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TK基因联合GCV治疗胃癌的实验
胃癌是威胁人类常见的恶性肿瘤之一[1],目前的治疗方法主要是手术和化疗.但对中晚期胃癌的疗效却欠理想[2].基因治疗为恶性肿瘤的治疗开辟了新的途径[3].自杀基因(suicide gene)为目前研究较多的基因.TK基因(单纯疱疹病毒胸苷激酶基因herpes simplxvirus-thymidinekinase,HSV-TK)即为自杀基因之一,它能将其作用的前药9-丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)转化为磷酸化GCV,干扰细胞DNA合成,导致转基因细胞的死亡.
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HSVtk/GCV体外诱导人大肠癌LoVo细胞凋亡
目的探讨HSVtk/GCV系统在体外诱导LoVo细胞凋亡.方法用逆转录病毒转染LoVo细胞获得阳性克隆,以GCV(10μmol@L-1)作用,经光镜、电镜和荧光显微镜观察各组细胞凋亡情况.HSVtk+/LoVo细胞经GCV(10μmol@L-1)作用0 h～48 h不等,荧光显微镜观察计数计算其凋亡率,并用流式细胞仪检测细胞周期.结果通过光镜、电镜和荧光显微镜观察到实验组HSVtk+/LoVo细胞凋亡情况,HSVtk+/LoVo细胞分别经GCV(10bμmol@L-1)作用0,12,24,36,48 h,凋亡率随时间的增加而升高.作用24 h后凋亡率低于0.3,48 h升至0.925.经流式细胞仪检测GCV作用后的肿瘤细胞,细胞周期变化明显,G0/G1期细胞从0.31上升到0.42,S期细胞从0.62下降到0.39.结论 HSVtk/GCV系统可诱导LoVo细胞凋亡,且存在时间效应,GCV可抑制细胞DNA的合成,阻止细胞由G1期向S期转化.
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逆转录病毒载体介导的HSVtk基因联合5-FU治疗实验性大肠癌
目的研究体内外联合应用HSVtk/GCV系统和5-FU治疗大肠癌的疗效.方法用逆转录病毒转染人大肠癌LoVo细胞,MTT法观察GCV联合5-FU对LoVo细胞的杀伤作用.通过裸鼠皮下注射HSVtk+/LoVo细胞建立人大肠癌肿瘤模型,应用GCV和(或)5-FU治疗后测量肿瘤体积计算肿瘤生长抑制率,并用HE染色观察有无器官毒副作用.结果体外实验MTT法显示HSVtk/GCV系统联合5-FU对LoVo细胞的杀伤作用较GCV组明显增强(P＜0.05),体内实验表明联合治疗组肿瘤体积为(348±68)mm3大小,明显小于其他各组(P＜0.01),HE染色未观察到各器官病理改变.结论联合应用HSVtk/GCV系统和5-FU能提高HSVtk/GCV系统治疗大肠癌的疗效,且没有明显的毒副作用.
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慢病毒转染自杀基因后联合更音洛韦治疗卵巢上皮性癌的实验研究
目的探讨以抗Ⅰ型粘蛋白单链抗体(anti-MUC1)为靶向的慢病毒高效转染自杀基因后联合更昔洛韦(GCV)对Ⅰ型粘蛋白阳性(MUC1+)卵巢上皮性癌细胞的靶向性基因治疗.方法包装以anti-MUC1为靶向的慢病毒,介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转染卵巢上皮性癌细胞株SKOV3(MUC1+)及正常成纤维细胞GF(MUC1-),荧光显微镜下观察转染效果.聚合酶链反应(PCR)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术鉴定HSV-tk基因在靶细胞(SKOV3及GF)中的整合转录结果.光学显微镜观察GCV作用后细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定GCV的体外杀伤效应.结果荧光显微镜下观察到以anti-MUC1为靶向的慢病毒可有效转染SKOV3细胞,PCR、RT-PCR均证明HSV-tk基因已在靶细胞SKOV3中整合且转录表达;而在GF细胞中未见HSV-tk基因的整合及转录表达.光学显微镜下观察到HSV-tk基因转录后的细胞在GCV作用后出现明显形态变化;MTT法显示GCV对转染HSV-tk基因后的SKOV3细胞有显著杀伤作用,其半数抑制浓度为0.10 mg/L.结论以anti-MUC1为靶向的慢病毒可将HSV-tk基因高效、靶向性转染MUC1+卵巢上皮性癌细胞,联合应用GCV可高效、靶向性杀伤MUC1+卵巢上皮性癌细胞.
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更昔洛韦治疗男性尖锐湿疣90例临床观察
[目的]评价更昔洛韦治疗尖锐湿疣的疗效.[方法]治疗组47例采用二氧化碳激光烧灼法治疗后,静脉点滴更昔洛韦每日1次,每次0.25 g,共7～10 d;对照组43例采用二氧化碳激光治疗.[结果]治疗组治愈率为89%,对照组治愈率为51%,两组治愈率间有显著性差异.[结论]更昔洛韦对治疗尖锐湿疣有效果.
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儿童流行性腮腺炎脑炎30例临床诊疗分析
目前,流行性腮腺炎仍然是儿童常见的急性传染病之一, 而且经常可以引起多系统多脏器的损害.近年来,因城市流动人口的增加,发病有明显上升的趋势.腮腺炎脑炎是儿童流行性腮腺炎常见的并发症,早期进行积极的抗病毒和对症治疗预后良好,如诊断不及时可延误治疗,导致中枢神经系统严重损害,甚至危及生命[1].现就我院近年来诊治的儿童流行性腮腺炎并发腮腺脑炎30例的临床分析,汇报如下.1 临床资料
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丙氧鸟苷对转TK基因的人外周血单个核细胞的毒性作用
目的探讨减少异体干细胞移植中移植物抗宿主病(GVHD)，同时大限度提高移植物抗白血病(GVL)效应的有效方法. 方法采用逆转录病毒介导的基因转移方法将Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因及抗新霉素(NeoR )基因插入人外周血单个核细胞(PBMC)，MTT法测定丙氧鸟苷(GCV)对转化细胞抑制率. 结果转化细胞表达GFP，且主要为T淋巴细胞，占11.4％,而且被转化的T淋巴细胞中, CD4阳性细胞转化率较高,占7.6 %, CD8, CD19, CD33阳性细胞转化率分别为2.9%,2.1%和4.7%. PCR鉴定表明，转染的人外周血单个核细胞DNA中整合有NeoR基因. MTT法测定丙氧鸟苷(GCV)对转化细胞与未转化细胞抑制率，显示转化细胞生长明显受抑. 结论异体干细胞移植后，如产生严重GVHD应用GCV选择性清除HSV－TK基因转导的T淋巴细胞,使控制GVHD已成可能.
