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)患者联合化疗前后免疫球蛋白重链（Immunoglobulin heavy chain，IgH）基因重排进行定量分析，探讨 IgH基因重排在MM发病机制中的作用，及重排拷贝数与预后及疗效间的关系。方法选用实时荧光定量PCR法，检测并比较15例MM患者化疗前后IgH基因重排拷贝数变化，培养U266细胞株和K562细胞作为阳性及阴性对照，应用SPSS11.5统计软件对结果进行统计分析。结果用SPSS11.5统计软件对结果进行配对秩和检验，化疗前后IgH基因重排拷贝数变化有显著差异(P<0．05)，差异有统计学意义。结论 MM患者经过联合化疗后， IgH基因重排拷贝数比化疗前有明显降低。从而可以作为判断MM治疗疗效的一种检测方法，并对患者的预后判断有指导意义。
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实时定量PCR检测IgH重排在B淋巴细胞恶性肿瘤中的应用
用精确、敏感和可靠的RQ-PCR方法,以克隆性IgH重排为靶分子,可对B淋巴细胞恶性肿瘤的MRD定量检测,对于其疗效评价、预后判断和预防复发等具有重要意义.就RQ-PCR在B淋巴细胞肿瘤中检测IgH重排的技术原理及其应用研究进行综述.
