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光生物调节作用的研究进展
激光的生物刺激作用(biostimulation)直接产生辐射而不是热效应(温度升高不超过0.1～0.5.C),相应的疗法称为低强度激光疗法[1,2].1986年以来美国科学引文索引收录的循证医学研究证明体表低强度激光疗法有效的56篇论文中疼痛16篇、伤口愈合8篇、糖尿病3篇、激光针灸3篇和动物模型研究9篇,证明发光二极管对皮肤老化的光子嫩肤效果1篇,证明体内低强度激光疗法有效的论文只有关于风湿性关节炎的血管内照射疗法1篇.激光针灸镇痛获得美国食品与药物管理局的批准.鉴于在产生细胞效应方面,激光与单色光差异无显著意义[1],人们将激光的效应和单色光的效应统一称为光生物调节作用(photobiomodulation)[3].美国激光医学年会的1个分组会议一直以生物刺激作用作为题目,2003年改为光生物调节作用.这方面的研究逐年上升.人们分别引入了荧光共振能量转移技术[4]、DNA芯片技术[5]和单细胞激光共焦显微镜技术[6].近年来研究论文发表档次达到高峰,分别发表在<科学>[7]、<美国科学院院刊>[3]、<美国生物化学杂志>[8,9]和
等[10]顶级杂志上.Kamru,[11,12],Mester等[13,14]和Abergel等[15]研究权威发表的5篇经典论文分别被引用了118、111、110、143和101次.这些工作说明,科学界已经基本接受了光生物调节作用现象,并展开深入的机制研究. -
一种基于流式细胞仪平台荧光共振能量转移技术的Caspase-8活性检测荧光探针
荧光共振能量转移技术(fluorescence resonance energy transfer,FRET)作为一种经典的荧光检测技术,已经广泛运用于生物科学研究中,开发了一系列基于FRET技术的荧光检测探针.半胱氨酸蛋白酶家族(cysteine aspartic acid specific protease,Caspase)在细胞凋亡通路中发挥着十分重要的作用,尤其是位于死亡受体介导的凋亡通路起始位置的Caspase-8,它的激活能引发后续的一系列Caspase酶原的激活并引起细胞的凋亡.因此,Caspase-8活性的检测在细胞凋亡检测中具有非常重要的意义.本文基于蛋白酶类FRET荧光探针原理设计了一个能检测活细胞内Caspase-8活性变化的荧光探针,并且在流式细胞仪上利用FRET技术检测了细胞凋亡诱导剂特异性激活的Caspase-8活性,从而证明了所构建的探针检测Caspase-8活性的有效性和特异性.结果表明,所设计的探针能够特异性地响应细胞凋亡诱导中引起细胞内Caspase-8酶活性的变化,并且能够利用流式细胞技术得以快速定量检测.本研究为在活细胞中检测Caspase-8活性提供了一种更加方便快捷的检测方法.
关键词： 荧光共振能量转移技术 细胞凋亡 Caspase-8 荧光探针 -
HIV进入抑制多肽VIR576与TCR的相互作用研究
目的 VIR576为具有抑制HIV进入靶细胞活性的抗艾滋病多肽,我们发现其能抑制抗原特异性T细胞活化,且可能是通过与T细胞受体(TCR)结合而发挥作用.本研究深入探讨VIR576与T细胞受体(TCR)相互作用,并确定其关键作用位点.方法 采用荧光化合物标记多肽,用荧光共振能量转移技术(FRET)来检测VIR576与TCR的相互作用,并通过合成TCR跨膜序列(TCR-TMD)的核心多肽(CP),确定相互作用的关键序列.同时用激光共聚焦显微镜,观察VIR576在T细胞膜上是否与TCR存在共定位.结果 FRET分析表明VIR576能与CP多肽发生近距离的相互作用.VIR576能插入到细胞膜上,并结合在抗CD3-抗体活化的小鼠脾细胞膜上,与CD4分子分布一致,提示其与TCR分子存在共定位.结论 VIR576可能在激活的T细胞上与TCR跨膜区直接结合,结合的关键位点为TCR跨膜区的核心序列CP.
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嵌合型TCR分子的表达与组装效率分析
目的 通过对外源TCR分子结构域的定向改造,对嵌合型TCR双链分子的表达与组装情况进行研究,探讨其对TCR基因修饰T细胞(TCR-T)内外源TCR分子与内源TCR分子错配减少的贡献,为改善TCR基因修饰的T细胞过继性免疫治疗奠定基础.方法 将结构域未改造的野生型TCR分子、恒定区结构域经过改造的嵌合TCR(chim-TCR)分子及杂合TCR分子转染7402细胞,通过报告基因的表达分析TCR分子的表达情况,利用荧光共振能量转移(FRET)技术计算不同的TCR分子组合在细胞中的组装效率.结果 TCR分子经过结构域定向改造后,能够在细胞内有效地表达和组装.荧光共振能量转移(FRET)分析表明嵌合型TCR与野生型TCR分子之间形成的杂合分子FRET值明显小于嵌合型或野生型自身配对的FRET值.结论 结构域定向改造的嵌合型TCRα、β链与野生型α、β双链能有效得到表达及组装,并且嵌合型TCRd、β链与野生型α、β链组装配对的效率显著降低,这为改善基因修饰的T细胞过继性免疫治疗奠定了基础.
关键词： 嵌合型TCR 表达 组装 荧光共振能量转移技术
