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微波照射预处理对兔肝内源性一氧化氮影响的实验研究
目的:观察微波照射对兔肝脏缺血再灌注损伤中的肝功能ALT、AST、LDH、肝组织匀浆一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的变化,并探讨其保护机制.方法:32只新西兰大白兔被随机分为A、B、C、D共4组.各组于术后2h、4 h抽血查ALT、AST、LDH.实验结束处死获取肝脏标本,检测各组的NO、NOS并行HE染色.结果:B、C、D三组的ALT、AST、LDH显著高于A组.而C、D组的NO、NOS显著低于A、B两组,其中D组又显著低于C组.C组病理改变明显轻于D组.结论:适宜条件的微波照射预处理能明显改善缺血再灌注损伤的肝功能,减轻肝细胞损伤,而NO是该保护机制中的一个重要因素.
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神经营养因子对大鼠学习记忆及海马一氧化氮合酶阳性神经元数目的影响
背景:神经营养因子在神经系统发育和正常生理功能维持及神经损伤中起着重要的作用.对神经营养因子的研究是目前神经科学领域的热点和前沿课题之一. 目的:研究脑室内注射脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophicfactor,BDNF)抗体阻断内源性BDNF对大鼠海马一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)阳性神经元数目的影响.设计:随机对照的实验研究.地点和对象:实验地点在中山大学基础医学院脑研究室.实验对象为健康雄性SD大鼠13只.干预:大鼠脑室内注射BDNF抗体1周后,采用Morris水迷宫进行行为检测.主要观察指标:观察大鼠定位航行试验和空间探索试验状况,并用NADPH-黄递酶组化染色方法观察海马NOS阳性神经元数目的变化.结果:定位航行试验:实验组大鼠平均逃避潜伏期为(33.46±2.64)s,对照组为(17.71±1.86)s,两者差异具有非常显著性意义(t=4.873 3,P＜0.01);空间探索试验:实验组大鼠在平台象限游泳距离百分比为(28.89±6.31)%,对照组为(41.99±7.46)%,实验组明显低于对照组(t=3.390 7,P＜0.01);与对照组相比,实验组大鼠空间学习和记忆能力明显下降.实验组大鼠海马CA1区NOS阳性神经元数目(38.37 ±5.23)明显少于对照组(49.53 ±5.74)(t=8.200,P＜0.01):实验组DG区NOS阳性神经元数目(48.77±5.51)明显少于对照组(60.40±7.39)(t=7.091,P＜0.01).结论:脑室内注射BDNF抗体可导致大鼠空间学习记忆能力下降,以及海马NOS阳性神经元数目减少,表明BDNF对学习和记忆的影响可能与海马NOS阳性神经元数目的变化有关.
关键词： 脑源性神经营养因子/药理学 一氧化氮合酶/分析 海马 -
重组人质粒pEGFP-人内皮一氧化氮合酶的构建
目的:构建含有增强绿色荧光蛋白报道基因的人内皮一氧化氮合酶重组质粒,为细胞转染提供实验依据.方法:实验于2005-05/10在首都医科大学宣武医院完成.用EcoRⅠ酶切pBluescriptⅡSK-人内皮一氧化氮合酶质粒,获得人内皮一氧化氮合酶基因,设计引物进行聚合酶链反应扩增.将人内皮一氧化氮合酶与pMD 18-T simple平滑载体连接后,行EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,回收人内皮一氧化氮合酶,然后将其与经过酶切处理的含有增强绿色荧光蛋白报道基因的载体pEGFP-C1进行连接,形成8.4 kb的质粒,经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切进行电泳筛选、鉴定和测序.结果:①目的基因片段人内皮一氧化氮合酶cDNA的获得:pBluescriptⅡSK-人内皮一氧化氮合酶质粒经EcoRⅠ酶切后,电泳可见3 kb及3.7 kb处各出现一条条带,与质粒图谱所示相符,证明质粒正确.加人上下游引物行聚合酶链反应扩增后,电泳可见3.7 kb处出现一条条带,证明人内皮一氧化氮合酶cDNA的获取成功.②人内皮一氧化氮合酶cDNA的酶切处理:人内皮一氧化氮合酶与pMD 18-T simple平滑载体连接后,EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,电泳分析可见3.7 kb和2.7 kb处各出现一条条带,证明两者连接成功.③pEGFP-人内皮一氧化氮合酶质粒的筛选:载体pEGFP-C1与人内皮一氧化氮合酶cDNA的连接后,EcoRⅠ单酶切电泳可见8.4 kb处出现一条条带,再用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,电泳可见4.7 kb和3.7 kb处各出现一条条带,证明连接正确.④pEGFP-人内皮一氧化氮合酶质粒的序列测定:序列测定结果与pEGFP-C1插入点序列及目的基因片段人内皮一氧化氮合酶cDNA两端序列对比相同,证明重组质粒构建成功.结论:pEGFP-人内皮一氧化氮合酶重组质粒的成功构建,可用于细胞转染,为人内皮一氧化氮合酶基因转移治疗在心血管疾病中的应用提供实验基础.
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针刺足三里和关元穴对衰老小鼠睾丸组织抗氧化作用和超微结构的影响
目的:通过对衰老小鼠足三里和关元穴进行针刺,观察针刺对睾丸抗氧化功能的影响. 方法:实验于2003-06/08在黑龙江中医药大学实验中心(省级重点实验室)完成.①实验动物:选用雄性清洁级昆明种小鼠50只,其中青年组40只,2月龄,老年组10只,20～24月龄.将青年小鼠数字表法随机分为4组,空白组、模型组、生理盐水组、针刺组,每组10只.设10只老年小鼠为老年对照组.各组小鼠常规喂养1周后,模型组:每天颈背部皮注射5 g/LD-半乳糖0.5 mL/只,持续6周.针刺组:每天颈背部皮注射5g/LD-半乳糖0.5mL/只,每天清晨手持小鼠,使其处于仰卧位,用0.5寸长毫针(1 cm),在小鼠的关元穴进针3～5 mm,双侧足三里穴进针5～7mm,采用补法,留针15 min,持续6周.生理盐水组:每天颈背部皮下注射0.5 mL生理盐水/只,持续6周.②空白组和老年对照组再常规喂养6周.③针刺结束24 h后脱颈椎处死小鼠,取出睾丸组织,按照由南京建成生物工程研究所提供的相应试剂盒操作,通过测量各样品吸光度(A值)计算小鼠睾丸一氧化氮,一氧化氮合酶,超氧化物歧化酶,过氧化氢酶,过氧化脂质,丙二醛各项指标含量.结果:昆明种青年小鼠40只和老年小鼠10只均进入结果分析.①干预42 d后,各组小鼠睾丸组织中一氧化氮,一氧化氮合酶,超氧化物歧化酶,过氧化氢酶活性比较:模型组、老年对照组明显低于空白组、生理盐水组、针刺组(P＜0.01);针刺组与空白组、生理盐水组比较差异无显著性意义(P＞0.05).②干预42 d后,过氧化脂质、丙二醛含量比较:模型组和老年对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05);针刺组明显低于模型组、老年对照组(P＜0.01);模型组、老年对照组明显高于针刺组、空白组、生理盐水组(P＜0.01).③干预42 d后睾丸超微结构电镜结果:模型组支持细胞间隙增宽,核周隙增大,并且出现细胞内外水肿的现象.老年对照组中出现支持细胞连接消失,细胞水肿的现象.空白组小鼠的支持细胞的缝隙连接紧密.生理盐水组和空白组、针刺组之间未见差别.结论:针刺足三里和关元穴能提高致衰小鼠睾丸组织中一氧化氮、一氧化氮合酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活性,降低过氧化脂质、丙二醛的含量;并能明显改善小鼠睾丸组织的超微结构,从而延缓睾丸的衰老进程.
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针刺足三里和关元穴对老年大鼠脑心肾组织中一氧化氮合酶和抗氧化系统的影响
目的:观察针刺足三里、关元穴对老年大鼠脑心肾组织中一氧化氮合酶、抗氧化系统中谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶以及脂褐质变化的影响,探讨针刺的抗氧化作用.方法:实验于2002-06/08在为黑龙江中医药大学实验中心完成.①选用雄性清洁级Wistar老年大鼠20只,20月龄;青年大鼠雄性10只,10月龄.将老年大鼠随机分为2组:老年针刺组和老年对照组,每组10只.设10只青年大鼠为青年对照组.老年针刺组:四肢捆绑,固定在固定架上.采用多能脉冲电疗仪每日针刺双侧足三里穴,通电留针15 min,采用连续波,频率3次/s,强度以针柄颤动,但能使动物不挣扎嘶叫,保持安静为度.关元穴留针15 min.②老年对照组和青年对照组:只做相同捆绑处理15 min.3组连续干预28 d.③于后一次针刺24 h后处死大鼠.迅速取出脑、心、肾组织,制成组织匀浆,按照由南京建成生物工程研究所提供的相应试剂盒操作,通过测量各样品吸光度(A值)计算脑、心、肾组织中一氧化氮合酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶以及脂褐质各项指标含量.④计量资料差异比较采用t检验和方差分析.结果:Wistar老年大鼠20只和青年大鼠10只均进入结果分析.①一氧化氮合酶活性:干预28 d后,各年龄组大鼠心组织中高,其次为脑、肾.老年针刺组脑、心、肾组织中明显高于老年对照组(P＜0.01),老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织中明显低于青年对照组(P＜0.01).②谷胱甘肽过氧化物酶活性:干预28 d后,老年针刺组脑、心、肾组织中明显高于老年对照组(P＜0.01);老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织中明显低于青年对照组(P＜0.01).③过氧化氢酶活性活性:干预28 d后,各组脑组织中高,其次心、肾.老年针刺组脑、心、肾组织中明显高于老年对照组(P＜0.01);老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织中明显低于青年对照组(P＜0.01).④脂褐质含量:干预28 d后,老年针刺组脑、心、肾组织明显低于老年对照组(P＜0.01);老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织明显高于青年对照组(P＜0.01).结论:针刺足三里和关元穴能提高脑、心、肾组织中一氧化氮合酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性,降低脂褐质的含量,能起到抗氧化作用.
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实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠iNOS的动态表达及其意义
[目的]研究实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠诱导型-氧化氮合酶(iNOS)的表达规律及其在EAE发病中的作用.[方法]用豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)制备EAE模型.实验分为正常组、模型组(M组).对实验动物进行神经功能评分检测,并在疾病初期、高峰期、缓解期三个时段,HE染色观察大鼠脊髓腰膨大区域炎性细胞浸润、免疫组织化学方法现察脊髓iNOS表达.[结果]模型组大鼠疾病初期腰膨大即有jNOS阳性表达,疾病高峰iNOS阳性袁达达高峰,疾病缓解期iNOS阳性表达下降.[结论]EAE大鼠脊髓中iNOS阳性表达的细胞数量与疾病的活动性有关.推测iNOS的过度表达可能参与了EAE发病机制.
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DM大鼠心肌内iNOS的表达及ATRA的干预作用
[目的]观察糖尿病(diabetic mellitus,DM)大鼠心肌组织内诱生型一氧化氮舍酶(induce-nitricoxide synthase,iNOS)表达水平的变化及全反式维甲酸对其的干预作用.[方法]链脲菌素(STZ)法复制SD大鼠实验性1型DM模型,并随机分为全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA,20 mg/kg·d)处理组或DM组.造模型后30 d及60 d测量空腹血糖、心重/体重比值,HE染色观察心肌结构的改变,并用RT-PCR技术和免疫组化技术检测心肌组织中iNOS表达水平.[结果]30 d和60 d时,DM大鼠心肌内iNOS表达率增加(P<0.05);ATRA处理后可以使心肌内iNOS表达率下降(P<0.05),而DM组和ATRA组大鼠血糖无明显差异(P>0.05).[结论]DM大鼠心肌内iNOS表达率增加,可能与高糖状态下心肌病变有关.ATRA处理后可以使心肌内iNOS表达率下降,这与延缓高糖状态下心肌病变有关.同时说明糖尿痛心肌病的发生发展与iNOS再表达密切相关.
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雌、孕激素对去势雌大鼠血清NO、心肌NOS活性的影响
目的通过观测单纯补充雌激素、孕激素和雌孕激素联合治疗对去卵巢雌大鼠(去势大鼠)血清一氧化氮(NO)和心肌一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨雌激素保护绝经后妇女心血管系统的作用机制.方法采用放射免疫法检测各组血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,用化学比色法测定血清NO和心肌NOS活性.结果血清E2水平和E2/P比值与血清NO水平和心肌NOS活性正相关.去势雌鼠16周后,随着血清E2/P水平和E2/P比值的下降,血清NO水平和心肌NOS活性降低;单纯补充孕激素和联合使用雌孕激素时,E2/P比值低,血清NO水平和心肌NOS活性低;单纯补充雌激素可提高血清NO水平和心肌NOS活性.结论雌激素保护女性心血管系统的作用机制可能与提高NOS活性,增加NO释放量或合成量的作用有关,孕激素可能削弱雌激素的作用;雌激素水平下降和雌孕激素比例失衡可能都是绝经后妇女冠心病发病率升高的原因.
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雌、孕激素对去势雌大鼠血清NO、心肌NOS活性的影响
〖目的〗通过观测单纯补充雌激素、孕激素和雌孕激素联合治疗对去卵巢雌大鼠(去势大鼠)血清一氧化氮(NO)和心肌一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨雌激素保护绝经后妇女心血管系统的作用机制.〖方法〗采用放射免疫法检测各组血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,用化学比色法测定血清NO和心肌NOS活性.〖结果〗血清E2水平和E2/P比值与血清NO水平和心肌NOS活性正相关.去势雌鼠16周后,随着血清E2/P水平和E2/P比值的下降,血清NO水平和心肌NOS活性降低;单纯补充孕激素和联合使用雌孕激素时,E2/P比值低,血清NO水平和心肌NOS活性低;单纯补充雌激素可提高血清NO水平和心肌NOS活性.〖结论〗雌激素保护女性心血管系统的作用机制可能与提高NOS活性,增加NO释放量或合成量的作用有关,孕激素可能削弱雌激素的作用;雌激素水平下降和雌孕激素比例失衡可能都是绝经后妇女冠心病发病率升高的原因.
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肛门直肠畸形儿直肠远端肠壁内一氧化氮合成酶免疫组化研究
目的了解先天性肛门直肠畸形儿直肠远端一氧化氮合成酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)的变化,探讨肛门直肠畸形与一氧化氮的关系.方法采用NOS免疫组织化学方法观察NOS在21例肛门直肠畸形及4例对照组的分布情况.结果正常对照组肠壁肌间、粘膜下含有丰富NOS阳性神经纤维,环肌、纵肌内NOS阳性纤维较少,肛门直肠畸形儿组与对照组相比NOS阳性神经纤维在肌间、粘膜下相似,在环肌、纵肌内略有减少.结论在肛门直肠畸形的手术中应尽量保留直肠远端.
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幽门螺杆菌感染及其相关疾病中COX-2、iNOS、NF-κB表达及其相互关系
目的:研究幽门螺杆菌感染及其相关痰病中COX-2、iNOS、NF-κB表达及其相互关系.方法:采用免疫组化法检测294例胃粘膜标本中COX-2、iNOS的表达和NF-κB的活化.结果:①各实验组和对照组胃粘膜炎症细胞和腺细胞中的COX-2阳性积分有显著差异,其中以IM+DYS组高;且CSG和IM+DYS组HP阳性炎症细胞中COX-2表达明显高于HP阴性;②各实验组和对照组炎症细胞中iNOS的阳性积分有显著差异,其中以CSG组高,IM+DYS组次之;在CSG和IM+DYS组HP阳性炎症细胞中iNOS表达明显高于HP阴性;③中、重度CSG炎症细胞中iNOS表达高于轻度CSG组;④各实验组HP阳性者NF-κB活化率均低于HP阴性,其中CSG组有显著差异;⑤各实验组胃粘膜中COX-2和iNOS的表达呈显著正相关;iNOS的表达和NF-κB的活化呈显著负相关;COX-2的表达和NF-κB的活化无显著相关性.结论:①HP感染可能通过诱导COX-2、iNOS的过度表达参与HP的致病过程及胃癌发生的早期进程.②HP感染者NF-κB活化程度降低可能与HP感染上调COX-2和iNOS的表达,进而反馈抑制NF-κB活化有关.③COX-2、iNOS的表达和NF-κB的活化,在HP的致病过程中相互作用,相互影响,相互制约.
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高眼压缺血-再灌注中脑组织NOS的表达及神经营养因子对其表达的影响
目的:观察视网膜缺血再灌注损伤过程中脑组织一氧化氮合酶(NOS)的变化及神经营养因子对NOS表达的影响,探讨NOS在脑组织不同部位的改变及可能作用机制,进而为临床实践提供依据.方法:建立眼缺血再灌注损伤动物模型,分为对照组、实验组.实验Ⅰ组为缺血组(I组),实验Ⅱ组为缺血2h+再灌注组(I/R组),实验Ⅲ组在缺血再灌注前于右侧侧脑室注射神经营养因子(神经营养因子+ I/R组).采用HE常规染色切片光镜下观察大鼠高眼压脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质结构神经细胞变化,采用免疫组织化学染色分别测定各组大鼠中脑组织以上三个部位NOS的变化.结果:①脑组织不同部位中NOS在对照组、缺血组、缺血再灌注组间无统计学差异.②在再灌注1d组脑组织不同部位的NOS与缺血再灌注组有显著性统计学差异,其中在外侧膝状体中有明显改变.③在再灌注1d组与再灌注2d组间两者存在统计学差异.④在再灌注后5d组与2d组间NOS无统计学差异.⑤在注射神经营养因子的实验Ⅲ组,脑组织中不同部位的NOS与对照组无统计学差异.结论: NOS在脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质参与损伤的作用.在外侧膝状体中NOS的变化在中枢调节作用中起着中介作用, NOS可能参与引起脑组织改变.神经营养因子能明显减轻损伤反应.
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急性胰腺炎胰腺组织中一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性变化
目的:研究急性胰腺炎大鼠胰腺组织中一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性变化规律,探讨一氧化氮及一氧化氮合酶与急性胰腺炎关系.方法:采用SD大鼠腹腔注射蛙皮素复制急性胰腺炎模型,分对照组、急性胰腺炎组,分别测定不同时段胰腺组织中NO,原生型一氧化氮合酶(cNOS)活性及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)活性.结果:急性胰腺炎组织中cNOS活性明显降低(P＜0.01),iNOS活性明显增加(P＜0.01),且与胰腺组织匀浆中NO含量呈正相关.胰腺组织匀浆中NO含量与胰腺病理损害程度显著正相关.观察72h内胰腺炎组胰腺组织中cNOS活性较对照组降低,但统计胰腺炎组内5个时间段cNOS活性无明显差异(P＞0.05),而急性胰腺炎时iNOS活性则明显随时间变化而变化,12h达高峰,但72h均处于较高水平,明显高于对照组.结论:急性胰腺炎时,iNOS活性增高,cNOS活性下调,iNOS产生过量NO因其细胞毒性作用加剧胰腺组织损害.
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老年大鼠肾缺血再灌注后肺损伤一氧化氮合酶的变化与意义
目的:研究大鼠肾缺血/再灌注后急性肺损伤时,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及其在急性肺损伤发生中的作用.方法:采用夹闭双侧肾动、静脉45min后恢复血流的方法制作RIRI模型,免疫组织化学方法检测肺组织中iNOS和eNOS的表达,同时检测肺组织中MDA、MPO、W/D和NO2-/NO3-值,肺组织形态学观察以评价肺损伤的程度.结果:与control组比较,I/R组eNOS表达增强,iNOS表达减弱,MDA、MPO、W/D和NO2-/NO3-值增加,肺组织充血、炎细胞浸润,肺泡腔渗液;与I/R组比较,L-Arg组eNOS表达增强,iNOS表达减弱,NO2-/NO3-增加,MDA、MPO、W/D降低,肺组织损伤有减轻趋势,AG组eNOS表达无明显变化,iNOS活性降低, NO2-/NO3-减少,MDA、MPO、W/D降低,肺组织损伤有减轻趋势.结论:肾缺血/再灌注急性肺损伤过程中,eNOS表达增加,NO生成增多,在肺损伤发生中有一定的保护作用.
关键词： 再灌注损伤/病理生理学 肾疾病/并发症 肺/损伤 一氧化氮合酶/分析 大鼠 -
糖尿病肾损害对半乳糖凝集素-3和内皮一氧化氮合酶的影响
目的:探讨正常和糖尿病肾脏半乳糖凝集素(Gal ectin)-3和内皮一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达水平改变及其与糖尿病肾病(DN)的关系.方法: 选取30只健康成年雄性SD大鼠,随机分为基础对照、正常对照(NC)和糖尿病(DM)组,DM组一次性腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ),72h后测定随机血糖如大于16.7mmol/L,则稳定1周确定成模;NC组注射等量的枸橼酸液;于4、8周末提取肾脏总RNA作逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),凝胶图谱成像分析系统分析mRNA表达结果.结果: ①Galectin-3 mRNA在糖尿病组8周时开始表达,与正常组和糖尿病4周时有显著差异;②eNOS mRNA在正常和糖尿病肾脏均有表达且存在显著性差异,但随DN病程进展表达无明显增加.结论:Galectin-3和eNOS的表达是DN发病过程中机体的适应性改变,可能会延缓血糖对肾脏的损害.
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急性血糖波动对心肌细胞内氧化应激的影响
目的：探讨急性血糖波动对心肌细胞内谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）、NO 水平及iNOS表达的影响。方法：以间断静脉输注50％葡萄糖注射液48h的方法，建立急性血糖波动和高血糖动物模型。采用比色法检测心肌匀浆中（GSH-PX）、NO的水平；免疫组化的方法检测心肌细胞浆中iNOS表达。结果：急性血糖波动组心肌细胞中GSH-Px 水平显著减低，NO水平及iNOS表达均显著升高。结论：急性血糖波动能导致机体的氧化应激水平明显升高，从而损伤心肌。
