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结肠癌耐药细胞株LoVo/5-FU的建立及其差异表达基因的筛选
目的:建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关基因.方法:采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线;用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI);用基因芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中的差异表达基因,从中筛选出可能的耐药相关基因;用半定量RT-PCR方法对筛选出的部分耐药相关基因在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证.结果:LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大.LoVo/5-FU对5-FU、ADM、MMC耐药,而对CDDP无耐药性(RI:7.69,2.78,1.43和0.96).通过基因芯片筛选出差异表达基因425个,可能的耐药相关基因包括CYP1B1,NAT2,RNF20,SNAI2,MAP3K2,其中CYP1B1在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异(Cv5/Cy3=5.877).结论:LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,耐药机制可能与CYP1B1,NAT2等耐药相关基因有关.
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结肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu中microRNA表达的初步研究
目的 建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关的microRNA.方法 采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线；用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI)；用microRNA芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中mi-croRNA的表达谱,筛选差异表达的microRNA;用实时荧光定量PCR方法对筛选出的部分差异microRNA在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证.结果 LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,耐药株LoVo/5-FU细胞相对于其亲本LoVo细胞的耐药倍数为8.08.microRNA芯片的结果显示,耐药株LoVo/5-FU细胞与亲本LoVo细胞比较,有10个microRNA表达上调,13个microRNA表达下调；实时荧光定量pcr的结果进一步证实mir-210、mir196a、mir-1281在LoVo/5-FU中显著上调,而let-7fmir-1228显著下调,其中mir-210在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异.结论 LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,筛选获得的差异miRNA可能通过调控其靶基因而参与人结肠癌细胞对5-Fu的耐药,为进一步研究microRNA在结肠癌耐药机制中的作用奠定基础.
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中成药逆转人结肠癌细胞株对化疗药物耐药的研究
目的:本研究拟观察鸦胆子油乳注射液、华蟾素注射液和注射用黄芪多糖对结肠癌耐药细胞株的杀伤作用,为临床合理、有效使用中成药提供实验依据.方法:运用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结肠癌lovo细胞耐5-氟尿嘧啶细胞株,并命名为lovo/5-Fu.MTT法检测lovo/5-Fu的耐药能力及不同浓度中成药对lovo/5-Fu细胞株的耐药逆转作用,并根据相应结果计算耐药逆转倍数(RF).细胞迁移实验分为4组:空白对照组、黄芪多糖组、鸦胆子组和华蟾素组,检测不同中成药对lovo/5-Fu细胞株迁移能力的影响.结果:5-Fu对lovo细胞株的IC50为14.5 mg/L,对lovo/5-Fu细胞株的IC50为115.1 mg/L,根据上述两株细胞的IC.可算出lovo/5-Fu细胞株对5-Fu的耐药指数为:7.94.浓度为17.3、45.3、83.8、112.5 mg/L鸦胆子油乳注射液的耐药逆转倍数分别为9.5、23.5、54.4、86.5倍;浓度为8.2、21.2、38.6、50.1 mg/L华蟾素注射液的耐药逆转倍数分别为112、25.2、56.6、90.5倍;浓度为26.3、70.9、115.2、163.4 mg/L注射用黄芪多糖的耐药逆转倍数分别为1.5、8.2、26.5、74.2倍.与空白对照组比较,黄芪多糖组、鸦胆子组和华蟾素组侵出小室的细胞数目明显减少,迁移能力明显减弱,其中以鸦胆子组和华蟾素组更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:鸦胆子油乳注射液、华蟾素注射液和注射用黄芪多糖这三种中成药均能不同程度的逆转lovo/5-Fu对5-Fu的耐药性,其中以鸦胆子油乳注射液和华蟾素注射液为明显.
