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cyclin D1过表达对子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞增殖及上皮间质转化的影响
目的 探讨cyclin D1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、分化的影响及其他信号分子的变化情况.方法 采用PCR法扩增cyclin D1基因全长,构建cyclin D1-pcDNA3.1质粒转染人乳头状瘤病毒16阳性的SiHa细胞,筛选cyclin D1稳定过表达细胞株.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot分别检测转染细胞cyclin D1 mRNA和蛋白表达.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,采用RT-PCR法和Western blot检测转染细胞CK7、E-cadherin、波形蛋白、Snail基因的mRNA和蛋白表达;采用RT-PCR法检测增殖分化相关基因CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E、Rb、E2F、E6/E7、Ki-67基因的mRNA表达水平.对细胞同步化处理,用RT-PCR法检测细胞周期不同时间点cyclin D1及p21基因的mRNA表达情况.结果 成功构建cyclin D1稳定过表达的G-3细胞株.生长曲线及Ki-67 mRNA升高(P<0.05)提示G-3细胞增殖速度加快,G-3细胞中波形蛋白、Snail基因和蛋白表达明显增加(均P<0.05),E-cadherin、CK7基因和蛋白表达明显降低,提示转染细胞发生了上皮间质转化.cyclin D1过表达后,CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E表达增加,Rb、E2F、E6/E7、p16表达无明显改变,p21与cyclin D1表达趋势基本一致,在细胞周期不同时间点表达存在波动性.结论 转染诱导cyclin D1过表达可促进SiHa细胞增殖和上皮间质转化,这一过程中伴随着CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E基因表达的上调.cyclin D1过表达时,p21表达量也增高,可能通过影响波形蛋白表达参与了对SiHa细胞上皮间质转化的调控.
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Rac/PAK 信号通路与肿瘤的关系及其在结直肠癌中的研究进展
Rac 及其下游靶蛋白 p21活化激酶（PAK）均是近新发现的多功能效应因子，与多种肿瘤的发生、发展密切相关。PAK主要通过其N端调节/黏附区的p21结合域（PBD）与上游调节器Rac相互作用从而使Rac/PAK信号通路激活，在结直肠癌的发生、发展、侵袭及转移中发挥重要的作用。随着研究的深入，越来越多的证据表明Rac/PAK信号通路不仅可以作为一种预测因子来判断结直肠癌的恶性进展及估计预后并且可能成为结直肠癌治疗的药物靶点，这些都为Rac/PAK信号通路应用于结直肠癌的诊疗提供了广阔的前景。
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P21活化激酶1小分子干扰RNA对胃癌BGC823细胞生长的影响
目的 观察Pak1 siRNA 对胃癌BGC823 细胞生长和细胞周期的影响.方法 Westernblot 检测Pak1 在胃癌细胞中的表达.BGC823 细胞转染Pak1 siRNA 后,MTT 分析和细胞计数观察BGC823 细胞的生长情况,同时进行细胞周期测定.结果 Pak1 在胃癌BGC823 细胞中高表达,且能被Pak1 siRNA 干扰达72.24%.BGC823 细胞在转染Pak1 siRNA 后,生长明显受到抑制(P ＜0.05),细胞周期在G2/M 期发生阻滞,转染Pak1 siRNA 组G2/M 比率[(20.12 ±1.64 )%] 较对照组[(8.70 ±1.69)%,P ＝0.008]明显升高.结论 Pak1 siRNA 能够影响细胞周期,从而抑制胃癌BGC823 细胞的生长.
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PAK5和CyclinD1在肝细胞肝癌中的表达及预后意义
目的 探讨P21活化激酶5(P21-activated kinase 5,PAK5)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在肝细胞肝癌中的表达特点及其与临床病理因素和预后的关系.方法 采用免疫组化法检测76例肝癌组织及31例癌旁组织中PAK5、CyclinD1的表达情况,并分析PAK5、CyclinD1与肝癌患者临床病理因素及预后的相关性.结果 PAK5在肝癌组织和癌旁组织的表达阳性率分别为86.8％(66/76)、54.8％(17/31),差异有统计学意义(x2=12.962,P＜0.05);CyclinD1癌组织和癌旁组织阳性表达率分别为73.7％(56/76)、41.9％(13/31),差异有统计学意义(x2=9.691,P＜0.05).PAK5表达与性别(x2=5.063,P=0.024)、肿块直径(x2=9.159,P=0.002)、门静脉癌栓(x2=4.469,P=0.035)相关;CyclinD1表达与门静脉癌栓(x2 =4.842,P=0.028)、TNM分期(x2=7.930,P=0.005)相关.PAK5表达与CyclinD1表达呈正相关(γ=0.284,P=0.033).PAK5阳性患者术后生存时间显著低于阴性患者(x2=7.104,P=0.008).Cox多因素分析显示PAK5是影响肝癌患者预后的独立影响因素(RR =0.186,P=0.012).结论 PAK5阳性表达的肝细胞肝癌患者预后不良.
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p21活化激酶1在胰腺癌中的表达及其意义
目的 探讨p21活化激酶1(PAK1)蛋白在胰腺癌中的表达及其意义.方法 选取胰腺癌组织标本33例作为研究组,胰腺癌周围正常组织标本33例作为对照组,应用免疫组织化学技术检测组织中PAK1蛋白的表达情况.结果 研究组中PAK1蛋白的阳性表达率明显高于对照组[69.7％(23/33)比27.3％(9/33),x2=11.89,P=0.001];且Ⅲ+Ⅳ期胰腺癌组织中PAK1阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期[93.3％(14/15)比50.0％(9/18),x2=5.367,P=0.021].结论 PAK1蛋白可能与胰腺癌发生、发展有关.
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PAK1在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌细胞侵袭能力的影响
目的 探讨P21活化激酶1(PAK1)在膀胱癌组织中的表达和其对膀胱癌细胞侵袭能力的生物学影响.方法 免疫组化法检测2009年1月至2012年12月在复旦大学附属金山医院手术获取的54份膀胱癌组织蜡块和12份正常膀胱组织蜡块中PAK1的表达情况,实时荧光定量PCR、Western印迹实验验证PAK1在膀胱癌细胞系和正常膀胱上皮细胞系中的表达差异.构建PAK1基因沉默的膀胱癌5637细胞稳定株,Transwell法检测PAK1基因沉默的膀胱癌5637细胞迁移及侵袭能力的改变.结果 PAK1在膀胱癌组织的表达明显高于正常膀胱上皮组织(28/54比1/12,P＜0.05),其高表达与高级别病理分级、淋巴转移以及肿瘤直径等呈正相关(均P＜0.05).膀胱癌细胞系T24、5637中PAK1的mRNA和蛋白水平明显高于正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1,PCR和Westem印迹实验证实PAK1-短发夹RNA (shRNA)对膀胱癌5637细胞中PAK1表达抑制效果理想,迁移和侵袭实验证实PAK1基因沉默的膀胱癌5637细胞穿过小室数目较对照组减少.结论 膀胱癌组织中PAK1高表达是一个重要特征,与膀胱癌细胞迁移及侵袭能力有关,其调控的分子机制有待进一步深入研究.
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Ki-67和pAKT在结肠癌组织中的表达
目的 探讨Ki-67、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAKT)在结肠癌组织中的表达及与侵袭转移的关系.方法 结肠癌患者72例,癌旁异型增生组织(n=72)及癌旁5 cm正常黏膜组织(n=72),应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连结(SP)法检测Ki-67、pAKT的表达.结果 Ki-67、pAKT在正常结肠黏膜组织(9.7%、9.7%)、癌旁组织(34.7%、25.0%)和结肠癌(73.6%、77.8%)组织中的阳性表达率逐渐上升(P＜0.05).晚期结肠癌组织中Ki-67、pAKT的表达明显高于早期结肠癌组织(80.3% vs 45.5%、83.6% vs 54.5%)(P＜0.05),Ki-67、pAKT的表达与结肠癌在低分化组织中表达水平高(88.9%、88.9%),高分化组织中低(36.4%、45.5%)(P＜0.05).Ki-67、pAKT在淋巴结转移组中的表达明显高于无转移组(80.0% vs 18.5%、86.7% vs 33.3%)(P＜0.05 ).结论 Ki-67、pAKT异常表达与结肠癌的发生、发展密切相关,可作为临床参考指标.
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中国Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因突变检测及高频突变分析
目的 分析Peutz-Jeghers综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS)患者丝/苏氨酸蛋白激酶11(serine/threonine kinase 11,STK11)基因突变情况,探讨不同STK11基因突变与临床特征的关系.方法 选择完成STK11所有外显子基因测序的患者54例,分析其临床表现及突变分布规律,并比较不同突变间临床特征.结果 54例患者中,33例在STK11基因编码区检测出点突变,先证者30例(检出率58.8%,30/51),家族突变检出率为55.0%(11/20),散发突变检出率为55.9%(19/34).3个家系共5例患者在同一位点突变(c.180C>G),疑为高频突变;另1个家系的2例患者突变位点一致(c.658C>T);1例患者同时检测到2个突变位点;剩余26例患者携带突变各不相同.c.180C>G首次发病年龄和首次手术年龄≤7岁患者中所占比例明显高于其他突变,差异有统计学意义(P<0.05);c.180C>G与其他突变在性别、家族史、肿瘤史、腹部症状、手术史差异均无统计学意义(P>0.05).结论 STK11基因突变是PJS发病的主要致病原因.发现1例可疑为高频突变,该突变患者首次发生症状及接受首次手术年龄均低于其他突变患者,应在临床监测及治疗过程中多予以关注.
关键词： Peutz-Jeghers综合征 p21活化激酶类 基因 突变 -
Pak1对胚胎血管发育的作用及初步机制
目的 研究p21活化激酶1(p21-activated kinase 1,Pak1)对胚胎血管发育的影响,并初步探讨其相关作用机制.方法 以组成激活型Pak1 (constitutively active Pak1,caPak1)的重组过表达质粒PCS2-caPak1为模板,用SP6 RNA聚合酶体外合成caPak1 mRNA,用显微注射法将其注入斑马鱼单细胞期胚胎,观察胚胎发育和表型变化,用透射电镜进一步确认胚胎血管的超微结构.用脂质体转染法将PCS2-caPak1转入人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),用MTT法检测细胞活力,并用流式细胞术分析HUVEC凋亡情况.结果 斑马鱼胚胎发育至受精后30～36 h时,可见过表达组斑马鱼出现头部出血表型,出血比例约25％～30％,透射电镜下可见血管内皮细胞结构破坏;细胞水平过表达Pak1后,细胞变圆并出现部分脱落,MTT检测发现细胞存活减少(P＜0.01),流式细胞术分析发现内皮细胞凋亡增加(P＜0.01).结论 过表达Pak1可能通过增加内皮细胞凋亡影响胚胎血管发育.
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p21活化激酶1在肿瘤中的研究进展
p21活化激酶1(p21-activated kinase 1,PAK1)属于进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族.PAK1是第一个鉴定出来且研究多的PAK家族成员,在细胞形成、运动和增殖等调节中起重要作用,在肿瘤的发生发展中也发挥重要的作用.本文就PAK1在肿瘤中的研究进展作一综述.
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红景天苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后PI3-K／AKT 信号通路的影响
目的：探讨红景天苷对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用机制与磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（ PI3-K/AKT）信号通路的相关性。方法将48只SD雄性大鼠按随机数字表法分为四组：假手术组、模型组及红景天苷低、高剂量组。采用线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞模型，缺血2 h再灌注24 h后进行神经功能缺损评分及相关指标检测。氯化三苯基四氮唑（ TTC）染色检测脑梗死面积，苏木素-伊红（ HE）染色观察脑组织病理学改变，原位末端标记技术（ TUNEL）法检测细胞凋亡数，免疫组化法检测PI3-K、p-AKT表达。结果与模型组比较，红景天苷高、低剂量组神经功能缺损程度明显减轻，脑梗死体积及凋亡阳性细胞数均明显减少，PI3-K、p-AKT阳性细胞表达明显增加，差异均有统计学意义（ P ＜0.05）；与红景天苷低剂量组相比较，红景天苷高剂量组神经功能缺损程度减轻，脑梗死体积及凋亡阳性细胞数均减少，PI3-K、p-AKT阳性细胞表达增加，差异均有统计学意义（ P ＜0.05）。结论红景天苷通过激活PI3-K/AKT信号通路，从而抑制神经细胞凋亡可能是其对脑缺血-再灌注损伤的保护作用机制之一。
关键词： 红景天/药理学 1-磷脂酰肌醇3-激酶 p21活化激酶类 再灌注损伤 细胞凋亡 -
AMPK在围术期脑保护作用机制及研究进展
丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AMPK)作为细胞能量感受器,在调节细胞能量代谢平衡中起着非常重要的作用.AMPK在围术期脑保护中的作用机制极其复杂,可能在脑缺血损伤的各个环节都发挥作用.本文就AMPK在围术期脑保护作用机制及研究进展作一综述.
