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TIMP-1在糖尿病肾病中的水平变化及临床意义
目的 观察金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在糖尿病肾病不同l临床阶段的变化规律.进而探讨TIMP-1在糖尿病肾病发生、发展过程中的作用.方法 选取健康对照组(NC)20例,2型糖尿病组(DM)20例,临床期糖尿病肾病组(DN)20例及糖尿病肾病肾衰竭组(DNF)20例为研究对象,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测各试验对象血清中TIMP-1的含量,并比较各组TIMP-1水平的差异性,分析TIMP-1水平与年龄及尿蛋白量的相关性.结果正常对照组血清TIMP-1水平为(825.97±137.34)ng/ml,糖尿病组(1259.05±218.47)ng/ml,临床期糖尿病肾病组(1508.31±282.57)ng/ml,糖尿病肾病肾衰竭组(2131.42±441.25)ng/ml.TIMP-1血清水平在性别间的差异无统计学意义.在DM组和DNF组,TIMP-1水平与年龄正相关.在DN组,TIMP-1与24 h尿蛋白定量正相关(r=0.84,P＜0.01).结论 随着糖尿病肾病的病情进展,血清中TIMP-1水平逐渐增高,且与尿蛋白量呈显著正相关,提示TIMP-1可能参与了糖尿病患者动脉硬化、动脉粥样斑块的形成及高血压的血管重塑过程;TIMP-1可能介导了肾小球细胞外基质(ECM)积聚、肾小球基底膜(GBM)重塑、肾小球硬化,在糖尿病肾病发生、发展过程中起着重要作用.
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实验兔出血症病毒检测方法的建立与免疫效果调查
目的 检测全省六个实验兔场的兔子所携带的兔出血症病毒(RHDV)情况,调查实验兔RHDV抗体水平,评价不同疫苗的免疫效果,比较HAI与ELISA两种方法 的符合率.方法 采用HAI、ELISA方法 对1168份实验兔RHDV抗体进行了检测,并与RT-PCR方法 的检测结果 进行对比分析.结果 我省实验兔免疫情况较好,不同饲养场的实验兔免疫合格率虽有不同,但未发生疫情.通过比较发现ELISA法检测的抗体合格率明显高于HAI法.结论 LISA、HAI和RT-PCR方法 均适合实验兔RHDV的检测.
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金属蛋白酶组织抑制因子-1在糖尿病肾病患者中的表达
目的 观察金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在糖尿病肾病不同临床阶段的变化规律,进而探讨TIMP-1在糖尿病肾病发生、发展过程中的作用.方法 选取健康对照组(NC)20例,2型糖尿病组(DM)20例,临床期糖尿病肾病组(DN)20例及糖尿病肾病肾功能衰竭组(DNF)20例为研究对象,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测各试验对象血清中TIMP-1的含量,采用方差分析和q检验比较各组TIMP-1水平的差异性;TIMP-1在不同性别间的差异分析用t检验,TIMP-1水平与年龄的关系采用直线相关分析和t检验.结果 正常对照组血清TIMP-1水平为825.97±137.34 (ng/ml),糖尿病组1259.05±218.47 (ng/ml),临床期糖尿病肾病组1508.31±282.57 (ng/ml),糖尿病肾病肾功能衰竭组2131.42±441.25 (ng/ml).糖尿病组、临床期糖尿病肾病组及糖尿病肾功能衰竭组血清中TIMP-1水平比正常对照组显著增高(P均＜0.01).临床期糖尿病肾病组比糖尿病组、糖尿病肾病肾功能衰竭组比临床期糖尿病肾病组的TIMP-1水平也明显增高(P＜0.05,P＜0.01).TIMP-1血清水平在性别间的差异无统计学意义.在DM组和DNF组,TIMP-1水平与年龄正相关,相关系数r分别为0.4866(P＜0.05)和0.6229(P＜0.01),两相关系数差异无显著性.结论 随着糖尿病肾病的病情进展,血清中TIMP-1水平逐渐增高,提示TIMP-1可能参与了糖尿病患者动脉硬化、动脉粥样斑块的形成及高血压的血管重塑过程;TIMP-1可能介导了肾小球细胞外基质(ECM)积聚、肾小球基底膜(GBM)重塑、肾小球硬化,在糖尿病肾病发生、发展过程中起着重要作用.
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抗大肠杆菌O157鸡卵黄抗体的初步研究
目的以煮沸15 min灭活后的大肠杆菌O157为抗原,分4次免疫产蛋鸡,获取高免卵黄.经水稀释法去脂、超滤、盐析等粗分离,DEAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化,得到产物IgY为电泳单点纯,且仍保持效价在1:104以上.从分离纯化过程中的跟踪检测表明,其卵黄制备的IgY抗体产量多、效价高、特异性强,可进一步用于大肠杆菌感染的检测研究.
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应用酶联免疫吸附试验检测肠出血性大肠杆菌0157:H7方法研究
目的制备和纯化0157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗0157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对0157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延.方法ELISA双抗体夹心法检测0157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗0157:H7酶结合物,后加入底物显色.结果本课题所研制的抗0157:H7酶结合物只对0157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸咐试验(即双抗体夹心法)对肠出血性大肠杆菌0157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感.临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌0157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段.
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郑州地区T淋巴细胞白血病病毒-Ⅰ感染情况调查
目的: 调查郑州地区T淋巴细胞白血病病毒-Ⅰ(HTLV-Ⅰ)的感染情况.方法: 用酶联免疫吸附实验(ELISA)对郑州市部分无偿献血者、相关病人血样进行抗-HTLV-Ⅰ筛查,阳性结果用蛋白印迹实验(westem blot、WB)确认.结果: 共检测献血者血样9 074份,各种相关病人血样414份,初检阳性24份,复检阳性6份,经WB确认均为阴性.结论: 本调查未发现抗-HTLV-Ⅰ阳性,欲进一步了解感染及流行情况,有必要加大调查范围特别是加大相关病人的调查.
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应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157:H7
目的:制备和纯化O157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对O157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延. 方法ELISA双抗体夹心法检测O157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157:H7酶结合物,后加入底物显色.结果本课题所研制的抗O157:H7酶结合物只对O157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸附试验(即双抗体夹心法)对肠出血大肠杆菌O157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感.临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段.
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牙周炎临床检测指标与龈沟液Ⅰ型胶原羧基端交联肽的关系
目的：探讨龈沟液中 I 型胶原羧基端交联肽（C-terminal telopeptides of type I collagen，CTX）水平与常用牙周炎临床检测指标的相关性。方法：选择就诊牙周病患者60例的77颗牙齿，采用酶联免疫吸附法测定其龈沟液中 CTX 水平，并对临床牙周检查的常用几个指标菌斑指数（PL）、牙龈指数（GI）、牙周袋探诊深度（PD）、附着丧失（AL）进行记录，用 SPSS 11．0软件秩和检验分析各指标与龈沟液中 CTX 的相关性。结果：PL、GI、PD、AL 与龈沟液中 CTX 浓度的 Sperman 秩相关系数分别为0．386（P ＜0．01），0．366（P ＜0．05），0．382（P ＜0．05）和0．314（P ＜0．05）。结论：龈沟液中 CTX 浓度与 PL、GI、PD、AL 成正相关。
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乙型肝炎表面抗原弱反应性标本检测及解决方法
目的探讨乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反应性标本的检测及解决方法。方法酶联免疫吸附实验(ELISA)法筛查出本院2011年~2012年间39例HBsAg弱反应性标本如下：①S/CO值0.6~1.3，11例；②S/CO值1.3~2.5，15例；③S/CO值2.5~5.0；13例，以上标本均做酶联免疫吸附试验(ELISA)，美国雅培公司ARCHITECTi2000SR仪器定量及雅培确认实验，并比较结果的差异。结果本研究结果可见：①11例S/CO值在0.6~1.3区间，ELISA检测阳性6例，阴性5例；雅培发光定量和确认实验检测阳性5例，阴性6例，差异有统计学意义（<0.05）；②15例S/CO值在1.3~2.5区间，ELISA检测阳性13例，雅培发光定量和确认实验检测阳性13例；③13例S/CO值在2.5~5.0区间，ELISA检测阳性15例，雅培发光定量和确认实验检测阳性15例。结论 ELISA检验HBsAg容易出现假阳性，临床对于ELISA结果有怀疑的应进行确认试验验证，以保证检验结果的可靠性。
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ELISA法测定大鼠血清中聚乙二醇化重组蛋白(PEG-SOP55)浓度及代动力学研究
目的:建立一种检测大鼠血清中聚乙二醇化重组蛋白(PEG-SOP55)浓度的ELISA方法,并进行该蛋白的药代动力学初步研究.方法:以该蛋白的多抗包被,标记生物素的单抗检测,生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶两级酶联放大检测信号,构建双抗夹心ELISA法进行浓度检测.通过对包被抗体和检测抗体工作浓度的优化实验,血清基质的干扰实验,不同结构聚乙二醇分子的比较实验,建立该方法的基本实验条件.并参考相关法规,对其方法特异性、准确度、精密度、耐用性、检测限度以及样品稳定性进行验证.分别用PEG-SOP5530 kDa、PEG-SOP5540 kDa、PEG-SOP5540 kDa branched进行Lewis大鼠腹腔单次给药然后测定血清浓度,获得该蛋白用不同分子结构聚乙二醇分子修饰后的药代动力学参数.结果:实验证实聚乙二醇修饰降低了检测抗体和目标分子的结合效率,且大鼠血清和聚乙二醇分子结构变化对检测有干扰.通过提高包被抗体浓度,获得对目标分子较好的捕获效率.通过将血清样品稀释液从PBS替换为咪唑缓冲液,且保持标准曲线和待测样品血清稀释倍数一致,克服了血清基质所带来的干扰.通过保持标准曲线和待测样品聚乙二醇分子结构一致,克服了因聚乙二醇分子结构不同带来的干扰.方法验证结果表明该方法特异性良好,回收率为(1OO±15.2)％,实验内精密度和实验间精密度验证数据RSD均不超过20％,不同操作人员对检测结果无显著影响,标准曲线线性良好,标准曲线的高和低浓度能够准确测定.将大鼠血清样品反复冻融3次,在室温放置4h其稳定性均符合要求,满足该方法检测条件.通过对Lewis大鼠血清样品进行浓度测定,获得PEG-SOP5530kDa、PEG-SOP5540 kDa、PEG-SOP5540 kDa branched的药代动力学参数.其Cmax分别为31.9、54.4、67.7 mg·mL-1,AUC0-∞分别为823.0、1 978.0、3 502.6 mg·h·mL-1,t1/2分别为15.6、22.3、30.6h.结论:成功建立检测PEG-SOP55在大鼠血清中浓度的ELISA方法.通过方法验证表明:该方法专属性、准确度、精密度、线性以及耐用性良好,测定范围为5～80 ng· mL-1.大鼠血清样品稳定性满足该方法检测要求,该方法可作为PEG-SOP55药代动力学研究的检测方法,也为类似制品的血清浓度检测提供借鉴.初步药代动力学研究表明,随着聚乙二醇分子对蛋白的屏蔽作用增强,能够显著延长其半衰期,提高药物在体内的暴露量.
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大鼠心脏型脂肪酸结合蛋白在早期心肌缺血时的含量变化
目的观察心肌缺血后不同时间段心肌细胞胞浆内和血浆中的心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)含量变化.方法按Selye法结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血模型,用免疫组织化学和酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,观察心肌缺血后不同时间H-FABP在心肌细胞和血浆中含量的变化规律.结果心肌缺血15min时,缺血区心肌即可出现H-FABP缺失,随着缺血时间的延长,缺失的范围扩大,程度加重,与对照组相比差异有显著性;心肌缺血15min时,血浆H-FABP含量在心肌缺血15min时即明显升高,与对照组相比有显著性差异.随着缺血时间的延长,血浆含量逐渐上升,4h时达到高峰,以后逐渐下降.结论心肌缺血后不同时间段心肌细胞胞浆内和血浆中的H-FABP含量变化呈现一定规律性,可望成为诊断早期心肌缺血所致的心源性猝死的敏感指标.
