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使用腺病毒过表达TXNIP对H9C2心肌细胞损伤和凋亡的影响
本文旨在使用病毒转染技术,观察正常培养条件下的心肌细胞单纯过表达硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)是否可以引起细胞损伤和凋亡的发生,并分析其作用途径.对数生长期的H9C2心肌细胞分为三组:正常培养组、空病毒(Ad-eGFP)组、TXNIP过表达(Ad-TXNIP-eGFP)组,使用正常糖脂浓度(5 mmol/L葡萄糖)的DMEM培养基,均于转染72 h后收集细胞和培养基进行指标测定.结果显示,细胞转染成功,72 h转染效率达到高峰.与Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP转染组TXNIP mRNA (P＜ 0.05)和蛋白表达(P＜0.01)均明显升高；心肌caspase-3 (P＜ 0.05)和LDH活性明显升高(P＜0.01)；使用流式细胞仪测得细胞凋亡明显增加(P＜0.01).Trx活性、与Trx相关的自由基损伤以及介导氧化应激损伤凋亡途径的p38激酶的活性检测显示,与Ad-eGFP组相比,TXNIP过表达组的Trx活性明显降低(P＜0.01),反映膜脂质过氧化损伤的指标丙二醛(malondialdehyde,MDA)、3-硝基酪氨酸明显升高(P＜0.01),p38激酶活性明显升高(P＜0.01).这些结果提示,通过腺病毒转染单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养条件下的心肌细胞发生损伤和凋亡,其具体机制与抑制Trx活性、增加自由基损伤和p38激酶介导的凋亡有关.
关键词： 硫氧还蛋白 硫氧还蛋白相互作用蛋白 心肌细胞 凋亡 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白与2型糖尿病及胰岛素抵抗的相关性
目的 探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)与2型糖尿病(T2DM)及胰岛素抵抗的关系.方法 采用ELISA法检测T2DM组(A组,54例)及正常对照组(B组,30例)患者血清TXNIP水平,同时检测糖化血红蛋白(HbAlc)、空腹血糖(FPG)、胰岛素(FINS)及血脂.结果 A组血清TXNIP水平显著高于B组(P＜0.05).TXNIP与FPG、HbAlc、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)呈显著正相关(P＜0.01); HbAlc和HOMA-IR是TXNIP的独立影响因素.结论 TXNIP可能参与了T2DM及胰岛素抵抗的病理生理过程.
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 2型糖尿病 胰岛素抵抗 -
白藜芦醇通过TXNIP-NLRP3通路对HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤的作用
目的:探讨白藜芦醇通过硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)-炎性体3(NLRP3)通路对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)高糖缺氧复氧损伤的作用.方法:随机将HK-2细胞分为高糖组(HG组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)及高糖缺氧复氧+白藜芦醇预处理组(HHR-RES组)3组,每组n=5.采用高糖刺激72 h,缺氧4h复氧2h的方法建立高糖缺氧复氧模型,白藜芦醇预处理组在高糖刺激的同时给予白藜芦醇50 μmol·L-1处理.CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测细胞存活率和细胞损伤情况,超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)法检测细胞氧化应激水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光法检测TXNIP和NLRP3蛋白的表达.结果:与HG组比较,HHR组LDH水平、MDA含量、细胞凋亡率、TXNIP和NLRP3蛋白表达升高(均P＜0.05),而细胞存活率、SOD活性降低(均P＜0.05);与HHR组比较,HHR-RES组LDH水平、MDA含量、细胞凋亡率、TXNIP和NLRP3蛋白表达降低(均P＜0.05),而细胞存活率、SOD活性升高(均P＜0.05).结论:白藜芦醇通过抑制TXNIP-NLRP3通路减轻HK-2细胞在高糖缺氧复氧下的损伤.
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Txnip与胰腺β细胞功能障碍和细胞凋亡
硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,Txnip)可通过与硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)相互作用产生二硫键抑制其还原酶活性,在调节细胞氧化还原平衡中起重要作用.近年来,Txnip因为在葡萄糖和脂肪代谢中的重要调节作用,以及与胰腺β细胞功能障碍和细胞凋亡的密切关系而受到广泛关注,Txnip也被认为是2型糖尿病防治的一个新的明星分子.本文拟就国内外有关Txnip与胰腺β细胞功能障碍和细胞凋亡的相关研究进展做一综述.
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 细胞功能障碍 细胞凋亡 2型糖尿病 -
C-MYC和硫氧还蛋白相互作用蛋白在前列腺癌组织的表达及临床意义
目的 探讨C-MYC和硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在前列腺癌和良性前列腺增生组织的表达及意义.方法 收集50例前列腺癌和49例良性前列腺增生组织,采用免疫组织化学技术检测C-MYC和TXNIP的表达,分析C-MYC和TXNIP的表达与临床资料的关系.结果 C-MYC在前列腺癌组织的阳性率为64.0％ (32/50),良性前列腺增生组织为10.2％ (5/49),差异有统计学意义(P＜0.05).TXNIP在前列腺癌组织的阳性率为36.0％(18/50),良性前列腺增生组织为79.6％ (39/49),差异有统计学意义(P＜0.05).C-MYC和TXNIP的阳性表达率与前列腺特异性抗原(P＜0.05)、TNM分期(P＜0.05)显著相关.在Gleason评分＜7分和＞7分组,C-MYC的阳性表达差异有统计学意义(P＜0.05),而＜7分组和=7分组、=7分组和＞7分组比较差异无统计学意义.在Gleason评分＜7分和＞7分组、＜7分和=7分组,TXNIP的阳性表达差异有统计学意义(p＜0.05),而在=7分和＞7分组比较差异无统计学意义.前列腺癌中C-MYC与TXNIP的阳性表达呈负相关(r=-0.306,P＜0.05).结论 C-MYC和TXNIP与前列腺癌的发生发展、恶性程度密切相关.
关键词： 前列腺癌 c-myc 硫氧还蛋白相互作用蛋白 -
下调硫氧还蛋白相互作用蛋白表达对急性脑梗死大鼠脑保护作用
目的 探讨下调硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)表达对急性脑梗死大鼠脑保护作用.方法 48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阴性对照组和TXNIP干扰组.构建大鼠缺血再灌注损伤模型.建模3d时,行神经功能评分,分别检测大鼠脑梗死面积和神经细胞凋亡水平,以及脑组织中TXNIP基因和TXNIP、ASK1、p-ASK1和caspase-1蛋白表达.结果 TXNIP干扰组大鼠在建模3d时,神经功能评分[(1.65±0.10)分]低于模型组[(2.22士0.55)分]和阴性对照组[(2.49士0.97)分](F =42.046,P=0.000).TXNIP干扰组大鼠脑梗死面积[(16.40±1.32)％]和神经细胞凋亡率[(22.61±2.33)％]低于模型组[(24.74士2.38)％和(71.53±6.25)％]和阴性对照组[(23.48±2.72)％和(68.23±3.05)％](F=192.936,F=473.627;P＜0.05].TXNIP干扰组大鼠脑组织中TXNIP mRNA和蛋白、p-ASK1和caspase-1蛋白相对表达量低于模型组和阴性对照组,而ASK1蛋白相对表达量高于模型组和阴性对照组(P＜0.05).结论 下调TXNIP基因表达可减少脑梗死面积和神经细胞凋亡,其机制可能与抑制促进凋亡相关蛋白ASK1磷酸化介导的细胞凋亡有关.
关键词： 急性脑梗死 硫氧还蛋白相互作用蛋白 脑保护 细胞凋亡 大鼠 -
新诊断2型糖尿病患者血清硫氧还蛋白、硫氧还蛋白相互作用蛋白与颈动脉粥样硬化的相关性
目的：探讨新诊断2型糖尿病（T2DM）患者血清硫氧还蛋白（Trx）、硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）水平与颈动脉粥样硬化（CAS）的相关性。方法选取2014年2月-2015年11月于河北省唐山市工人医院内分泌科就诊的新诊断T2DM患者160例作为病例组。根据颈动脉超声检查结果将患者分为T2DM伴CAS组（CAS组，n=65例）和T2DM不伴CAS组（NCAS组，n=95例）。同时从医院健康体检中心选取非糖尿病健康人群140例作为正常组。记录其年龄、性别、体重指数（BMI）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP），收集其临床检验结果，包括空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、糖化血红蛋白（HbA1C）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、同型半胱氨酸（Hcy），计算胰岛素抵抗指数（HOMA- IR）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清Trx、TXNIP含量，采用胰岛素还原法检测血清Trx活性。结果与正常组比较，T2DM患者FPG、HbA1c、HOMA- IR、Trx、TXNIP水平升高，Trx活性下降（均<0.05）；T2DM患者CAS 组较 NCAS 组年龄较大，FPG、HbA1c、SBP、Trx、TXNIP水平较高，Trx活性下降（均<0.05）；在T2DM患者中，Trx与HbA1c呈正相关，TXNIP与HbA1c、HOMA- IR呈正相关，Trx活性与TXNIP呈负相关（均<0.05）；在T2DM患者中，年龄、HbA1c、Trx、TXNIP及Trx活性为合并CAS的影响因素，其中年龄（O^R=1.134，=0.032）、HbA1c（O^R=1.275，=0.021）、Trx（O^R=1.532，=0.015）、TXNIP（O^R=1.731，=0.005）为CAS发生的危险因素，而Trx活性（O^R=0.507，=0.002）为CAS发生的保护因素。结论新诊断T2DM患者血清Trx、TXNIP、Trx活性与其CAS相关，提示Trx系统可能参与了CAS的发生及发展。
关键词： 新诊断2型糖尿病 硫氧还蛋白 硫氧还蛋白相互作用蛋白 颈动脉粥样硬化 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白在大鼠急性肾损伤中的作用
目的 探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在大鼠急性肾损伤中的作用.方法 16只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组(S),缺血再灌注组(IR),每组8只.采用夹闭双侧肾蒂25 min,再灌注48 h复制大鼠急性肾损伤模型.取大鼠肾脏HE染色观察病理学结果,血标本测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测细胞凋亡指数,Western blot检测TXNIP和炎性体3蛋白(NLRP3)的表达,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素1β(IL-1β).结果 与S组比较,IR组肾小管肿胀,间质水肿,刷状缘丢失,空泡变性坏死;与S组比较,IR组BUN,Scr,MDA,TXNIP,NLRP3及IL-1β 表达增高(P<0.05),凋亡指数增高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05).结论 TXNIP可能通过激活NLRP3/IL-1β 炎症通路参与大鼠急性肾损伤.
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 炎性体3蛋白 炎症通路 急性肾损伤 -
TXNIP在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用
目的 探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用.方法 将HK-2细胞随机分为三组(n=6):高糖组(HG组),高糖缺氧复氧组(HHR组),高糖缺氧复氧+TXNIP干扰组(HHR-siRNA组).采用高糖刺激72 h,缺氧4 h复氧2 h的方法建立高糖缺氧复氧模型.CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞活性,活性氧(ROS)检测细胞氧化应激水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和Caspase-1,Western blot法检测TXNIP和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白-3(NLRP3)的表达.结果 与HG组相比较,HHR组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3升高,而CCK-8降低,差异有统计学意义(P<0.05);与HHR组相比较,HHR-siRNA组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3降低,而CCK-8升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TXNIP在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中发挥了重要作用,抑制TXNIP可以降低高糖缺氧复氧损伤.
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 HK-2 高糖 缺氧复氧 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白表达下调减轻大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤
目的：观察大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）后早期硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin-interacting protein ,TXNIP）表达变化，检测干预前后TXNIP及下游凋亡因子表达，探讨TXNIP参与SAH后早期脑损伤（early brain injury，EBI）的可能机制。方法血管内穿刺法建立SAH模型。97只成年雄性SD大鼠，随机分为假手术对照组（Sham组，17只）、SAH组（32只）、Control siRNA组（12只）、TXNIP siRNA组（12只）、白藜芦醇（resveratrol，RES）对照组（12只）、RES干预组（12只）。Western blot检测SAH后各时间点及干预前后TXNIP、p-ASK-1、Caspase-3表达变化，荧光共聚焦检测TXNIP在神经元定位，TUNEL法检测细胞凋亡与TXNIP共定位，同时进行脑水肿评估(6只/组)和行为学评分（12只/组）。结果采用TXNIP siRNA和TXNIP抑制剂RES干预后死亡率、行为学评分及脑水肿（F=7.964，P<0.05）得到改善。荧光共聚焦显示TXNIP在大鼠脑神经元广泛表达，且主要位于胞浆。荧光TUNEL提示TXNIP与皮层区及海马区凋亡细胞共定位。Western blot发现与Sham组（0.476±0.043，n=3）比较，TXNIP在SAH后12h（0.729±0.548）表达逐渐增高，72h（1.509±0.071）仍处于较高水平，同时伴随下游凋亡因子的增高，差异有统计学意义（F=7.806，P<0.05）。采用TXNIP siRNA和TXNIP抑制剂RES干预后，TXNIP表达下调（F=900.849，P<0.05，n=3），下游凋亡因子出现下降（p-ASK1，F=32.897，P<0.05；Caspase-3，F=89.120，P<0.05）。结论大鼠SAH后早期TXNIP表达增加，通过其促凋亡机制参与EBI发生，下调TXNIP能减轻大鼠SAH后EBI，这可能为临床SAH早期治疗提供新的治疗思路。
关键词： 硫氧还蛋白相互作用蛋白 蛛网膜下腔出血 早期脑损伤 细胞凋亡 -
硫氧还蛋白互作蛋白在肾缺血再灌注肾小管细胞损伤中的作用及机制
目的 探讨硫氧还蛋白互作蛋白在肾急性缺血再灌注肾小管上皮细胞损伤中的作用及可能机制.方法 体外建立肾缺血再灌注肾小管上皮细胞HK-2损伤的模型并下调TXNIP的表达,流式细胞术检测细胞内ROS水平和细胞凋亡;RT-qPCR法检测TXNIP mRNA的表达.Western Blot法检测TXNIP等相关蛋白的表达.结果 与正常对照组比较,OGD/R组ROS水平和细胞凋亡率明显升高(P<0.01), GPX4蛋白表达明显降低(P<0.01);与OGD/R组比较,TXNIP siRNA组TXNIP蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01),细胞内ROS水平和细胞凋亡率明显降低(P<0.01),GPX4蛋白表达明显升高(P<0.01).结论 下调TXNIP可以抑制肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,可能机制是激活GPX4和减少ROS.
关键词： 缺血再灌注损伤 硫氧还蛋白相互作用蛋白 活性氧簇 凋亡 -
硫氧还蛋白相互作用蛋白通过诱导氧化应激促进肾脏纤维化的发生
目的 探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interaction protein,TXNIP)对肾脏纤维化的作用.方法 将12只SPF级C57BL/6J小鼠和12只TXNIP基因敲除鼠(TXNIP-/-)均按随机数字表法分为2组:正常对照组(normal control group,NC组)和高脂饮食组(high-fat diet group,HFD组),喂养16周后取其肾组织,用HE、PAS及Masson染色方法观察肾脏组织病理变化及纤维化改变,采用免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾脏组织的表达水平,并通过Western blot检测肾脏组织中TXNIP、TGF-β1、α-SMA、p38 MAPK及p-p38 MAPK的表达情况.结果 NC组与HFD组中TXNIP-/-小鼠的肾脏纤维化程度及p-p38 MAPK蛋白表达水平均明显低于C57BL/6J小鼠(P＜0.05);而C57BL/6J小鼠HFD组与NC组相比,TXNIP在肾脏表达明显上调,且肾脏纤维化及p38磷酸化水平明显增加(P＜0.05).结论 硫氧还蛋白相互作用蛋白可能促进高脂诱导下肾脏纤维化,其作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路有关.
