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人肝细胞癌金属蛋白酶组织抑制因子-3的表达及与其基因启动子甲基化的关系
目的探讨肝细胞癌的发生和门脉浸润机制.方法 20例肝细胞癌患者,每例在手术后分别取原发瘤、门脉瘤栓及远离肝癌之肝组织.用Western印迹法检测金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIMP-3 mRNA的表达,用甲基化特异性PCR检测TIMP-3基因启动子的甲基化.结果远离肝癌之肝组织中均可见TIMP-3蛋白和mRNA的表达,原发瘤和门脉瘤栓组织TIMP-3蛋白和mRNA表达明显降低,其中分别有5例和6例完全丢失.远离肝癌之肝组织均未发现TIMP-3启动子甲基化.原发瘤中有7例、门脉瘤栓组织中有9例出现甲基化.所有有甲基化的肝癌组织,包括原发瘤和门脉瘤栓,有13例TIMP-3 mRNA和蛋白表达完全丢失,6例表达降低.TIMP-3启动子甲基化和肝细胞癌组织学分级无关(P>0.05).结论肝细胞癌的发生和门脉浸润与TIMP-3基因和蛋白缺失或降低相关、而TIMP-3启动子甲基化是其基因和蛋白缺失或降低的原因.
关键词： 肝肿瘤 金属蛋白酶3组织抑制剂 启动区(遗传学) 甲基化 -
谷氨酰胺对脓毒症幼年大鼠心肌基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的影响
目的 探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌胶原的保护机制.方法 选健康18日龄Wistar大鼠121只,每个时间点随机取11只按腹腔注射药物不同分为:(1)生理盐水对照组(0 h);(2)内毒素(LPS);(3)谷氨酰胺治疗(Gln)组.后两组又分为2、4、6、24及72 h时点.在各时点分离心脏,8只用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)mRNA表达,另3只用于石蜡切片,用免疫组化方法测定金属心肌基质蛋白酶3(MMP-3)及其TIMP-3,以及用原位杂交方法测定MMP-3 mRNA表达.结果 (1)LPS组各时点MMP-3及其mRNA表达较0 h组增强,在6 h达高峰,到72 h虽然有所下降仍高于对照组,P＜0.01;Gln组各时点MMP-3mRNA及其蛋白质表达也较0 h组增强,但较LPS组各时点为弱,高点在24 h,P＜0.01;(2)LPS组各时点TIMP-3以及mRNA表达较0 h组明显减弱,在6 h低,P＜0.01;Gln组各时点TIMP-3以及mRNA表达也较0 h组减弱,但较LPS组为强,低点在24 h,P＜0.01.(3)脓毒症组比Gln组心脏,超微结构改变明显.结论 (1)在脓毒症时MMP-3及其mRNA表达增强,而TIMP-3及其mRNA表达受抑制.(2)谷氨酰胺可以减轻这种影响,而且使这种损伤作用时间向后推迟.
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基质金属蛋白酶-2和组织金属蛋白酶抑制因子-3在贲门癌中的表达及其临床意义
目的 研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)在贲门癌中的表达及与病理分期间的关系.方法 115例贲门癌患者手术切除标本,以其中40例患者癌旁非肿瘤胃组织(离癌灶边缘>5 cm)为正常对照,二步法免疫组织化学检测MMP-2、TIMP-3的表达,分析二者表达与病理分期之间的关系;并通过Kaplan-Meier寿命表法分析与预后的关系;COX模型多因素分析贲门癌的独立预后因子.结果 MMP-2在贲门癌和癌旁对照组织阳性表达率分别为57.4%(66例)和40.0%(16例)(P<0.05),其表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期正相关,与贲门癌患者预后呈负相关(P<0.05).TIMP-3在贲门癌和癌旁对照组织阳性表达率分别为48.7%(56例)和95.0%(38例)(P<0.05),其在贲门癌中的表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期负相关,与患者预后正相关.结论 MMP-2表达增加及TIMP-3表达缺失,在贲门癌侵袭、转移中发挥重要作用.联合检测MMP-2与TIMP-3,有助于了解贲门癌的发展和评估贲门癌患者的预后.
关键词： 胃肿瘤 免疫组织化学 基质金属蛋白酶2 金属蛋白酶3组织抑制剂 -
贲门癌中组织金属蛋白酶抑制因子-3基因启动子甲基化水平及其临床意义
目的：研究贲门癌中组织金属蛋白酶抑制因子-3（TIMP-3）基因启动子甲基化水平及其蛋白表达的相关性，并分析与临床病理之间关系。方法运用甲基化特异性实时荧光定量聚合酶链反应（qMSP）技术和免疫组织化学方法检测65例贲门癌患者的癌组织、癌旁正常胃组织中 TIMP-3基因启动子甲基化状态及蛋白表达情况。结果 TIMP-3基因启动子甲基化在贲门癌和癌旁正常胃组织阳性表达率分别为78.5%（51／65）和13.8%（9／65）（P＝0.018），其甲基化率与肿瘤直径、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期呈正相关。TIMP-3蛋白在贲门癌和癌旁正常胃组织阳性表达率分别为26.2%（17／65）和95.4%（62／65）（P＝0.016），其在贲门癌中的表达与肿瘤直径、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及 TNM分期呈负相关。贲门癌 TIMP-3启动子甲基化及蛋白表达呈负相关（相关系数γ＝-0.455，P＝0.000）。结论 TIMP-3启动子甲基化在贲门癌中导致蛋白表达缺失，并在贲门癌侵袭、转移过程中发挥重要作用。
关键词： 贲门癌 免疫组织化学 甲基化 金属蛋白酶3组织抑制剂 -
基质金属蛋白酶3及其抑制剂3在子痫前期患者胎盘中的表达
目的:通过检测子痫前期患者胎盘组织中基质金属蛋白酶3(MMP-3)及其抑制剂3(TIMP-3)的表达,以探讨两者的关系及其在子痫前期发病中的作用.方法:收集34例子痫前期患者(子痫前期组)及32例正常晚期妊娠妇女(正常对照组)的胎盘组织,用免疫组化法检测MMP-3及TIMP-3在胎盘组织中的表达.同时进行HE染色,选取5个高倍视野,计数绒毛血管数.结果:①MMP-3和TIMP-3在胎盘组织的蜕膜细胞和绒毛滋养细胞均有表达.②子痫前期组胎盘蜕膜细胞和绒毛滋养细胞中MMP-3的表达均显著低于对照组(P＜0.01).TIMP-3在子痫前期组胎盘蜕膜细胞和绒毛滋养细胞中的表达量均显著高于对照组(P＜0.01).③子痫前期组胎盘绒毛血管密度明显低于对照组(p＜0.01).结论:子痫前期患者胎盘中MMP-3与TIMP-3的表达情况与正常晚期妊娠妇女存在差异,提示妊娠妇女胎盘组织中MMP-3和TIMP-3的表达水平变化可能与子痫前期的发生、发展相关.
关键词： 先兆子痫 基质金属蛋白酶3 金属蛋白酶3组织抑制剂 胎盘 -
脱氢表雄酮对兔骨关节炎软骨ADAMTS/TIMP-3酶系统调节的实验研究
目的 观察关节腔内注射脱氢表雄酮(DHEA)对兔骨关节炎模型含血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)/金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-3酶系统的影响,并探讨其作用机制.方法 60只新西兰大白兔行双侧前交叉韧带切除术,术后4周,根据随机化原则于每只兔一侧膝关节腔内注射100 mmol/L DHEA(实验组),另一侧关节腔内注射相同剂量的二甲基亚砜(对照组),每周1次,共注射8周.术后12周行膝关节X线检查后处死兔子,取膝关节行大体和组织病理学检查,取股骨内髁软骨组织行羟脯氨酸及糖胺聚糖含量测定,用反转录聚合酶链反应方法检测关节软骨中蛋白聚糖酶-1、蛋白聚糖酶-2、TIMP-3、转化生长因子(TGF)-β1、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原的表达,用蛋白印迹法检测关节软骨中Ⅱ型胶原及蛋白聚糖裂解片段(Aggrecan ARGxx)的表达.采用两样本Mann-Whitney检验或t检验进行统计学分析.结果 对照组股骨髁及胫骨平台软骨退变程度显著高于实验组(Z=-3.517,P＜0.01；Z=-2.518,P＜0.05).实验组软骨病理学评分(5.3±1.2)显著低于对照组(10.1±1.3),差异有统计学意义(P＜0.01)；实验组羟脯氨酸湿质量(5.7±0.3) μg/ml,干质量(23.6±1.7) μg/ml和糖胺聚糖[(30±4) μg/ml]含量显著高于对照组[湿质量(4.6±0.5) μg/ml,干质量(18.5±1.4),糖胺聚糖(24±4)μg/ml],差异有统计学意义(P＜0.01)；实验组软骨ADAMTS-4 (0.15±0.03)、ADAMTS-5 (0.10±0.04)的mRNA表达显著低于对照组(0.29±0.08,0.15±0.05,P均＜0.05)；而TIMP-3 (0.85±0.10)、TGF-β1(1.2±0.4)、蛋白聚糖(0.87±0.31)及Ⅱ型胶原(2.7±0.6)的mRNA表达显著高于对照组(0.70±0.13,0.8±0.4,0.49±0.16,2.2±0.5),差异有统计学意义(P均＜0.05)；实验组蛋白聚糖ARGxx(0.53±0.10)的蛋白表达显著低于对照组(0.81±0.12)；Ⅱ型胶原(2.3±0.7)蛋白表达显著高于对照组(1.7±0.5),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DHEA对骨关节炎关节软骨具有保护作用,可延缓进展.DHEA还促进TGF-β1的表达,延缓软骨基质组分蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的丢失,从而对抗骨关节炎软骨退变的进展.
关键词： 骨关节炎 去氢表雄酮 金属蛋白酶3组织抑制剂 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对DU145前列腺癌细胞TIMP-3基因去甲基化作用及侵袭能力的影响
目的 观察5-氮-2'-脱氧胞苷(5Aza-dc)对DU145前列腺癌细胞金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)启动子去甲基化作用及侵袭能力的影响.方法 用5Aza-dc处理DU 145前列腺癌细胞,Transwell检测癌细胞的侵袭及运动能力,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIMP-3 mRNA的表达,Western印迹检测TIMP-3的蛋白表达.结果 5Aza-dc作用后的DU 145细胞侵袭及运动能力降低;TIMP-3 mRNA及蛋白恢复表达;TIMP-3启动子区去甲基化.结论 5Aza-dc可以使DU145前列腺癌细胞TIMP-3启动子区去甲基化,使TIMP-3基因重新表达,恢复其抑制肿瘤侵袭和移动的能力.
关键词： 前列腺肿瘤 DNA甲基化 金属蛋白酶3组织抑制剂 -
5-氮-2'-脱氧胞苷对DU145前列腺癌细胞TIMP-3基因去甲基化作用及侵袭能力的影响
目的 观察5-氮-2'-脱氧胞苷(5Aza-dc)对DU145前列腺癌细胞金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)启动子去甲基化作用及侵袭能力的影响.方法 用5Aza-dc处理DU 145前列腺癌细胞,Transwell检测癌细胞的侵袭及运动能力,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIMP-3 mRNA的表达,Western印迹检测TIMP-3的蛋白表达.结果 5Aza-dc作用后的DU 145细胞侵袭及运动能力降低;TIMP-3 mRNA及蛋白恢复表达;TIMP-3启动子区去甲基化.结论 5Aza-dc可以使DU145前列腺癌细胞TIMP-3启动子区去甲基化,使TIMP-3基因重新表达,恢复其抑制肿瘤侵袭和移动的能力.
关键词： 前列腺肿瘤 DNA甲基化 金属蛋白酶3组织抑制剂 -
白细胞介素-1β对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3和TIMP-1表达的影响
目的:观察白细胞介素-1β对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3和TIMP-1表达的影响,探讨原发性开角型青光眼的发病机制.方法:①对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,应用免疫组化方法(NSE,Ⅷ因子相关抗原染色)鉴定细胞,化学及电子透射电镜对细胞进行形态学及生长特性的观察.②对传三代的小梁细胞分别施加含IL-1β终浓度为0,12.5,25,50ng/ml的培养液,48h后行MMP3免疫组化SP染色,结果进行计算机图像分析并进行统计学检验.③分组提取细胞培养液用ELASA检测TIMP-1量的变化.结果:体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3,IL-1β可增加MMP3的表达,并且抑制TIMP-1的表达.结论:IL-1β在一定范围内通过增加MMP3的表达,抑制TIMP-1的表达来减少小梁细胞细胞外基质的堆积,使房水引流通畅,降低眼内压.
