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miR-345在胃癌中的表达特点及其临床意义
目的 探讨miR-345在胃癌中的表达特点及其临床意义.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测人胃黏膜上皮细胞GES-1、3株胃癌细胞系(SGC7901、MGC803、MKN45)及48例配对的胃癌与癌旁组织中miR-345的表达水平,并对miR-345表达水平与患者临床病理特征、生存预后的关系进行相关性分析,后通过PicTar和TargetScan软件预测miR-345潜在的重要靶基因.结果 与正常组织比较,胃癌细胞系及胃癌组织中miR-345表达明显升高(P<0.05);miR-345的表达与胃癌的分化程度(P=0.005),TNM分期(P=0.003),原发肿瘤的浸润深度(P<0.001)和淋巴结转移(P<0.001)密切相关;过度表达的miR-345预示胃癌患者的术后生存期更短;miR-345潜在的重要靶基因为CDKN1A、BBC3和BUNX3.结论 miR-345与胃癌的发生、发展密切相关,可能成为胃癌诊治和评估预后的潜在生物学指标.
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沉寂miR-345表达对胃癌细胞增殖的影响及其机制探讨
目的 探讨在胃癌细胞中沉寂miR-345表达对癌细胞增殖及p21Cip1的影响.方法 采用脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803、MKN45,MTT法检测胃癌细胞系生长速度,流式细胞术检测其对胃癌细胞周期的影响.随后采用Real-time PCR、Western blot检测胃癌细胞中p21Cip1水平.结果 MGC803、MKN 45细胞转染miR-345反义寡核苷酸后其miR-345的表达量较对照组均明显下降分别为(8.06±0.69)比(23.06±0.81),P=0.009,(7.26±0.55)比(17.73±0.65),P=0.016;MTT试验结果显示MGC 803、MKN 45转染miR-345反义寡核苷酸后其细胞存活率较对照组下降分别为(190.03±0.55)比(405.20±0.22),P=0.008,(242.09±0.83)比(440.58±0.07),P=0.025;MGC803、MKN 45细胞转染miR-345反义寡核苷酸并能够明显阻滞胃癌细胞从G1期向S期的进程;MGC803、MKN 45细胞转染miR-345反义寡核苷酸后其p21Cip1的mRNA的表达量较对照组升高分别为(48.09±0.67)比(15.20±0.32),P=0.011,(56.07±0.77)比(13.82±0.59),P=0.007,Westem blot结果显示在MGC803、MKN45细胞中沉寂miR-345后p21Cip1蛋白表达量亦明显升高.结论 沉寂miR-345的表达可以抑制胃癌细胞株MGC803、MKN45的增殖;其机制与上调p21Cip1的表达有关.
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miR-345在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的 探讨microRNA-345(miR-345)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并进一步分析其与肿瘤的临床病理特征和预后关系.方法 利用Real-time PCR检测98例NSCLC患者组织及三种细胞系中miR-345的表达,分析miR-345的表达与临床预后的关系.结果 和对照组相比,miR-345的表达在NSCLC组织及细胞系中显著下调(P<0.05);组织中miR-345的表达水平和临床病理指标包括淋巴结转移(P<0.001)、远端转移(P=0.028)、TNM分级(P=0.004)以及病理分期(P=0.011)有关;低表达miR-345的NSCLC患者组和高表达miR-345的患者组相比,其总生存率较低(P=0.021).多因素分析表明miR-345的表达是NSCLC预后的独立危险因素(HR=3.897,95% CI:2.263~10.440;P=0.012).结论 miR-345在NSCLC组织及细胞系中的表达降低,低表达的miR-345和NSCLC的进展及预后有关,表明miR-345可能作为NSCLC的一个潜在临床诊断标记.
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靶向沉默 miR-345表达对胃癌细胞周期的影响及其机制
目的：探讨miR-345影响胃癌细胞生长周期的作用机制。方法采用脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803、MKN45以沉默miR-345表达，采用实时英光定量PCR（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹（Western blotting）检测胃癌细胞中p21 Cip1水平，随后检测CDK4、CDK6、Cyclin D1、p-Rb、Rb蛋白水平，进一步克隆形成实验比较其增殖能力，流式细胞术检测miR-345对胃癌细胞周期的影响。结果脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803、MKN45可以抑制miR-345的表达；p21Cip1的mRNA和蛋白水平在低miR-345表达的胃癌细胞系中升高；下调miR-345的表达后MGC803、MKN45细胞中CDK4、CDK6、Cyclin D1和总Rb蛋白的表达水平无明显变化，但Rb蛋白的磷酸化水平显著降低。结论沉默miR-345的表达能够明显阻滞胃癌细胞从G1期向S期的进程，减慢细胞生长速度；其机制与上调p21 Cip1进而抑制Rb蛋白的磷酸化有关。
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miR-345抑制人胰腺癌细胞的增殖能力研究
目的 探讨miR-345对人胰腺癌细胞增殖能力的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-RCR)检测miR-345在胰腺癌组织标本、5株人胰腺癌细胞系及1株人正常胰腺上皮细胞系中的表达量,选取miR-345表达差异较明显的胰腺癌细胞PANC-1和SW1990细胞系进行后续实验;构建miR-345过表达慢病毒载体(lv-miR-345-U)及空载慢病毒载体(lv-NC),采用qRT-PCR检测感染效率;在体外采用细胞计数Kit-8(CCK-8)实验,采用平板克隆实验检测miR-345对胰腺癌细胞增殖能力的影响;体内建立裸鼠皮下成瘤模型,并将瘤体包埋,采用免疫组织化学实验法检测miR-345对胰腺癌细胞成瘤能力的影响;采用蛋白质免疫印迹(western blotting)检测miR-345对预测靶点Bcl-2表达的影响.结果 qRT-PCR显示,5株胰腺癌细胞系中miR-345表达量低于正常胰腺上皮细胞系(P<0.05);过表达miR-345后PANC-1和SW1990细胞增殖能力均明显受到抑制(P<0.05),细胞集落形成数量明显减少(P<0.05).裸鼠皮下成瘤模型显示,过表达miR-345后肿瘤体积及免疫组织化学指标Ki-67均明显低于正常胰腺上皮细胞系组,差异均有统计学意义(P<0.05);上调miR-345的表达能使凋亡关键Bcl-2的表达下调.结论 miR-345能在体内外有效抑制胰腺癌细胞的增殖,有可能成为胰腺癌治疗的新靶点.
