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小鼠对乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗免疫应答
目的:探讨含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的免疫应答.方法:以乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗pcHBV-CD80(含CMV启动子、HBV-preS2片段、HBV-C片段和CD80)、pcHBV(含CMV启动子、HBV-preS2片段、HBV-C片段),以及质粒pcDNA-CD80、pcDNA3.1和生理盐水,im免疫小鼠2次(间隔2 wk),末次接种后2 wk时检测特异性抗体、γ-IFN水平和淋巴细胞转化率.结果:质粒pcHBV-CD80和pcHBV免疫后均可检测到特异性的抗体,抗-preS2在pcHBV-CD80组和DcHBV组分别为1 5125.52 nkat/L和14463.56 nkat/L;抗-HB c在pcHBV-CD80组和DcHBV组分别为7607.35 nkat/L和7711.21 nkat/L,两组间无明显差异;但p cHBV-CD80更能增加γ-IFN的产生(1266.7 ng/L vs 986.3 ng/L,P＜0.01),并增强免疫小鼠的激淋巴细胞转化.结论:含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗可诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答.
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026 多价小基因DNA疫苗诱导免疫应答的定量定性分析
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NCAM L1小基因模型的建立及其剪接模式研究
目的:建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型.方法:以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段,并将其克隆至真核表达载体中,构建小基因的质粒.在此基础上,用NCAM L1小基因模型转染HeLa、COS-1、PFSK及R28细胞,并用RT-PCR进行被剪接的小基因产物的半定量检测.结果:NCAM L1小基因在4种细胞中的剪接模式不同,在PFSK以及Hela细胞中,存在2种剪接亚型,而在COS-1以及R28细胞中只有一种剪接亚型存在.结论:所构建的NCAM L1小基因可用于细胞水平的基因剪接分析.
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乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的构建与鉴定
目的 采用基因重组技术,将乙肝病毒4段小基因与协同刺激分子CD80基因嵌合,构建成嵌合乙肝小基因DNA疫苗.方法 ①根据文献选择和设计HBV的一段pres2、三段core表位编码小基因,以人工合成DNA片段P1～P10,通过退火、连接成为含约170bp的嵌合基因,用HindⅢ酶切;②提取和纯化pcDNA3-CD80,用HindⅢ酶切和去磷酸化;③将酶切小基因定向插入pcDNA3-CD80载体的Hind Ⅲ位点之间,构建成pcHBV-CD80小基因质粒;④pcHBV-CD80转入E.coli JM109扩增、提取质粒,测序鉴定.结果 ①各DNA小片段经退火、连接,成功嵌合为一大小约170bp之目的 基因;②pcDNA3-CD80提取、酶切均成功;③170bp之目的 基因定向克隆到载体上,构建了重组质粒pcHBV-CD80,经测序鉴定均构建正确.结论 乙肝病毒小基因与协同刺激分子CD80嵌合DNA疫苗构建成功.
