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C型趋化因子XCL1研究进展
C型趋化因子家族唯一成员XCL1,又称淋巴趋化因子,主要由CD8+T细胞和自然杀伤细胞产生.XCL1具有独特的序列特征以及两种可相互转换的蛋白空间构象,使得XCL1有别于其他趋化因子并发挥独特的功能.XCL1特异性受体XCR1是G蛋白偶联受体家族成员,二者相互作用不仅在胸腺的阴性选择和建立自身免疫耐受中发挥重要作用,而且能启动交叉抗原递呈并介导细胞毒性免疫反应.XCL1不仅能调节免疫系统平衡,维持肠道免疫稳态,而且与多种疾病相关,如自身免疫病、肾炎、结核和人类免疫缺陷病毒感染等.近年来证实XCR1选择性地表达在具有抗原递呈能力的CD8+DCs细胞上,引发许多XCL1相关应用研究并取得很好的效果,使得XCL1在黏膜免疫,抗肿瘤免疫治疗和靶向疫苗研制方面具有广阔的应用前景.
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乙型肝炎患者血清XCL1、IFN-γ与T细胞亚群的关系及临床意义
目的:探讨XCL1、γ干扰素的浓度变化与乙型肝炎慢性化的关系.方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清XCL1、IFN-γ的浓度;流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群;时间分辨荧光分析仪检测乙型肝炎抗原/抗体半定量指标;全自动生化仪检测肝功能.结果:(1)随着肝脏炎症程度的加重,血清中XCL1的含量逐渐增加.HBeAg+组与HBeAg-组比较,HBeAg+组血清XCL1浓度显著高于HBeAg-组(P<0.05);HBeAg-组血清IFN-γ浓度显著高于HBeAg+组(P<0.05).(2)血清XCL1浓度与CD4+T细胞含量呈负相关(r=0.336,P=0.017),IFN-γ浓度与CD8+T细胞含量呈正相关(r=0.319,P=0.024).结论:γ干扰素通过影响XCL1的表达促进乙型肝炎慢性化的形成与发展,XCL1参与了乙型肝炎慢性化进程.
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C家族趋化因子XCL 1增强CVB3基因疫苗的抗病毒免疫应答及保护作用
为提高以往构建的基因疫苗pcDNA3.1-VP1的抗B3型柯萨奇病毒(CVB3)感染的免疫效果,以编码C家族趋化因子XCL1的质粒pcDNA3.1-XCL1共注射,观察诱导的CVB3特异性免疫应答及CVB3病毒性心肌炎预防效果.将两种质粒各50μg混合后分别于0、2、4、6周肌注免疫小鼠4次,末次免疫后4周分别以5×LD50剂量CVB3攻击小鼠观察保护率,或以3×LD50剂量CVB3感染小鼠观察病毒性心肌炎的诱生.结果显示,与单纯pcDNA3.1-VP1质粒相比,XCL1质粒共注射可增强血清CVB3特异性IgG以及特异性CTL应答.5×LD50病毒攻击后,共注射组体重降低7.28%,而pcDNA3.1-VP1组体重降低10.97%;共注射组28 d保护率达40%,高于pcDNA3.1-VP1组的30%.3×LD50病毒感染后心肌组织病理显示,共注射组心外膜下仅有轻微炎症,心肌内未见炎症细胞浸润,而pcDNA3.1-VP1组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内有少量炎症浸润和坏死灶.提示XCL1质粒共注射可增强CVB3特异性体液和细胞免疫应答及抗病毒保护,可有效预防病毒性心肌炎的发生.
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猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定
目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响.方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况.再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响.结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800.重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应.结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料.
关键词： XCL1 纯化蛋白 多克隆抗体 间接ELISA:MTT
