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不同温度停循环的脑损伤评估及机制研究
目的 深低温停循环(deep hypothermic circulatory arrest,DHCA)应用于主动脉弓和复杂先心病手术,停循环为手术提供无血视野,降温到一定程度以保护脏器.DHCA术后神经系统并发症较高,而不同程度的低温停循环对脑造成的影响与机制目前还未完全明确.方法 20只SD大鼠随机分为4组:深低温停循环组(15-20℃)、中低温停循环组(20-25℃)、浅低温停循环组(25-30℃)和假手术组,术后收集血样、脑组织,并分离海马组织.HE染色后评估神经元损伤情况.免疫组化观察各组HIF-lα的表达与分布.Elisa法测定血浆S100β浓度.Western blot检测各组海马组织凋亡相关蛋白Casepase3、Bax和Bcl-2表达量.结果 HE染色观察3组低温停循环组海马CA1区均有损伤表现,但组间无明显差异.HIF-1α阳性表达率、Casepase3、Bax和Bcl-2表达量,以及血浆S100β组间均无统计学差异.结论 不同程度的低温后停循环带来大鼠脑组织损伤,但严重程度并不和温度呈线性关系,这表明低温对脑组织缺血再灌注损伤的影响有着较为复杂的机制.
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胃癌组织HIF-lα与MMP-2的表达及临床病理 意义分析
目的 探讨胃癌组织中HIF-lα与MMP-2的表达并分析其临床病理意义.方法 选取2012年1月～2016年12月在本院进行治疗的60例胃癌患者作为研究对象,采取免疫组化SP二步的方法检测患者胃癌组织中HIF-lα与MMP-2表达的情况,对数据进行统计并分析HIF-lα、MMP-2和胃癌患者相关临床病理因素的关系,进一步分析HIF-lα和MMP-2之间表达的相关性.结果 HIF-1α在胃癌组织中的阳性表达率为56.7％,MMP-2在胃癌组织中的阳性表达率为51.7％,HIF-lα和MMP-2的阳性表达率和肿瘤细胞的分化程度及临床分期有关(P<0.05);其中HIF-1α的表达和肿瘤的直径有关(P<0.05);而MMP-2的阳性表达率和胃癌淋巴结的转移有关(P<0.05);在胃癌组织中HIF-1α和MMP-2的阳性表达率为正相关性(r=0.236,P<0.05).结论 HIF-1α、MMP-2和胃癌组织的侵袭、转移呈现密切相关,并且HIF-1α、MMP-2的表达有一定程度的协同作用.
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17-DMAG 对缺氧肿瘤细胞的辐射敏感性影响
目的 研究17-DMAG对缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导的人宫颈癌HeLa细胞的辐射敏感性影响.方法 首先应用不同浓度的CoCl2处理HeLa细胞24h,采用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达量,然后选取浓度为200μ mol/L的CoCl2对Hela细胞进行模拟缺氧处理24 h,应用不同浓度的17-DMAG预处理细胞16h后,接受2、4、6、8Gy不同剂量的射线照射,采用克隆形成实验观察细胞的存活率,应用 Western blot技术检测 HIF-1α蛋白表达.结果 在 CoCl2浓度为200μmol/L时HIF-1a蛋白表达量强;不同浓度17-DMAG处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率差异均有高度统计学论(均P＜0.01);17-DMAG预处理缺氧HeLa细胞后,HIF-1a蛋白表达随药物浓度增加受到显著抑制.结论 17-DMAG 预处理可增加缺氧细胞辐射敏感性,其机制可能是通过抑制HIF1a 蛋白表达而发挥作用.
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低氧条件下γ射线对Hep-2细胞周期、凋亡的影响
目的 体外建立不同氧供状态下的细胞模型,探讨不同剂量60Coγ射线对喉鳞癌Hep-2细胞周期及凋亡的影响.方法 将体外培养的人喉鳞癌Hep-2细胞分为两组:A组(常氧组)、B组(低氧组),两组细胞分别接受1、3、5、10、20、40(Gy)不同剂量60Coγ射线照射,两组分别设0Gy对照组.流式细胞仪检测HIF-1α蛋白表达、细胞凋亡及细胞周期变化;免疫细胞化学检测各组细胞HIF-1α蛋白表达.结果 A组Hep-2细胞在接受1～5Gyγ射线照射后,主要发生了G0/G1期阻滞,在接受10～40Gyγ射线照射后,发生了G2/M期阻滞;B组细胞主要发生了G2/M期阻滞.B组0Gy对照组发生了明显的G0/G1期阻滞;A组Hep-2细胞凋亡曲线成抛物线状,凋亡率呈现明显的剂量依赖性,在5Gy处出现大值41.56±2.25.B组细胞凋亡率同A组相比总体上呈现明显的下调趋势,但不同剂量的γ射线没有对Hep-2细胞的凋亡率产生明显的影响.结论 不同剂量60Coγ射线照射会导致常氧条件下Hep-2细胞发生不同周期阻滞,而不同的周期阻滞会对Hep-2细胞的凋亡产生明显的影响.低氧条件下γ射线照射未能导致Hep-2细胞发生明显的凋亡,可能同Hep-2细胞G2/M期阻滞有关,而HIF-1a蛋白的表达上调可能是Hep-2细胞G2/M期阻滞的原因之一.
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HIF-1α、IGF-1在人脑胶质瘤中的表达及意义
目的探讨HIF-lα蛋白与IGF-1蛋白在人脑胶质瘤中的表达及两者之间的相关性.方法采用免疫组织化学SABC法检测HIF-lα、IGF-1表达蛋白在45例胶质瘤及10例正常脑组织中的表达.结果 HIF-lα蛋白在10例正常脑组织中无表达,在45例胶质瘤中28例表达阳性,占62.2%,Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级间的表达有显著性差异(P<0.05).IGF-1蛋白在10例正常脑组织中无表达,在45例胶质瘤中28例表达阳性,占62.2%,Ⅰ-Ⅱ级和Ⅲ-Ⅳ级间表达有显著性差异(P<0.01).胶质瘤组织HIF-lα蛋白表达与IGF-1蛋白表达密切相关(γs=0.768,P<0.01).结论 HIF-lα蛋白异常表达与胶质瘤的发生有关,而IGF-1可能作为HIF-lα除缺氧以外的另一外诱导因素在HIF-lα促胶质瘤的发生过程中起重要作用.
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缺氧环境下HSulf-1,HIF-1α在HaCaT细胞中的表达及HSulf-1过表达载体的构建
目的 探讨HSulf-1,HIF-lα在缺氧时人角质形成细胞株HaCaT细胞中的表达并构建HSulf-1基因过表达载体.方法 Western blot法检测不同缺氧浓度下HaCaT细胞中HSulf-1,HIF-1α蛋白的表达;构建重组质粒pCDH-HSulf-1;Western blot法筛选HSulf-1过表达稳转HaCaT细胞株.结果 HSulf-1在缺氧条件下低表达,与HIF-1α表达呈负相关;成功筛选过表达HaCaT稳定细胞株.结论 HSulf-1低表达,与肿瘤细胞或肿瘤组织中表达一致,过表达可抑制肿瘤细胞增殖.推测过表达HSulf-1可能抑制角质形成细胞的增殖,构建HSulf-1基因过表达载体,便于进一步体内外研究与角质形成细胞增殖的影响.
