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氧化应激在血管内皮细胞缺氧/再给氧损伤中的作用
目的 探讨冠状动脉内皮细胞( CAEC)缺氧再给氧(H/R)损伤发生机制及抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对它的影响.方法 将体外培养的猪CAEC分为3组.对照组:未经处理;H/R组:将细胞作H/R处理;PDTC组:于培养液中加入PDTC而后作H/R处理.分别检测各组CAEC谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.结果 在相应时间点,对照组细胞GSH、MDA的含量及ICAM-1表达无明显改变;H/R组及PDTC组细胞GSH含量明显低于对照组,而MDA的含量及ICAM-1表达明显增高,其中PDTC组细胞GSH含量又明显高于H/R组,MDA的含量及ICAM-1表达明显低于H/R组.结论 H/R损害CAEC,使其GSH含量明显减少、MDA含量及ICAM-1表达明显增加;PDTC有效降低ICAM-1活性,减轻H/R损伤.提示氧化应激在血管内皮细胞缺氧-再给氧损伤过程中起重要作用.
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吡咯烷二硫氨基甲酸脂对缺氧再给氧冠状动脉内皮细胞凋亡的影响
目的:探讨缺氧再给氧(H/R)时冠状动脉内皮细胞(CAEC)氧自由基清除功能和细胞凋亡率的变化及抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂(PDTC)对它的影响.方法:将体外培养的猪CAEC分为3组.对照组:未经处理;H/R组:作H/R处理;PDTC组:在H/R前于培养液中加入PDTC.分别检测各组细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、核转录因子(NF-κB)表达及细胞凋亡率.结果:实验期对照组GSH、MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率无明显改变;H/R及PDTC组GSH含量明显低于对照组同期,而MDA含量、NF-κB表达及细胞凋亡率明显高于对照组同期;但PDTC组GSH含量明显高于H/R组同期,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显低于H/R组同期.结论:H/R使细胞GSH含量明显减少,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显增加;PDTC能有效降低NF-κB的表达,改善细胞氧自由基清除功能,降低细胞凋亡率,减轻H/R损伤.
关键词： 冠状动脉内皮细胞 缺氧再给氧损伤 细胞凋亡 吡咯烷二硫氨基甲酸脂 -
高同型半胱氨酸血症大鼠冠状动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达
目的 观察高同型半胱氨酸血症对大鼠冠状动脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1的影响,以明了冠状动脉粥样硬化性心脏病的发病机制.方法 24只大鼠随机分成正常饮食对照组、高蛋氨酸饮食组、高蛋氨酸+叶酸饮食组、高半胱氨酸饮食组.每组6只,分别给予普通饲料;普通饲料加1.7%蛋氨酸;普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%叶酸;普通饲料加1.2%半胱氨酸.饲养6周,采用高效液相色谱荧光检测法测定血浆总同型半胱氨酸浓度,免疫组织化学染色法检测大鼠冠状动脉左主干和左前降支内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达.结果 喂以高蛋氨酸饲料6周,可诱导大鼠高同型半胱氨酸血症.与正常饮食对照组比较,高蛋氨酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸浓度显著升高(P＜0.01),冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1 的表达水平明显增强;高蛋氨酸+叶酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸水平较高蛋氨酸饮食组显著降低(P＜0.01),其冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平也降低;高半胱氨酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸浓度,以及冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平与正常饮食对照组比较差异无显著性.结论 高同型半胱氨酸血症促进了大鼠冠状动脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1,在冠状动脉粥样硬化性心脏病的发生和发展中起着重要的作用.
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缺氧条件下骨髓间充质干细胞对人冠状动脉内皮细胞自噬和凋亡的影响
目的 探索缺氧状况下MSC对内皮细胞自噬的诱导以及对早期凋亡率的影响.方法 构建HCAEC与MSC间接共培养模型,实验分组:共培养组:MSC与HCAEC共培养;单独培养组:HCAEC单独培养;对照组:HCAEC使用与共培养组相同的培养基进行单独培养.上述各组分别予常氧(5%CO2,95%空气)和缺氧(1%O2,5%CO2,94%N2)培养24 h,Western blotting检测各组HCAEC细胞LC3蛋白和Beclin-1蛋白的表达量,RT-qPCR检测各组HCAEC细胞LC3基因和Beclin-1基因的表达水平,流式细胞术检测各组HCAEC细胞早期凋亡率.结果 共培养组与单独培养组相比、以及缺氧组与常氧组相比,LC3蛋白和Beclin-1蛋白表达量均有升高(P<0.05).各组间LC3基因和Beclin-1基因的表达水平没有检测到明显差异(P>0.05).缺氧组中共培养组的早期凋亡率为(8.86%±1.48%),明显低于单独培养组(15.23%±2.56%)和对照组(14.49%±3.31%)(P<0.05).结论 MSC可以诱导HCAEC产生自噬,并在缺氧状况下改善HCAEC的生存状况,减少早期凋亡率.
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B7相关蛋白-1在人冠状动脉内皮细胞的表达及临床意义
目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人冠状动脉内皮细胞表达B7相关蛋白-1(B7RP-1)的影响及其临床意义.方法 体外培养人冠状动脉内皮细胞,通过间接免疫荧光法、RT-PCR和Westem blotting等方法,观察B7RP-1在人冠状动脉内皮细胞表达及ox-LDL的干预作用.结果 (1)B7RP-1表达于人冠状动脉内皮细胞,荧光信号呈点状,散在分布于细胞表面;RT-PCR显示B7RP-1的mRNA扩增产物片段位于相当于Marker 469 bp的位置,Western blotting检测B7RP-1的相对分子质量大小约为70000.(2)ox-LDL刺激组B7RP-1的平均光密度OD值和吸光度A值均分别高于空白对照组,ox-LDL可增加B7RP-1在人冠状动脉内皮细胞中的mRNA和蛋白表达,并具有统计学意义(均P<0.05).结论 B7RP-1表达于人冠状动脉内皮细胞表面,具有慢性致炎症作用的ox-LDL可上调共刺激分子B7RP-1 mRNA和蛋白表达,这可能是动脉粥样硬化的免疫学发病机制之一.
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体外培养的新生小牛冠状动脉内皮细胞释放NO、ET-1和PGI2的实验研究
目的建立新生小牛冠状动脉内皮细胞体外培养模型,并观测其对NO、ET-1和PGI2的分泌.方法采用机械分离方法,通过内皮细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色和其在倒置相差显微镜下的形态进行鉴别.用放免法和比色法测定培养液中ET-1、PGI2、NO浓度.结果新生小牛冠状动脉内皮细胞在体外生长曲线呈"S"形,并能分泌ET-1、PGI2和NO.结论新生小牛冠状动脉内皮细胞能够进行体外培养,并能分泌ET-1、PGI2和NO.
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猪的冠状动脉内皮细胞体外培养方法
目的:建立实验小型猪的冠状动脉内皮细胞体外培养方法.方法:冠状动脉血管块短暂酶消化后采用植块法进行培养.结果:植块培养2日细胞从植块中移出;培养6日植块周围细胞呈铺路石样特征,传代/纯化一次后5日细胞单层贴壁生长,融合成片.细胞因子Ⅷ免疫荧光检测内皮细胞表达阳性,纯度100％.结论:成功建立猪冠状动脉内皮细胞体外培养方法,此方法操作简单、快速,得到细胞纯度高.
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重楼皂苷Ⅰ对体外抑制冠状动脉内皮细胞增殖的影响
目的 观察重楼皂苷Ⅰ对冠状动脉内皮细胞增殖的影响.方法 重楼皂苷Ⅰ处理冠状动脉内皮细胞后,通过细胞计数法计算冠状动脉内皮细胞的生长速度,MTT法测定冠状动脉内皮细胞活性,RT-PCR测定钙粘蛋白和Caspase3mRNA表达.结果 重楼皂苷Ⅰ减慢冠状动脉内皮细胞的生长速度,降低冠状动脉内皮细胞活力,降低冠状动脉内皮细胞的钙粘蛋白mRNA表达,增加Caspase3 mRNA表达.结论 重楼皂苷Ⅰ抑制冠状动脉内皮细胞增殖,诱导冠状动脉内皮细胞凋亡.
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氧化低密度脂蛋白刺激人冠状动脉内皮细胞可诱导共刺激分子配体的表达
和16.03±4.08(n=6), ox-LDL(100 mg/L)可增加ICOSL在人冠状动脉内皮细胞中mRNA和蛋白的表达, 并具有统计学意义(P＜0.05).结论:ox-LDL可上调人冠状动脉内皮细胞表达ICOSL.
