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过氧钒烟酸络合物(POR)逆转Zucker肥胖大鼠胰岛素抵抗的作用
目的探讨过氧钒烟酸络合物(POR)对胰岛素抵抗的逆转作用,POR促进葡萄糖摄取与胰岛素促进作用在机制上的异同.方法以皮下渗透式输注POR,观察POR对Zucker大鼠胰岛素抵抗的缓解作用,检测POR对具有胰岛素严重抵抗的Zucker肥胖大鼠睾丸脂肪垫脂肪细胞对葡萄糖摄取的促进作用,以及对PL-3KP110亚单位酪氨酸磷酸化的影响,比较POR和胰岛素促进GLUT4的转位对PI-3K的依赖性.结果 POR可以使肥胖伴胰岛素抵抗大鼠的空腹血糖明显降低,对糖负荷的处理能力明显提高;GTT曲线下胰岛素的水平明显降低,提示对胰岛素的敏感性提高.葡萄糖载体的转位水平与PI-3K活性并不平行,胰岛素促进的葡萄糖摄取作用对PI-3K有依赖性,过氧钒络合物(POR)对葡萄糖载体转位的促进作用不依赖于PI-3K,表现为POR促进的葡萄糖摄取下被PI-3K抑制剂(Wortmannin)抑制.结论 POR在1/10钒酸盐剂量下能逆转Zucker大鼠的胰岛素抵抗,胰岛素对葡萄糖载体的激活作用是PI-3K依赖性的,而过氧钒(POR)则可通过其他途径激活葡萄糖载体,具体机制可能与载体的直接激活有关.
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I类PI3Ks对中性粒细胞活化在急性肺损伤发病中的作用
中性粒细胞肺内的大量浸润是急性肺损伤的主要病理特征之一,它能清除病原微生物等有害物质而发挥保护肺组织的作用,但若中性粒细胞大量的肺内浸润和过度的活化则可损伤肺组织,此负面作用在急性肺损伤的发生和发展中有重要的意义;磷酸肌醇-3激酶的信号转导途径在调节急性肺损伤患者中性粒细胞的细胞因子表达、呼吸爆发、趋化及凋亡有重要的作用.故了解其作用机制可能会从细胞分子水平为急性肺损伤的防治开辟新的途径.
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芪桂益脉灵对大鼠缺血再灌注损伤心肌组织PI-3Kp85a mRNA、AKT2mRNA表达的影响
目的:探讨芪桂益脉灵(QGYML)对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织PI-3Kp85a(磷酸肌醇-3激酶)、AKT2(丝氨酸-苏氨酸激酶)mRNA的影响.方法:取SD大鼠50只,随机分为5组,正常组、假手术组、模型组、芪桂益脉灵低剂量组和芪桂益脉灵高剂量组,分别给予生理盐水、QGYML 0.6、1.2 g/kg灌胃,每天1次,连续灌胃7d.处死大鼠,取心尖部缺血组织,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定PI-3Kp85a mRNA、AKT2mRNA的表达.结果:与正常组、假手术组比较,模型组大鼠心肌组织PI-3Kp85a mRNA、AKT2mRNA表达明显减弱,芪桂益脉灵组PI-3Kp85a mRNA、AKT2m RNA表达明显增强,与模型组比较具有统计学意义(P＜0.05),高剂量组的效果更加显著.结论:芪桂益脉灵可显著提高大鼠缺血再灌注损伤心肌组织PI-3Kp85a mRNA、AKT2mRNA的表达水平,对心肌具有保护作用.
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桑叶总黄酮对1型糖尿病小鼠肾间质纤维化的防治作用及机制
目的 观察桑叶总黄酮对1型糖尿病小鼠肾间质纤维化的防治作用及其可能机制.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)150 mg·kg-1制备糖尿病小鼠模型,造模成功后分为模型组、桑叶总黄酮低(0.25 g·kg-1)、中(0.5 g·kg-1)、高(1 g·kg-1)剂量组各10只,另设正常对照组8只.每日灌胃1次,连续给药12周后,测定各组小鼠空腹血糖(FBG)、血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(mAlb);Masson染色、天狼星红(Sirus red)染色以及IV型胶原蛋白(collagen Ⅳ)免疫组织化学染色检测小鼠肾皮质中胶原蛋白表达;层黏连蛋白(laminin)染色评估小鼠肾小球及肾小管基底膜的增厚程度.Western blot 检测小鼠肾皮质中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及信号通路PI3K/Akt/mTOR的相关蛋白表达.结果 中、高剂量的桑叶总黄酮能够明显降低糖尿病小鼠血糖、血清肌酐、尿素氮及尿微量白蛋白水平,并通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活,增加上皮型标志物E-cadherin,降低间质型标志物α-SMA的蛋白表达,改善肾脏组织的病理形态变化.结论 中、高剂量桑叶总黄酮能减轻1型糖尿病小鼠肾间质纤维化水平,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活有关.
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精神分裂症患者PI3K-AKT基因表达水平与临床症状的关系
目的 探讨急慢性精神分裂症患者外周血淋巴细胞磷酸肌醇-3激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)的mRNA表达水平及其与临床症状的关系.方法 以qRT-PCR技术检测急性精神分裂症组(24例)、长期服药(氯氮平)慢性精神分裂症组(19例)和对照组(20例)外周血淋巴细胞中PI3K亚单位β(PI3KCB)、AKT1的mRNA表达水平,同时用PANSS量表对精神分裂症患者的阳性和阴性症状进行评定,并采用Spearman分析二者的相关性.结果 急性精神分裂症组、长期服药慢性精神分裂症组、对照组样本外周血淋巴细胞中PI3KCB的基因表达水平分别为(0.79±0.04)、(0.83±0.08)、(0.87±0.09),三组比较差异有统计学意义(F=8.77,P=0.001);AKT1的基因表达水平分别为(0.80±0.03)、(0.27±0.13)、(0.29±0.12),三组比较差异有统计学意义(F=302.31,P＜0.01);急性精神分裂症患者的PI3KCB mRNA水平明显低于健康对照组(MD=0.09,P=0.002),急性精神分裂症患者的AKT1 mRNA水平显著高于慢性精神分裂症患者的水平(MD=0.53,P＜0.01)和健康对照者的水平(MD=0.51,P＜0.01),未在两组精神分裂症患者中发现PI3KCB、AKT1的表达水平与PANSS评分之间的相关性.结论 PI3K-AKT途径的基因表达状态在急慢性精神分裂症患者有显著差异,但与临床症状无显著相关性,且氯氮平治疗可能影响其基因表达水平.
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醛固酮通过PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路促进系膜细胞增殖
目的 探讨氧化应激依赖的表皮生长因子受体(EGFR)活化在醛固酮(ALDO)诱导的磷酸肌醇-3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路活化及系膜细胞增殖中的作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western印迹法检测EGFR、PI3K、Akt、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核糖体蛋白p70S6激酶1(p70S6K1)磷酸化.结果 (1)ALDO可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式促进肾小球系膜细胞ROS产生,100 nmol/L ALDO刺激3 min,ROS产生即显著增加,刺激60 min达到高峰;1、10和100nmol/L ALDO刺激60 min,ROS产生分别是对照组的1.50、1.70和2.14倍.抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)能阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖.(2)ALDO可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式诱导肾小球系膜细胞EGFR磷酸化,100 nmol/L ALDO刺激5 min,EGFR磷酸化显著增强,刺激60 min达到高峰;1、10和100 nmol/L ALDO刺激60 min,EGFR磷酸化分别是对照组的2.29、3.55和5.25倍.NAC和盐皮质激素受体(MR)阻断剂依普利酮能显著抑制ALDO诱导的EGFR磷酸化.而EGFR特异性抑制剂AG1478能完全阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖.(3)100 nmol/L ALDO刺激60 min能显著增加PI3K、Akt、mTOR和p70S6K1磷酸化,其增加倍数分别为对照组的4.35、5.38、3.85和3.57倍,应用NAC和AG1478能阻断ALDO诱导的P13K、Akt、mTOR和p70S6K1磷酸化.(4)PI3K抑制剂LY294002、Akt抑制剂以及mTOR抑制剂雷帕霉素能显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖,其抑制率达到50%～55%.结论 ALDO通过氧化应激依赖的EGFR磷酸化促进肾小球系膜细胞PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路活化及细胞增殖.
