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代谢综合征患者尿蛋白质组的建立及差异蛋白功能分析
目的 建立代谢综合征(MetS)患者尿液蛋白质组表达谱,对比MetS与正常人尿液差异蛋白,分析差异蛋白功能,以探讨MetS发病机制.方法 收集正常人和MetS患者过夜尿,丙酮沉淀法富集蛋白,将蛋白进行组内混合,反相液相色谱串联质谱鉴定蛋白,谱图数定量法定量蛋白,基因本体论分析方法进行差异蛋白功能分析.结果 正常人和MetS患者共鉴定到807和630个蛋白.MetS患者相比正常人上调蛋白有23个,其中纤溶酶原参与纤溶酶原激活连锁反应；37个下调蛋白中,α-烯醇酶、磷酸甘油激酶1和果糖二磷酸醛缩酶B分别参与糖酵解和果糖代谢过程.结论 建立了MetS患者尿蛋白质组表达谱,鉴定了MetS患者尿液差异蛋白.发现纤溶酶原激活连锁反应、糖酵解、果糖代谢异常可能在MetS发生发展过程中发挥重要作用.
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尿蛋白组学在儿童微小病变型肾病综合征中的初步研究
目的 研究儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术.方法 冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白,以固相IPG pH梯度等电聚焦为第一向,SDS均一胶(10.00%)的垂直电泳为第二向,银染后PDQuest软件进行分析,质谱分析.结果 成功地得到儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白双向电泳图谱.PDQuest7.3软件进行图像分析,检测到400个蛋白点.正常尿蛋白检测到112个蛋白点.肾病综合征与正常尿蛋白图谱相比差异蛋白表达明显的有20个,质谱鉴定出5个蛋白,分别是Alpha-1-antitrypsin、PITPNB、Zn-alpha-2-glycoprotein、Haptoglobin和Alpha-1B-glycoprotein.结论 用尿蛋白组学对儿童微小病变型肾病综合征的尿液进行研究是可行的.
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儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组的双向电泳及PDQuest图像初步分析
目的:建立儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术.方法:冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白、除盐,以固相IPG pH梯度等电聚焦为第一向,均一SDS胶聚丙烯酰胺凝胶(T=10%)为第二向,银染后PDQuest软件进行分析.结果: 成功得到儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白双向电泳图谱.尿蛋白用17 cm,pH3-10L(线性)的IPG胶条进行二维电泳时上样量100 μg,60 000 Vh的等电聚焦是恰当的.PDQuest7.3软件进行图像分析,检测到400个蛋白点.结论:用尿蛋白组学对儿童微小病变型肾病综合征的尿液进行研究是可行的.为今后从更高的水平来寻找肾脏疾病的功能蛋白和特异性蛋白质,阐明肾脏疾病发生发展的网络机制等后续研究提供了可能性.
