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纤维连接蛋白N端肝素结合域多肽的制备及其对DIC大鼠的治疗作用
本研究利用酵母表达系统制备纤维连接蛋白(fibronectin,FN)N端肝素结合域多肽,检测多肽的生物学活性,进行多肽治疗DIC大鼠的实验研究.利用PCR技术从FNcDNA中扩增FN N端肝素结合域序列,将获得的目的基因片段克隆至T载体,筛选后转移至酵母表达pAo815SM载体进行选择,再构建重组酵母表达pPIC9K载体,线性化重组载体并转染GS115酵母细胞,在GS115酵母细胞表达目的多肽.发酵液经80%硫酸胺沉淀,沉淀物过S100柱分离纯化,纯化物再经过SP柱纯化,测定多肽结合肝素等生物学活性.股静脉注射内毒素脂多糖(LPS)50mg/kg建立大鼠DIC模型.建立的DIC SD大鼠40只,随机分2组,每组20只,一组为rhFNHN-29多肽治疗组,另一组为生理盐水对照组.治疗组分别于注射LPS前半小时、注射后2小时、4小时尾静脉注射rhFNHN-29多肽(10mg/kg);生理盐水对照组注射等体积生理盐水.另设正常对照组SD大鼠20只,注射等体积生理盐水作为正常对照组.各组大鼠于股静脉注射LPS后6小时,对侧股静脉抽血测血常规,分离血浆检测血浆TNFa和凝血象.于注射LPS后72小时处死大鼠,取肝、肾、脾、肺、心、脑组织进行病理组织学检查.结果表明:成功地在酵母表达系中表达了目的多肽,其表达量达到30 mg/L,所表达的多肽具有结合肝素活性.在多肽抗DIC作用的动物实验中发现多肽治疗组的血浆TNFa水平、血常规指标、凝血象和病理组织学的改变都较生理盐水对照组更接近正常对照组.结论:成功地制备了rhFNHN-29多肽,这种多肽能在一定程度上预防和治疗DIC.
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纤维连接蛋白治疗败血症的研究进展
败血症是临床危重症,严重者可引起休克、弥散性血管内凝血和多器官功能衰竭.纤维连接蛋白是一种高分子质量多功能糖蛋白,它能调节单核-巨噬细胞系统的作用,在清除细菌性颗粒、激活凝血因子、纤维蛋白、微粒体、胶原碎屑及免疫复合物等方面起非特异调理作用.纤维连接蛋白同时还具有维持血管通透性作用,从而发挥抗感染、抗败血症的作用.
