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208例BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病JAK2、CALR、MPL基因突变检测及其诊断价值
目的:检测经典BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病患者JAK2、CALR、MPL基因突变,探讨其诊断价值.方法:2012年3月至2015年12月208例BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病患者(ET146例,PV37例,MF25例)纳入BCR/ABL1阴性CMPN组,124例继发性血小板增多及73例继发性红细胞增多症患者纳入对照组.抽取骨髓或静脉血提取基因组DNA及总RNA,进行JAK2基因外显子12至20,MPL基因外显子10以及CALR基因外显子3至9测序分析.结果:146例ET患者中,JAK2V617F突变86例(58.9％);JAK2 exon 12突变2例(1.4％);CALR突变41例(28.1％),其中Ⅰ型(c.1092_1143del) 22例,Ⅱ型(c.1154_1155insTTGTC) 11例,V型(c.1091_1142del)l例,Ⅷ型(c.1104_1137del)1例,41型(c.1107_1137del)1例,42型(c.1125_1125del)1例,其他(c.1107_1115del,c.1111_1144del,c.1101A＞C,c.1112_1117del)4例;MPL基因突变9例(6.2％).JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性的患者有8例(5.4％).37例PV中检出JAK2以及CALR突变共35例(94.6％),其中JAK2V617F突变31例(83.8％),JAK2 exon 12突变2例(5.4％);CALR突变2例(5.4％),其中Ⅰ型1例,另1例为CALRc.1191_1193del.JAK2、CALR、MPL突变均阴性2例.25例MF中检出JAK2V617F突变19例(76％),CALR突变2例(8％);JAK2、CALR、MPL突变均阴性的患者有4例(16％).124例继发性血小板增多的患者以及73例继发性红细胞增多的患者中,均未检测出JAK2、CALR或者MPL基因突变.结论:联合JAK2、CALR、MPL基因突变能覆盖大多数BCR/ABL1阴性的骨髓增殖性疾病患者,CALR突变在ET患者中检出率较高,因此CALR突变可作为JAK2、MPL突变阴性的ET的新诊断指标.
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Janus相关激酶2基因缺失对胰岛β细胞存活及其功能的影响
目的 探讨Janus相关激酶2(Jak2)对小鼠胰岛β细胞存活及其功能的影响.方法 将诱导型胰岛β细胞特异性Cre转基因小鼠(Rip-CreER tg)与条件性Jak2基因敲除小鼠(Jak2f/f)反复杂交后得到Rip-CreER-Jak2f/f后代,Rip-CreER阳性Jak2双Loxp的雄性小鼠(Rip-CreER-Jak2f/f)为实验组(KO组,40只),同窝生的Rip-CreER阴性Jak2f/f雄性小鼠作为对照组(40只).KO组与对照组小鼠体重20~22 g,鼠龄8周.KO组于8周时腹腔注射他莫昔芬诱导β细胞特异性敲除Jak2基因,对照组给予同样剂量他莫昔芬诱导,在他莫昔芬诱导后一周开始实验检测.采用聚合酶链反应及Western blotting分析检测Jak2在β细胞中的表达缺失,监测小鼠随机血糖及腹腔糖耐量实验评价小鼠胰岛功能.给予KO组和对照组小鼠不同剂量的链脲佐菌素(STZ)刺激,观察Jak2对β细胞存活的调节作用.两两比较采用独立样本的t检验进行统计分析,糖尿病发病率及小鼠病死率用Kaplan-Meier生存模型进行分析.结果 成功建立了诱导型胰岛β细胞特异性敲除Jak2小鼠模型.随机血糖监测发现KO组小鼠无自发糖尿病.KO组与对照组小鼠在150 mg/kg的STZ刺激下,糖尿病发生率差异无统计学意义(83.3%比91.6%,P=0.3928).在亚致病剂量100 mg/kg的STZ刺激下两组小鼠的糖尿病发病率均为20%,2组平均血糖值差异无统计学意义[(11.0 ± 6.6)比(12.0 ± 5.7)mmol/L,t=0.7931,P=0.4258].给予KO组及对照组小鼠致死剂量250 mg/kg的STZ刺激,KO组与对照组小鼠死亡率在给药后第25天无统计学差异(92.3%比93.75%,P=0.5540).结论 小鼠胰岛β细胞的Jak2基因高表达,但对β细胞的存活及功能无影响.
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钙网蛋白基因突变的原发性血小板增多症二例并文献复习
目的 探讨钙网蛋白(CALR)基因在原发性血小板增多症(ET)诊断中的临床价值.方法 分析2例CALR基因突变的ET病例,并进行相关文献复习.结果 结合实验室检查、骨髓检查及CALR 基因阳性结果,2例患者明确诊断为 ET,给予阿司匹林联合干扰素 α治疗,病情稳定.结论 CALR基因在JAK2阴性的ET中具有重要的诊断价值,值得临床推广.
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CALR基因突变在骨髓增殖性肿瘤中的临床研究
目的：探讨经典的断裂点簇集区/Abelson白血病病毒(BCR/ABL)融合基因阴性骨髓增殖性肿(MPN)患者中钙网蛋白(CALR)基因突变的发生率,分析CALR基因突变阳性MPN的临床特点。方法依据2008年WHO造血组织和淋巴组织肿瘤分类标准对2012年1月~2015年3月在临沂市沂水中心医院就诊的72例临床初诊为“MPN”患者进行诊断时采用直接测序法检测CALR基因突变,采用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测JAK2V617F突变。分析CALR基因突变阳性MPN的临床表现及实验室检查特点。结果在22例真性红细胞增多症(PV)患者中16例携带有JAK2V617F突变(突变率为68%),未检测出CALR基因突变；26例原发性血小板增多症(ET)患者中12例携带有JAK2V617F突变(突变率为46%),8例检测出CALR基因突变(突变率为31%),JAK2V617F突变阴性患者中CALR基因突变率为57豫(8/14)；23例原发性骨髓纤维化(PMF)患者中11例携带有JAK2V617F基因突变(突变率为49%),8例检测出CALR基因突变(突变率为35%),JAK2V617突变阴性患者中CALR基因突变为为67%(8/12)。72例患者中均未检测到MPL515突变。结论 CALR基因突变是JAK2V617突变阴性的MPN特异性分子标志物。将CALR基因突变检测纳入MPN诊断标准可以提高诊断的准确性减少漏诊率。
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JAK2基因V617F点突变在高原红细胞增多症患者中的临床意义研究
高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)表现为红细胞大量增殖,但是对于其发生的分子机制尚未阐明.2005年国际上多个研究小组报道了在骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者尤其是在真性红细胞增多症(polycythemia Vera,PV)患者中存在特定的JAK2V617F基因突变,并证实其与MPN的发病有着密切的联系[3].
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骨髓纤维化JAK2V617F突变的临床意义
目的 分析骨髓纤维化患者JAK2V617F突变与外周血常规的关系.方法 利用Taqman-MGB探针联合实时聚合酶链反应方法检测30例原发性骨髓纤维化的JAK2V617F突变情况,并比较JAK2V617F突变与无突变患者的外周血常规改变.结果 30例中12例JAK2V617F突变,突变率为40％.JAK2V617F突变12例外周血白细胞平均(13.07 ±3.71)×109/L显著高于JAK2V617F无突变18例外周血白细胞平均(4.37±2.59)×109/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01),但两组血红蛋白及血小板数比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨髓纤维化患者中JAK2V617F突变者外周血白细胞数高于JAK2V617F无突变者,这对治疗有一定的指导意义.
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21例生长激素不敏感综合征患儿生长激素受体信号通路缺陷与临床关联研究
目的 探讨儿童生长激素不敏感综合征(GHIS)的分子病因及临床表型的相关性.方法 对21例临床诊断GHIS患儿的4个关联候选基因(GHR、IGFALS、JAK2和STAT5B)进行基因组DNA序列筛查与临床关联参数分析.结果 所有患儿平均身高标准差(standard deviation,SDS)-4.33±1.91(-9.17-2.21),平均血清GH峰值(22.67±20.98) μg/L(11.33 ～ 104.21 μg/L),基础血清胰岛素样生长因子Ⅰ SDS-2.65±0.53(-3.57 ～-1.79)、胰岛素样生长因子结合蛋白3 SDS-1.77±1.64(-4.13～0.96);骨龄较实际年龄落后差值(实际年龄-骨龄)为(43.10±19.54)个月(6～ 82个月).在2例伴面中部发育不良的重型矮小者中发现1例GHR第六内含子5'剪接位点纯合突变(IVS6 ds+1 G-A),3例轻型矮小者被发现IGFALS基因新发变异:c.1097T＞C c.1098C＞T p.V366A(复合杂合型)、c.1229C＞T p.S410L(杂合型)、5'UTR区染色体第1843707位碱基A→G(纯合型).JAK2、STAT5b基因未发现突变.结论 GHIS是原发性胰岛素样生长因子Ⅰ缺乏的重要病因,其分子病理涉及GHR及受体后信号通路缺陷.本文21例GHIS患儿中仅发现1例GHR突变和3例IGFALS变异,提示GHR和IGFALS缺陷可能参与致病,但并不是其主要分子缺陷,更多的分子病理机制尚有待进一步深入研究.
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Jak2基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病遗传易感性的研究
目的 探讨jak2基因多态性与中国汉族儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)遗传易感性的相关性以及儿童ALL的发病因素.方法 采用SNaPshot SNP分型技术检测141例ALL患儿(病例组)和239例健康儿童(对照组)的10个单核苷酸多态性位点(SNP),包括fs10974944、rs10974947、rs12343867、rs2230722、rs2230724、rs2274472、rs4495487、rs56118985、rs6476933和rs7046736,比较两组儿童基因型特征.结果 病例组rs10974947位点G/A+A/A的分布明显低于对照组,G/G基因型分布显著高于对照组(x2=5.042,P=0.025).结论 jak2基因rs10974947位点G/G基因型与中国汉族儿童急性淋巴细胞白血病易感性相关.
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高分辨率熔解曲线法检测JAK2基因V617F突变及其应用
目的 探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用.方法 以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条件,分别以优化的HRM法和直接测序法对63例临床疑似骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者DNA标本进行JAK2基因V617F突变检测,评价2种检测方法结果的一致性.结果 HRM法可检出系列混合样本中5％的突变型等位基因突变,且重复性较高.以测序法为金标准,HRM法的敏感性和特异性均为100％,两种方法结果一致.结论 HRM法能够在单一闭管体系中实现对JAK2基因V617F突变的检测,具有较高的敏感性和特异性,可用于JAK2基因V617F突变的临床检测.
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JAK2基因阴性骨髓增殖性肿瘤与CALR基因突变的相关性诊断研究进展
长久以来,国内外大量研究都证实了Janus激酶2(Janus kinase 2, JAK2)基因突变在骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative diseases, MPD)中的高发阳性率,2016年世界卫生组织诊断标准也重申了JAK2基因作为诊断MPD的重要性.虽然JAK2基因的体细胞突变发生在许多MPD中,但是仍存在大量JAK2阴性的骨髓增殖性肿瘤,且其分子发病机制仍不明确.因此这类肿瘤的诊断标准亟待进一步研究.近年来,国外研究表明:采用全基因组测序(whole ge-nome shot-gun,WGS)技术在JAK2阴性的一组MPN患者中,发现一新的高频基因突变:钙网蛋白(Calreticulin,CALR)基因突变[1-2].
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JAK2基因多态性与急性淋巴细胞白血病患儿重症感染和肝损害的相关性研究
目的 探讨JAK2基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗过程中发生重症感染和肝损害的相关性.方法 选择复旦大学附属儿科医院2008年1月至2013年12月共141例ALL初诊患儿,收集患儿的临床资料及外周血标本,采用SNaPshot单核苷酸多态性(SNP)分型技术对141例初诊ALL患儿JAK2基因上10个SNPs位点进行基因分型,包括rs10974944、rs10974947、rs12343867、rs2230722、rs2230724、rs2274472、rs4495487、rs56118985、rs6476933、rs7046736,采用Pearson x2检验分析10个多态性位点不同基因型在重症感染组和肝损害发生组中的分布差异.结果 rs10974944 G/G、rs10974947 G/G、rs12343867 C/C、rs2230722 T/T、rs2230724 A/A、rs4495487 C/C、rs7046736 A/A基因型在重症感染组中的分布均明显高于无重症感染组(P均＜ 0.05),提示这些基因型与重症感染相关.而10个SNPs位点各基因型在肝损害组中的分布差异均无统计学意义(P＞0.05),提示10个位点多态性与肝损害发生均无显著相关性.结论 JAK2基因多态性与中国汉族ALL儿童化疗中发生重症感染有关,而与肝损害发生无显著相关性.对JAK2基因进行相关位点多态检测,可以早期预防重症感染的发生,从而提高总体生存率,改善预后.
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难治性贫血伴环形铁粒幼细胞患者SF3B1基因突变病例报告
目的:提高对难治性贫血伴环形铁粒幼细胞(RARS)患者检测SF3B1基因突变的认识.方法:回顾性分析2例RARS并SF3B1(K700E)基因突变患者的临床资料并进行相关文献复习.结果:2例患者均有头昏、乏力症状,均为难治性贫血,白细胞计数和分类正常,血小板计数增高,骨髓象粒系减低,红系增生占56％～72.4％,其中畸形红细胞占12％ ～ 14％,粒系、巨核细胞也见畸变.细胞外铁++～+++,铁粒幼细胞74％～ 95％,其中环形铁粒幼细胞占24％ ～ 28％.骨髓活检增生明显～极度活跃(占80％),染色体核型正常,JAK2基因阴性,SF3B1 (K700E)基因阳性,2例均诊断RARS(SF3B1K700E基因突变).文献报告RARS伴血小板增多又伴JAK2基因突变,患者用小剂量雷那度胺治疗有效.结论:对RARS患者进行SF3B1、JAK2等基因检测,可给患者提供适当的治疗方法,做好针对个体化精准治疗,改善贫血,提高疗效.
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广东汉族人群JAK2 rs7849191位点单核甘酸多态性与2型糖尿病遗传易感性研究
目的 了解JAK2 rs7849191位点单核苷酸多态性(SNP)与2型糖尿病遗传易感性关系.方法 采用SNPscanTM分型技术检测广东地区汉族人群中1 092例2型糖尿病患者和1 092名正常对照JAK2 rs7849191位点基因型,比较两组中基因型及等位基因频率分布.结果 糖尿病患者和正常对照中JAK2 rs7849191位点的等位基因频率和基因型频率分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论 广东地区汉族人群中2型糖尿病患者遗传易感性可能与JAK2 rs7849191位点SNP无关.
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JAK2基因突变对早期骨髓增殖性肿瘤的诊治意义
目的 研究JAK2 V617F点突变对早期骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN)的诊断和治疗意义.方法 选择39例血细胞升高但未达到世界卫生组织关于MPN诊断标准的患者,采用等位基因特异PCR.法检测各组患者JAK2 V617F的突变情况.结果 39例患者中26例JAK2 V617F突变阳性,总突变率66.7％,其中原发性血小板增多症(ET)13例(50.0％),真性红细胞增多症(PV)12例(46.2％),原发性骨髓纤维化(PMF)1例(3.8％).与对照组相比,在血常规方面,研究组的血红蛋白浓度、白细胞计数、血小板计数均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；在并发症方面,研究组患者出血、血栓形成、脾大等的发生率低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JAK2V617F点突变在早期MPN患者中有较高的发生率,具有明确的诊断学意义,可为早期治疗找到突破口.
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早期检测JAK2基因在预防血栓性疾病中的意义
JAK2-V617F基因是发生在造血干/祖细胞水平的体细胞功能获得性突变,功能研究以及模式动物研究显示,该突变可引起JAK2基因激酶及下游信号通路的持续活化,导致细胞恶性增殖和凋亡抑制,终引起真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)等疾病的发生[1-2].其中真性红细胞增多是以克隆性真性红细胞增多为主的骨髓增殖性疾病,90％～95％的患者都可以发现早期JAK2-V617F基因突变;原发性血小板增多症也是造型干细胞克隆性疾病,约50％～70％的患者有早期JAK2-V617F基因突变[3].因此,早期检测JAK2-V617F基因是早期诊断真性红细胞增多症、原发性血小板增多症的极好手段.据统计,本区血栓性疾病的发生率在逐年增加,病因多种,其中真性红细胞增多症、原发性血小板增多症导致血栓性疾病发生的概率很大,致残率很高.
关键词： JAK2基因 血栓形成/预防和控制 早期诊断 -
BCR-ABL1阴性骨髓增殖性肿瘤骨髓病理学及临床特征分析
目的 提高对骨髓增殖性肿瘤骨髓活检形态学、基因突变检测及临床特征的认识,减少疾病的漏诊和误诊.方法 收集3例不明原因脾肿大患者的临床资料,进行回顾性分析.结果 3例中血常规正常1例,3例骨髓活检中巨核细胞形态特点不同,均检测到相关基因突变.结论 对于不明原因脾肿大患者,无论血常规有无异常,都要结合骨髓形态学、骨髓活检、分子生物学排除骨髓增殖性疾病(MPN)的可能,骨髓活检中巨核细胞特征对鉴别MPN有意义.
关键词： 骨髓增殖性肿瘤 BCR-ABL1基因 JAK2基因 CALR基因 -
原发性血小板增多症患者相关基因的表达及临床意义
目的 探讨原发性血小板增多症(ET)患者JAK2、CALR和MPL基因突变率及与临床的相关性.方法 回顾性分析2006年1月—2017年12月在新疆医科大学第一附属医院确诊的253例ET患者的临床资料,并进行统计学分析.结果 ET患者中JAK2、CALR和MPL基因突变率分别为52.57％,7.51％和4.35％,差异有统计学意义(P<0.05);年龄、血栓形成、血小板、白细胞和血红蛋白在JAK2阳性与阴性组间差异有统计学意义(P<0.05);白细胞计数在CALR阳性与阴性组间差异有统计学意义(P<0.05);脾大、血小板、白细胞和血红蛋白在MPL阳性与阴性组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 ET患者中JAK2基因突变率较高;不同基因突变与不同临床特征相关.
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CALR基因突变的原发性血小板增多症三例并文献复习
目的 探讨原发性血小板增多症(ET)中CALR基因突变患者的临床特征.方法 报道宁夏回族自治区人民医院确诊的3例CALR基因突变的ET患者,并进行相关文献复习.结果 结合实验室、骨髓检查及CALR基因检测结果,3例患者明确诊断为CALR基因突变阳性ET,长期给予阿司匹林联合干扰素α治疗,病情稳定.结论 CALR基因在JAK2和MPL阴性的骨髓增殖性肿瘤患者中具有重要诊断价值.
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伴CALR基因突变原发性血小板增多症九例并文献复习
目的 探讨伴CALR基因突变原发性血小板增多症(ET)的临床特征、实验室特点及诊断.方法 回顾性分析2015年7月至2016年11月宁夏回族自治区人民医院确诊的9例伴CALR基因突变的ET病例,其中男性5例,女性4例,年龄31～70岁,中位年龄55岁.结果 9例患者血小板数均明显增高,白细胞数、血红蛋白水平均在正常范围,仅1例患者脾脏轻度大,8例患者有头晕症状.CALR基因3例为缺失突变,6例为插入突变.9例患者均给予阿司匹林联合干扰素治疗,血小板数均有不同程度的下降.结论 CALR基因在JAK2和MPL阴性的骨髓增殖性肿瘤患者中具有重要诊断价值,未来CALR基因靶向治疗值得期待.
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骨髓增殖性肿瘤治疗与发病机制的研究进展
bcr-abl阴性的慢性骨髓增殖性肿瘤(MPN)是起源于造血干细胞的克隆性疾病,包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和原发性骨髓纤维化(PMF).随着JAK2基因突变的发现,研究者又陆续发现了许多新基因突变,使得对MPN发病机制的认识逐步深入,针对这些发病机制的新型药物也不断出现.
