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padi4_94单核苷酸多态性与河北省汉族人群类风湿关节炎的相关研究
Ⅳ型肽酰基精氨酸脱亚胺酶(pepti-dylarginine deiminase 4,PADI4)引起的蛋白多肽的瓜氨酸化可能与类风湿关节炎(RA)发病有关.我们对河北省汉族RA患者PADI4基因padi4_94(rs2240340)位点单核苷酸多态性(sin-gle nucleotide polymorphism,SNP)进行分析,以探讨该SNP在本地区RA发病机制中的作用和意义.
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瓜氨酸化作用与类风湿关节炎
瓜氨酸(citrulline)为人体内的非标准氨基酸,不能在蛋白质的翻译过程中被合成,但是在肽酰基精氨酸脱亚胺酶(peptidylarginine deiminase,PAD)的作用下可以使蛋白质中的精氨酸残基转化为瓜氨酸残基,这一过程称为瓜氨酸化(citrullination),是一种蛋白质的翻译后修饰过程.
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类风湿关节炎患者龈下菌斑精氨酸脱亚胺酶活性研究
目的 研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者牙周状况及龈下菌斑产生的精氨酸脱亚胺酶(arginine deiminase,ADI)活性,明确RA与慢性牙周炎的相关性是否与ADI有关.方法 采用病例对照研究,患者入组时间为2014年1月至2016年12月.RA组:选择在中国医科大学附属第四医院风湿免疫科确诊为RA的患者34例,其中男2例,女32例;年龄40~ 60岁.对照组:选择同期在本院体检中心进行体检者29例,符合基线入选标准,无关节炎症状和脊柱疾病史;其中男1例,女28例;年龄40~60岁.采集入选者的龈下菌斑制成混悬液,采用二乙酰一肟-氨基硫脲比色法测定ADI活性.采集静脉血留取血清,用ELISA法测定抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体.检查入选者全部牙齿的菌斑指数(PI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)和缺失牙数.对两组患者牙周状况以及龈下菌斑ADI活性和血清抗CCP抗体阳性率进行比较分析.结果 RA组PI值3.03±1.97、PD值(2.52±0.89)mm,对照组PI值3.52±0.92、PD值(2.63±0.45)mm,两组差异均无统计学意义(均P>0.05).RA组AL(1.41±1.21)mm、人均缺失牙齿(4.29±5.85)颗,对照组AL(0.40±0.33)mm、人均缺失牙齿(0.56±0.80)颗,两组差异均有统计学意义(均P< 0.05).RA组ADI活性[(1.59±1.05)IU]明显高于对照组[(0.68±1.08)IU],差异有统计学意义(t=3.38,P< 0.01).抗CCP抗体阳性率(≥20 RU/mL):RA组为55.9%,对照组为0,两组差异有统计学意义(x2=21.91,P< 0.01).结论 RA患者牙周状况差且龈下菌斑ADI活性高,提示ADI活性增高可能是RA与慢性牙周炎相关联的关键环节.
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类风湿性关节炎瓜氨酸化反应研究的新进展
类风湿性关节炎( Rheumatoid arthritis, RA )是一种以慢性侵蚀性关节炎为特征的全身性自身免疫疾病。该病在我国发病率约3‰~5‰。RA患者体内可以检测到多种抗瓜氨酸化蛋白的自我免疫抗体( Anti-citrullinated peptide antibodies, ACPA ),包括抗角蛋白抗体( Anti-keratin antibody,AKA)、抗环瓜氨酸肽抗体( Anti-cyclic citrullinated peptide antibody, anti-CCP )、抗纤维蛋白原抗体( Anti-fibrinogen antibody,ACF)、抗波形蛋白抗体( Anti-vimentin antibody, anti-MCV)等[1-3]。该类抗体所针对的靶抗原均含有瓜氨酸表位,对RA具有高度的特异性,并且与疾病的严重程度密切相关。瓜氨酸是一种非编码氨基酸,在肽酰精氨酸脱亚胺酶( Peptidyl deiminase,PAD)的催化下,蛋白中的精氨酸残基转化成瓜氨酸残基,这一过程称为蛋白的瓜氨酸化。瓜氨酸化是蛋白翻译后修饰的一种形式。蛋白质的瓜氨酸化现象可见于许多疾病,如感染、炎症、肿瘤及自身免疫性疾病等[4,5]。 PAD的表达及瓜氨酸反应在 RA 患者滑膜组织中高表达,PAD家族的PADI4基因多态性与RA呈明显相关性,且与 ACPA 抗体水平具有相关性,但是这种相关性具有一定的种族差异[6,7]。因此,瓜氨酸化反应和 PAD 在 RA 发病过程中起着非常重要的作用,一直是RA发病机制研究中的热点。本文将重点介绍、讨论近年来有关RA瓜氨酸化研究的进展、发展趋势以及作者对该研究的理解和建议。
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PADI4单核苷酸多态性与中国河北汉族人群类风湿关节炎的相关性研究
肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(Peptidylarginine deiminase 4,PADI4)是一种能够催化抗原性蛋白多肽脱去亚胺基形成瓜氨酸的酶,有研究发现这一被称为"瓜氨酸化"的过程可能与类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)发病有关[1,2],目前尚无我国人群PADI4基因多态性的相关报道.
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精氨酸脱亚胺酶的克隆表达和纯化
目的 研究人型支原体来源的精氨酸脱亚胺酶(MhADI)在大肠杆菌中的表达及纯化.方法 人工合成密码子优化的人型支原体来源的adi基因片段,定向插入到pET-22b载体的NdeⅠ和Xho Ⅰ位点之间;重组的表达载体pET22b-adi转化大肠杆菌BL21 (DE3),用IPTG诱导表达;表达产物通过透析复性后经DEAE离子交换层析纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果;纯化的重组蛋白用二乙酰一肟-氨基硫脲比色法检测比活.结果 成功诱导表达分子量为48 kDa的重组蛋白,目的产物以包涵体形式表达,表达量约为细胞总蛋白的15%.纯化后蛋白纯度达95%以上,比活为3 IU.结论 本研究方法可制备得到较高纯度活性重组人型支原体ADI蛋白.
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聚乙二醇修饰的精氨酸脱亚胺酶临床研究
精氨酸脱亚胺酶(ADI)是一种具有重要应用前景的抗肿瘤药物.聚乙二醇(PEG)修饰的ADI (ADI-PEG20),免疫原性低,药物半衰期长.本文简要综述ADI-PEG20的抗肿瘤临床应用开发进展.
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重组精氨酸脱亚胺酶的酶活性测定
建立了大肠杆菌表达的重组精氨酸脱亚胺酶(1)的酶活性体外测定方法.通过优化反应体积、底物浓度、反应时间、反应液pH值等参数,确定测定重组1酶活性的佳条件为:底物精氨酸浓度20 mmol/L、pH 6.5、反应时间20 min、反应体积100μl(试管法).本法的线性范围为10~25 μg/ml,变异系数(CV)小于10%.
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假单胞菌发酵制备精氨酸脱亚胺酶
采用假单胞菌(Pseudomonas sp.)发酵制备精氨酸脱亚胺酶,优化发酵培养基配方及培养条件,以葡萄糖为碳源,酵母膏和蛋白胨为氮源,30"C振荡培养20h时,发酵液中精氨酸脱亚胺酶的酶活力可达2.17u/ml.向HepG2肝癌细胞培养液中加入酶粗品0.5u/ml,对肿瘤细胞的生长抑制率为93.4%.