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溶血因素对荧光定量PCR检测HBV-DNA结果的影响
HBV-DNA的定量检测对临床诊断乙型肝炎,评价抗病毒药物疗效,研究乙型肝炎自然病史具有重要意义[1].荧光定量PCR(FQ-PCR)技术在保持巢氏PCR高度敏感性的同时,又因其能在电脑控制1～2 h全自动同步完成96个样品的扩增及定量,因此又具有高效率[2].而杂交法检测具有较高的特异性,但敏感性低,临床应用受到限制.目前国内较多的医院采用荧光定量的方法对血清中的HBV-DNA进行定量检测.而血液在采集过程中因多种因素的影响,因此常会遇到溶血的标本.本文旨在评价标本溶血对荧光定量PCR检测HBV-DNA结果的影响.
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PCR技术检测患者血清HBV DNA定量分析
本文采用荧光信号能量转移方法对109例乙肝患者血清进行了PCR定量的HBV-DNA检测,现将结果报告如下.1 材料和方法1.1 材料按1995年全国第五次传染病寄生虫病会议制定的诊断标准,自1997-11～1998-06对109例临床诊断为乙型肝炎的患者采取外周血分离血清后,冷冻各检.
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ELISA与RPR法检测梅毒抗体结果分析
目前国内血站系统筛查梅毒螺旋体的试验方法多采用非特异性血清试验(TRUST或RPR法),其结果有假阴性和假阳性[1].采用检测梅毒特异性抗体的双抗原夹心(ELISA)法对献血员进行抗体检测,具有较高的灵敏度和特异性,有利于提高输血安全,现报告如下.
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HPV-DNA在宫颈疾病中的检测价值分析
目的 讨论HPV-DNA在宫颈疾病中的监测价值.方法 采用二代杂交捕获技术分别检测577例宫颈疾病患者,并借助病理学镜检辅助确诊.结果 在上述病例中,HPV-DNA检验出慢性宫颈炎313例(阳性率54.13％)、宫颈上皮内瘤变164例(阳性率78.05％)、HPV亚临床感染92例(阳性率90.22％)、宫颈癌HPV高危型DNA的表达8例(阳性率100％).结论 HPV-DNA高危型检测对早期发现宫颈疾病具有临床意义.
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高度疑似生殖器疱疹HSV-II抗体检测分析
生殖器疱疹(Genital herpes,GH)是一种常见的性传播疾病,90%由单纯疱疹病毒II型(HSV-II)感染引起,10%由HSV-I型引起.HSV-II主要引起生殖器疱疹,也与子宫颈癌有关.近年来生殖器疱疹的发病率有所增加,主要由于患者症状不明显或无症状的亚临床感染者或症状未被识别,但疱疹病毒仍在活动,使HSV传播的危险性增加.对亚临床感染或高度疑似女患者仍无检测,而HSV血清抗体的检测为无症状亚临床感染的诊断提供了依据.笔者就我院部分高度疑似病例人群血清学HSV-II-IgG抗体进行检测结果分析.
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HBV DNA与乙肝前S1、前S2抗原的关系
目的 检测乙型肝炎患者HBV DNA含量,并与前S1抗原、前S2抗原进行比较分析,探讨其相关性.方法 收集350例乙型肝炎病毒血清标志物阳性血清,检测前S1抗原、前S2抗原,HBV DNA.结果 以HBV DNA阳性为对照,前S1抗原、前S2抗原检出率分别为40.4％、70.6％.结论 HBV DNA与前S1抗原、前S2抗原相关性较好但差异性显著,对HBV DNA数量进行动态观测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断.
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荧光定量PCR检测乙肝患者HBV DNA的临床价值
我们通过检测228例乙肝患者血清HBV DNA拷贝数及乙肝病毒血清标记物的检测,发现HBV DNA的定量检测更能真实反映乙肝病毒在体内的复制和感染程度.1 对象和方法1.1 对象我院2004-09～2005-04收集的乙型肝炎患者标本228份.急性乙肝24例,慢性乙肝157例,乙肝肝硬化38例,原发性肝癌9例.
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淋巴瘤和白血病患者人疱疹病毒6型的检测
为了探讨人疱疹病毒6型(HHV-6)感染与淋巴瘤和白血病的关系,我们用间接免疫荧光试验(IFA)和聚合酶链反应(PCR)方法,检测了淋巴瘤和白血病患者血清抗HHV-6 IgG和外周血单个核细胞(PBMC)中HHV-6 DNA的序列.报告如下.
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乙型肝炎患者唾液中HBV-M与HBV-DNA的相关性研究
目的:探讨HBV感染者唾液中HBV-M与HBV-DNA的相关性,唾液是否是乙型肝炎传染的重要途径之一.方法:采用酶法对2005～2006年HBV感染患者,分别进行血清学和唾液的收集与检测,对HBV感染的患者血清型分成常见的10种类型,同时对所选乙肝感染的患者的唾液进行荧光定量PCR定量测定HBV-DNA.结果:急性感染组和慢性感染与携带者组HBV-DNA阳性率比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:乙肝患者唾液中含有HBV-DNA,高病毒血症的患者唾液中含有大量HBV-DNA,唾液具有潜在传染性.可以解释,通过水平传染可能就是20%HBV感染者的感染源.唾液是乙肝一个重要的传播途径,要引起重视.
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荧光定量PCR检测HBV-DNA室内质控物的制备及初步应用
目的:制备HBV-DNA荧光定量PCR检测的室内质控物,并对其应用价值进行初步评价.方法:留取单一乙肝模式的混合血清样本,并用正常人血清将收集的血清稀释至所需的浓度,用与待检血清相同的仪器、同一品牌的HBV-DNA定量试剂盒进行检测,确定其靶值,计算、s、CV,绘制质控图.结果:自制的室内质控物高低值的变异范围分别为 1.10%、1.01%(CV<5%),稳定性好.结论:临床实验室可以用单一乙肝模式的混合血清制备HBV-DNA定量检测的质控物,其制备容易,测定结果稳定,有一定的临床实用价值.
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婴儿肝组织巨细胞病毒抗原和病理检测
目的:探讨婴儿巨细胞病毒(CMV)感染患儿肝组织CMV的感染及其病理改变.方法:用免疫组化方法检测肝组织内CMV前早期抗原和早期抗原,并在光学显微镜下观察肝组织病理改变.结果:肝组织内检出CMV-IEA20例和CMV-EA均阳性7例,阳性细胞多较集中分布,主要感染细胞为肝细胞、血管内皮细胞、胆管上皮细胞和炎性浸润细胞;肝组织内均有不同程度肝细胞肿胀变性或空泡形成,以及炎性细胞浸润,部分病例可见肝细胞内淤胆、汇管区纤维组织增生及肝细胞坏死;胆道畸形10例肝细胞内淤胆.结论:根据清抗CMV-IgM阳性和临床表现诊断为CMV肝炎与肝组织CMV抗原检测结果基本相符,CMV抗原阳性肝细胞病理改变与CMV抗原阴性者无明显差异.
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异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的监测及分析
目的:探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后巨细胞病毒感染的早期诊断及人类巨细胞病毒血症(Cytomegalovirus antigenemia)与巨细胞病毒病(CMV disease)发生的关系.方法:CMVpp65单克隆抗体荧光免疫组织化学法检测CMV早期抗原,并进行动态观察.结果:47例HSCT中,17例(36.17%)发生巨细胞病毒血症,7例(14.89%)发生CMV病.基础疾病为血液系统恶性疾病的患者,进行异基因造血干细胞移植后,巨细胞病毒抗原血症和巨细胞病毒病的发生率分别为54.55%和31.82%,而血液系统非恶性疾病的患者分别为20.00%和0.00%,两者之间差异有显著性(P＜0.05).基础疾病、急性GVHD是巨细胞病毒抗原血症和巨细胞病毒病发生的危险因素.结论:CMVpp65病毒抗原检测在造血干细胞移植后CMV病的早期诊断、早期预防、早期治疗及延长移植后长期生存率具有重要意义.
关键词： 巨细胞病毒感染/病因学 抗原 病毒/分析 造血干细胞移植 -
常见性病患者血液套式PCR扩增HCMV-DNA的研究
目的建立检测人巨细胞病毒(HCMV)感染的套式PCR方法并探讨常见性病患者HCMV的感染情况.方法在HCMV IEA基因内自行设计两对引物,建立套式PCR检测688例常见性病患者及138名健康献血员血液HCMV-DNA,同时应用捕获ELISA检测HCMV-IgM.结果性病患者HCMV-IgM及DNA阳性率分别为34.74%和39.53%,与对照组(8.00%、10.14%)相比均有显著性差异(P＜0.01).从性病类型来看,梅毒患者HCMV感染率高,其HCMV-IgM及DNA阳性率分别达46.80%、51.90%;从年龄分组看26～35岁组为HCMV感染高峰组,HCMV-IgM及DNA阳性率分别达40.20%、46.62%.结论性病患者易发生活动性的HCMV感染,性接触也是成年人之间HCMV的重要传播途径之一.套式PCR是一种临床检测HCMV的快速有效手段,值得临床推广.
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荧光定量PCR与普通定性PCR检测乙型肝炎血清HBV DNA结果的比较
目的探讨荧光定量聚合酶链反应(PCR)与普通定性PCR检测血清HBV DNA结果的差异 .方法同时采用荧光标记(AmpliSensor)定量PCR方法及普通定性PCR方法对100例乙型肝炎血清样品进行HBV DNA检测,并分析其相关性,比较其差异.结果 100例荧光定量PCR方法检测HBV DNA阳性率为74.0%(74/100),定性PCR方法检测HBV DNA阳性率为52.0%(52/100),两种方法的HBV DNA检出率比较具有显著性差异(P＜0.01).结论荧光定量PCR与普通定性PCR相比具有一定的优势,完全可以取代定性PCR方法,尤其适用于使用抗病毒药物的患者的疗效观察和病情预测.
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HBV-DNA荧光定量检测在原发性肝癌患者中的应用价值
目的:检测原发性肝癌(PHC)146例血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA拷贝数,进一步研究HBV感染与PHC关系.方法:用ELISA法检测PHC146例血清中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;同时采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)定量检测其血清中HBV-DNA含量.结果:146例PHC中HBVM总感染率达90.41%(132/146),HBV-DNA总阳性率为56.85%(83/146),平均HBV-DNA拷贝数为105.36±1.32/ml.在HBVM各模式组中,小三阳组的病例多占47.95%(70/146),HBV-DNA阳性率为71.43%,平均HBV-DNA拷贝数为105.05±1.22/ml;大三阳组例数较少(7/146),而HBV-DNA阳性率高(100%),平均HBV-DNA拷贝数亦高达107.02±1.45/ml.结论:本研究发现HBV感染与PHCS发生关系密切,HBeAb的存在与PHC之间有相关性,而HBcAb的持续阳性亦可能是PHC的促发因素之一.
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血友病患者输血传播疾病相关血清学指标的调查
血友病是一种常见的遗传性出血疾病,据有关文献报道血友病的发病率为5～10/10万[1].作为一种遗传性出血疾病该病目前尚无法治愈,患者只能采用替代疗法一定期输注血浆、冷沉淀、高纯度FⅦ因子制剂等血液制品进行治疗,由于患者长期输入血液制品.因此血友病患者是输血相关传染病感染的高危人群之一[2].为了解我省血友病患者输血相关传染病的感染情况.作者对来我血液中心门诊部就诊的血友病患者的血样进行了HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒的检测,现报告如下.
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荧光定量PCR检测HBV-DNA假阴性原因分析
PCR假阴性问题因涉及面广,成因复杂,越来越受到临床重视,结合实践分析如下.1 标本的采集、保存1.1 保存条件的影响 静脉血采集后2 h内分离血清或血浆,如不能及时检测于-20 ℃保存,长时间于室温中放置会引起标本中的DNA部分降解.
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丙型肝炎病毒分子生物学研究与治疗进展
本文仅就丙型肝炎病毒的分子生物学研究及当前和将来可能出现的治疗药物综述如下.1 丙型肝炎病毒的分子生物学研究1.1 丙型肝炎病毒的分子生物学丙肝病毒是一种带包膜的正链RNA病毒,其基因组含9600个核苷酸,编码一条长约3 000左右氨基酸的多肽链,这条多肽链经细胞内的蛋白酶及病毒本身的蛋白酶进一步切割加工成10个独立多肽,参与病毒的复制与繁殖[1].作为RNA病毒的家族成员,丙肝病毒表现为高度的遗传异质性,已发现6种主要的基因型及近百种亚型,在世界不同地区分布几率不同.其中以1型和2型为常见,不同基因型的药物敏感性及临床表现不同.丙肝病毒的复制主要发生在肝细胞中,在急性感染期,其复制率可以高达每天1012个病毒颗粒.近年来,人们对丙肝病毒的生长周期有了基本的认识:
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高浓度HBV DNA致核酸检测失效1例分析
目前,国内多数血液中心和部分中心血站相继开展了核酸检测,青岛市中心血站作为卫生部首批试点单位自2010-06-01起全面实施[1].我们采用的Roche cobass 201system,检测发现高浓度HBV DNA致内标失效1例报告如下.
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用分级定量RT-PCR测定中国人血清中HCV RNA
基因的定量分析对分子生物的研究有着重要的作用,而采用PCR方法进行基因定量已成为一种有效的方式.并且,目前已有多种利用PCR进行基因定量的方法,其中以竞争PCR定量和PE公司既时定量PCR方法测定结果较为准确,应用较多既时定量PCR方法采用了特殊设计的荧光-淬灭探针和精密的既时荧光检测设备进行定量.该方法简化的操作,提高的测定的灵敏性和准确性,但其试剂和仪器的价值目前相当昂贵,一般实验室难于承担[1].而竞争PCR方法虽然操作比较麻烦.但也能进行较准确的定量,适合一般实验室使用,为了进一步简化竞争PCR方法,我们对实验进行了改进,建立分级定量的哪方法,只用3种浓度的竞争模板与样品RNA的恒定cDNA混合进行3个PCR反应,通过测定待测模板与竞争模板的终产物荧光强度比值来确定待测RNA的初始量.该方法也适合多个样品同时测定.
