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CⅡ变构肽对胶原性关节炎T细胞免疫的影响
目的 探索连续替换CⅡ多肽中268～270位氨基酸的变构肽对胶原性关节炎(CIA)抑制作用的可能机制.方法 CⅡ268～270变构肽90μg静脉注射,每周1次治疗CIA大鼠;设置无关肽对照组和空白对照组.ELISA方法检测大鼠血清TH1/TH2细胞因子水平及抗CⅡ抗体及其亚型.荧光实时定量RT-PCR检测调节性T细胞标记Foxp3 mRNA表达.结果 CⅡ268～270变构肽、无关肽及空白对照组血清IFN-γ水平分别为41.42±7.32、54.63±11.15和57.86±5.64pg/ml,变构肽可降低大鼠血清IFN-γ水平(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组血清IL-10水平分别为40.18±5.13、31.09±5.04和30.19±5.02 pg/ml,变构肽可以提高大鼠血清IL-10水平(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组抗CⅡIgG2a抗体滴度分别为0.5±0.21、1.1±0.27和1.3±0.29,变构肽可以显著降低抗CⅡIgG2a抗体滴度(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组抗CⅡIgG1抗体滴度分别为1.2±0.24、0.58±0.11和0.6±0.12,变构肽可以显著上调抗CⅡIgG1抗体滴度(P＜0.01).变构肽、无关肽及空白对照组Foxp3 mRNA表达丰度分别为33.62±12.12、10.05±6.08和9.73±6.03,变构肽可以显著上调大鼠Foxp3 mRNA表达丰度(P＜0.01).结论 CⅡ268～270变构肽可以调节CIA中异常的TH1/TH2细胞因子平衡,可以抑制IgG2a型抗CⅡ抗体产生,诱导Foxp3阳性T细胞产生.
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Ⅱ型胶原变构肽鼻黏膜给药治疗胶原诱导性关节炎的实验研究
目的:研究以丙氨酸替换Ⅱ型胶原(collagen Ⅱ,CⅡ)263-272序列中的267、270、271位氨基酸的变构肽鼻黏膜给药对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)的抑制作用及其作用机制.方法:以牛CⅡ免疫Lewis大鼠诱发CIA.于发病的当天开始给予CⅡ变构肽和原型肽鼻滴入治疗,连续每天给药,5 d后,改为隔天给药,空白对照组给予磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS).观察关节肿胀情况,记录关节炎评分以及体重的改变.治疗结束后处死大鼠,行后踝关节病理切片,观察关节病理改变.ELISA方法检测血清巾抗C Ⅱ抗体亚型以及细胞因子的变化,流式细胞仪检测外周血 CD4+CD25+T细胞的变化,荧光定量PCR检测脾和淋巴结中Foxp3和TGF-β mRNA的表达水平.结果:(1)CⅡ变构肽可以抑制CIA的发展.实验结束时CⅡ变构肽、原型肽以及PBS组大鼠关节炎评分分别为2.50±2.43、4.50±2.23和6.33±2.73(变构肽治疗组与PBS对照组比较,P<0.05),各组大鼠后踝关节病理学评分分别为1.33±1.07、2.17±0.94和2.83±0.58,与PBS对照组相比,CⅡ变构肽可以明显抑制CIA关节病变的发展(P<0.05).(2)与PBS对照组相比,CⅡ变构肽可以降低CIA大鼠体内抗CⅡ抗体IgG2a亚型的滴度(0.56±0.19和0.95±0.29,P<0.05).C Ⅱ变构肽、原型肽及PBS对照组大鼠血清中γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平分别为(185.33±29.77)、(231.62±41.82)和(220.64±83.61)ng/L,与原型肽组相比,CⅡ变构肽可以降低大鼠血清中IFN-γ水平.(3)CⅡ变构肽治疗对调节性T细胞的影响:3组大鼠外周血CIM+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例差异无统计学意义,CⅡ变构肽治疗组大鼠脾和淋巴结中Foxp3和转化生长因子B(transforming growth factors β,TGF-β)mRNA的表达水平较对照组有升高趋势,但差异无统计学意义.结论:C Ⅱ变构肽鼻黏膜给药治疗可以抑制CIA的发展,CⅡ变构肽可能主要通过抑制CIA大鼠体内IgG2a型抗CⅡ抗体的产生,并降低血清中IFN-Ⅱ,从而抑制Th1型免疫反应而发挥治疗作用.
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Ⅱ型胶原变构肽对胶原性关节炎软骨破坏的影响
目的 研究连续替换Ⅱ型胶原(CⅡ)268-270位T细胞受体(TCR)结合氨基酸的CⅡ变构肽sub268-270对胶原性关节炎(CIA)关节软骨损伤的抑制作用.方法 使用牛CⅡ在Lewis大鼠诱发CIA.将CIA大鼠分为30 μg组、5 μg组、1 μg组和空白对照组,每组8只,每次分别接受CⅡ变构肽sub268-270 30 μg、5 μg、1 μg及磷酸盐缓冲液静脉注射,每周2次.从关节炎症积分、病理学滑膜炎症积分、血管翳评分、关节软骨损伤评分和骨破坏积分评价变构肽疗效,用血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平和关节组织切片中软骨番红花红含量来评价变构肽对关节软骨损伤的抑制作用.结果 30 μg CⅡ变构肽组关节炎症积分为5.6±2.63,显著低于5 μg组为(9.67±5.61)、1 μg组为(10.02±5.06)及空白对照组为(11.8±5.34)(P《0.01).与5 μg变构肽、1 μg变构肽和PBS相比,30 μg变构肽可以显著降低CIA大鼠滑膜炎积分(P《0.01)、血管翳积分(P《0.01)、软骨损伤积分(P《0.01)和骨破坏积分(P《0.01).30 μg变构肽组血清COMP水平(μg/ml)为2.21±0.76,5 μg变构肽组为5.63±1.73,1 μg变构肽组为6.04±1.76,空白对照组为7.00±1. 46,30 μg治疗组与空白对照组比P《0.01.关节组织切片中软骨蛋白聚糖含量(A值)30 μg组为2.35±0.76,5 μg组为1.57±0.63,1 μg组为1.37±0.53,空白对照组为1.00±0.41,30 μg组与空白对照组比P《0.01.结论 30 μg CⅡ变构肽sub268-270可以有效缓解CIA,显著抑制CIA中的关节软骨破坏.
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流感病毒血凝素衍生肽对T细胞活化抑制作用的研究
目的研究人类白细胞抗原(HLA)-DRB1结合性流感病毒血凝素(HA)308-317变构肽在HLA-DR4限制性T细胞激活中的作用.方法采用固相法合成HA308-317原型肽及其变构肽.通过计算机模拟及流式细胞术分析HA308-317原型肽及其变构肽与HLA-DR4分子的结合作用;并检测这些多肽对T细胞激活信号CD69表达和白细胞介素(IL)-2分泌的影响及对T细胞增殖的抑制作用.结果HA308-317变构肽能结合细胞表面HLA-DR4分子,对T细胞激活信号CD69表达和IL-2分泌无明显影响,并能抑制HA308-317原型肽诱导的T细胞活化.结论替换HA308-317多肽中识别T细胞受体(TCR)的氨基酸残基形成的HA变构肽可与HLA-DR4分子结合,而且可抑制其原型肽诱导的T细胞活化.
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人类白细胞抗原-DR1特异性流感病毒血凝素多肽对T细胞激活抑制作用的研究
目的研究流感病毒血凝素(HA)306-318多肽在人类白细胞抗原(HLA)-DR1限制性T细胞激活中的作用,以及HA306-318变构肽对T细胞活化的影响,探讨利用HA306-318变构肽抑制类风湿关节炎(RA)患者T细胞活化的可行性.方法利用HLA-DR1转基因细胞株检测去除T细胞受体(TCR)结合位点的HA 306-318变构肽与HLA-DR1分子的结合.以HLA-DR1限制性抗原递呈系统,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HA306-318及其变构肽诱导T细胞活化的作用,以及该变构肽对T细胞活化的抑制作用.结果HA306-318原型肽可以活化HLA-DR1限制性T细胞,可诱导细胞增生及分泌白细胞介素(IL)-2;HA306-318变构肽可与HLA-DR1分子结合,无T细胞激活能力,并可有效抑制HA306-318原型肽以及Ⅱ型胶原(CⅡ)263-272多肽诱导的T细胞活化.结论HA306-318多肽可以介导HLA-DR1特异性T细胞激活,HA306-318变构肽作为HLA-DR1特异性非T细胞激活肽,可以抑制HA306-318以及CⅡ263-272抗原肽诱导的T细胞活化.
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HA308-317变构肽对HLA-DR4特异性T细胞活化的抑制作用
目的:研究流感病毒血凝素(HA)308-317变构肽对人类白细胞抗原(HLA)-DR4限制性Ⅱ型胶原(CⅡ)特异性T细胞激活的抑制作用.方法:采用固相法合成3条HA308-317变构肽.流式细胞术分析HA308-317变构肽与细胞表面HLA-DR4分子的结合作用;3H掺入法检测HA308-317变构肽对CⅡ263-272介导T细胞增殖的抑制作用;ELISA法检测上清液中IL-2的水平;流式细胞术分析细胞表面CD25和CD69的表达情况.结果:HA308-317变构肽能竞争性地抑制CⅡ263-272与细胞表面HLA-DR4分子的结合;HA308-317变构肽抑制了CⅡ263-272诱导的T细胞增殖和IL-2的分泌;与CⅡ263-272相比,HA308-317变构肽诱导T细胞表面CD25或CD69的表达减弱.结论:替换HA308-317多肽中与T细胞受体结合的氨基酸形成的HA变构肽不改变其与HLA-DR4的结合能力,但它们抑制T细胞的活化.在T细胞介导的自身免疫病中,变构肽的应用可能是一种新的治疗策略.
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HLA-DRB1结合性Ⅱ型胶原多肽抑制胶原性关节炎的实验研究
目的:研究替换CⅡ263-272序列中的268～270位氨基酸的变构肽sub268-270对胶原性关节炎(CIA)的抑制作用.方法:使用牛CⅡ在Lewis大鼠诱发CIA.以CⅡ变构肽sub268-270 90 μg静脉注射,每周1次治疗CIA;设置无关肽对照和空白对照组.从关节炎症积分、放射学积分和病理学积分来评价变构肽疗效.结果:变构肽、无关肽及空白对照组关节炎症积分分别为5.60±1.24、11.20±1.21和11.80±1.22,变构肽可明显抑制CIA关节炎症(P＜0.01).变构肽组的放射学积分(1.32±0.49)明显低于无关肽组(2.63±0.51)和空白对照组(2.69±0.53)(P＜0.01).此外,变构肽组的病理学积分(1.37±0.53)也显著低于无关肽组(2.94±0.63)和空白对照组(3.06±0.65)(P＜0.01).结论:CⅡ变构肽sub268-270可以明显抑制胶原性关节炎的关节炎症、病理损伤及骨破坏程度.
