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骨髓间充质干细胞移植对老年性痴呆大鼠空间学习记忆能力的影响
目的:研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对淀粉样蛋白-β(1-40)(Aβ(1-40))诱导的老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠行为学的影响,并探讨其治疗AD的可能机制.方法:采用向大鼠双侧海马立体定向注射Aβ(1-40)诱导AD动物模型,造模后3周采用同样方法移植骨髓间充质干细胞,采用Morris水迷宫观察大鼠行为学变化.造模后2个月处死大鼠,观察海马组织有无溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)+神经元特异性烯醇化酶(NSE)、BrdU+胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学双染阳性细胞,并且观察从侧脑室到海马是否存在神经元前体细胞(NPs)的标志--双皮素(DCX)的吻侧迁移流.结果:模型组大鼠逃避潜伏期较对照组明显延长,移植治疗组大鼠逃避潜伏期较模型组缩短.移植组大鼠海马组织及其周围可见免疫组织化学双染阳性细胞,但未见从侧脑室到海马关于DCX的吻侧迁移流.结论:BMSCs移植能够改善AD大鼠空间学习记忆能力,提示BMSCs移植可能成为治疗AD大鼠的一种方法.
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缺氧预处理后骨髓源神经干细胞联合脑源性神经生长因子移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究
目的：研究缺氧预处理后骨髓源性神经干细胞（source neural stem cels of bone marrow，BMSCs- NSCs）联合脑源性神经生长因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效，为高原地区脑梗死的细胞移植治疗提供动物实验基础。方法72只SD大鼠随机分为缺氧预处理组和常氧组，每组各36只，缺氧预处理组造模前3 d进行低氧预处理（hypoxic preconditioning，HPC）。两组均制作大脑中动脉阻塞再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion，MCAO/R）模型。每组分为3个亚组（BMSCs-NSCs+BDNF组、BMSCs-NSCs组和对照组，每组各12只），分别梗死灶同侧尾状核内立体定向移植BMSCs-NSCs+BDNF、BMSCs-NSCs和DMEM/F12培养基。移植后3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d进行神经功能缺损评分，每个时间点每组取2只大鼠，断头取脑后行免疫组织化学染色，观察5-溴脱氧尿嘧啶（5-Bromo-deoxyuridine，Brdu）阳性细胞的迁移路径，行CD133、Nestin、微管相关蛋白2（microtubule-associated protein 2，MAP-2）、兔抗微管蛋白（β-tubulin）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrilary acidic protein，GFAP）、半乳糖神经酰胺（Galactosylceramidase，Galc）免疫荧光染色，了解骨髓源性神经球分化情况。结果常氧BMSCs-NSCs+BDNF组、常氧BMSCs-NSCs组、缺氧预处理BMSCs-NSCs+BDNF组、缺氧预处理BMSCs-NSCs组7 d、14 d、21 d、28 d和35 d的神经功能评分均显著低于同组3 d时的神经功能评分。移植3 d时缺氧预处理对照组神经功能学评分显著低于常氧对照组（P=0.040）；移植7 d时缺氧预处理BMSCs-NSCs+BDNF组神经功能评分显著低于常氧BMSCs-NSCs+BDNF组（P=0.031）。无论缺氧预处理组还是常氧组，BMSCs-NSCs+BDNF组CD133、Nestin、MAP-2、β-tubul in、GFAP、Galc免疫荧光染色光密度值（integral optical density，IOD）均显著高于BMSCs-NSCs组（均P＜0.001）；BMSCs-NSCs+BDNF组、BMSCs-NSCs移植组各检测指标IOD均高于对照组（均P＜0.001）。结论大鼠缺氧预处理后BMSCs-NSCs联合BDNF立体定向移植可显著提高BMSCs-NSCs的效果。缺氧预处理并不能促进外源性BMSCs-NSCs分化，但却能明显改善大鼠神经功能。
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C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究
目的 建立大鼠C6脑胶质瘤模型,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标.方法 应用立体定向法,将1%琼脂糖含1×106 C6瘤细胞悬液10μl 注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查.在接种后第10、15、20、25天和自然死亡前,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色.结果 50只接种大鼠均有颅内肿瘤生长（100%）,远处和颅外转移率为0%-4%.结论 成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标.
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C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究
目的 建立大鼠C6脑胶质瘤模型,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标.方法 应用立体定向法,将1%琼脂糖含1×106 C6瘤细胞悬液10μl 注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查.在接种后第10、15、20、25天和自然死亡前,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色.结果 50只接种大鼠均有颅内肿瘤生长（100%）,远处和颅外转移率为0%-4%.结论 成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标.
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立体定向移植方法在干细胞移植中的应用研究
目的:探讨立体定向移植方法在干细胞移植中的应用.方法:腹腔注射青霉素建立癫痫模型.24只健康Sprague-DawleySD大鼠分为生理盐水移植组及干细胞移植组.用立体定向仪进行移植,分别于移植后7d脑灌注取材,通过荧光观察比较干细胞移植后干细胞在移植部位的准确性,立体定向移植方法的安全性.结果:发现移植后7d脑片,在针道内均有大量的GFP标记的细胞存在,且无一例大鼠死亡.结论:通过立体定向移植方法,移植干细胞入癫痫大鼠脑内CA1区,位置准确.
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神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤
背景:近年来,神经干细胞移植已成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点.目的:探讨神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的研究进展.方法:以“neural stem cells,stem cell transplantation,ischemic brain injury”为检索词,检索Pubmed 数据库1990至2012年相关文献;以“神经干细胞,干细胞移植,缺血性脑损伤”为检索词,检索CNKI数据库2005至2012年相关文献.分析神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的内容,排除重复研究.结果与结论:①体外分离培养的神经干细胞有胚胎来源、脐血来源和成体来源,主要采用机械分离法和胰酶消化法进行分离.②目前体外培养的神经干细胞分离鉴定的标记物有巢蛋白、波形蛋白1、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、神经元特异性烯醇化酶等.③神经干细胞的分化调节是通过正负双重作用实现的,负性调节是通过对称性的分裂来增加神经干细胞数量,包括Notch信号途径和一些生长因子等.正性调节诱导神经干细胞分化,包括参与细胞合成的骨形态发生蛋白信号途径等.④神经干细胞移植的时间窗选择在实验动物脑缺血两三周后,时间过早和过晚均不适合细胞的存活.神经干细胞通过脑立体定位仪直接进行脑内移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤,移植后可见细胞在局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活,并可广泛迁移,移植神经干细胞后观察到其运动行为学评分有明显提高.缺血性脑卒中的神经干细胞移植治疗还存在一些问题需要解决,未来的临床应用前景广阔,是缺血性脑卒中患者的新希望.
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骨髓间充质干细胞定向分化移植对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响
目的 通过β淀粉样蛋白1-40诱导建立阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化移植对AD大鼠行为学的影响.方法 将45只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组及移植组,每组15只.首先利用β淀粉样蛋白1-40通过立体定向注射技术建立AD动物模型,造模3周后采用立体定向注射技术移植诱导分化的BMSCs,并采用Morris水迷宫实验观察大鼠模型行为学的变化；采用免疫荧光组织化学染色法观察各组大鼠海马区胆碱乙酰化酶(ChAT)阳性细胞.结果 移植组大鼠学习记忆成绩较移植前明显提高(P＜0.05),与模型组大鼠学习记忆成绩比较有明显提高(P＜0.05)；同时通过免疫荧光组织化学染色可在移植组大鼠海马区发现ChAT阳性细胞.结论 BMSCs移植能够改善AD大鼠空间行为学能力,为利用BMSCs移植治疗AS提供实践依据.
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建立大鼠C6脑胶质瘤模型与观察颅内肿瘤生长
目的建立大鼠C6脑胶质瘤模型,行一般观察和MRI检查以确定颅内肿瘤生长情况,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标. 方法体外培养大鼠C6胶质瘤细胞 ,应用立体定向法将含10 g.L-1琼脂糖和1×106 C6细胞悬液10 μL注入大鼠右脑尾状核. 接种后行一般观察和MRI 检查,对5组接种大鼠分别在第10,15,20,25日和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定 , 对脑组织和肿瘤标本进行切片观察和HE染色. 结果 50只接种大鼠均有脑内肿瘤生长(100% ),远处和颅外转移率为0～4%. 结论成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后脑内肿瘤呈球状生长,很少出现颅外转移. 大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标.
