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白藜三醇对人脐静脉内皮细胞血管生成的影响及其可能机制
目的：探究白藜三醇（Res）对正常状态下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成的影响及其可能机制。
方法：体外培养HUVEC，实验分为：DMEM高糖（<4500 mg/L）培养基培养组（正常组）、白藜三醇组（药物组）、白藜三醇+磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）阻断剂组（LY294002，药物阻断剂组1）、LY294002组（阻断剂组1）、白藜三醇+NG-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐组（一氧化氮合酶阻断剂L-NAME，药物阻断剂组2）、L-NAME组（阻断剂组2），其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶阻断剂。采用CCK-8法检测细胞增殖情况；免疫印迹（Western blot）法检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（p-eNOS）蛋白的表达；亚硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）的水平；迁移小室（transwell chamber）检测内皮细胞的迁移能力；小管形成实验检测内皮细胞的体外小管形成能力。
结果：①药物组（1、5μmol/L）与正常组相比细胞增殖增加（P<0.01）；药物组（5μmol/L）与药物组（0.2、10、20μmol/L）相比细胞增殖增加（P<0.01）；药物组（20μmol/L）对细胞增殖有抑制作用（P<0.01），差异均有统计学意义。②药物组（5μmol/L ）较正常组p-Akt、p-eNOS蛋白表达增加（P<0.05~0.01），NO水平增加（P<0.05），差异均有统计学意义；药物阻断剂组1 p-Akt、p-eNOS蛋白表达与药物组比较均减低（P均<0.01），NO水平减低（P<0.05）；药物阻断剂组1（5μmol/L）较阻断剂组1 p-Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO差异均无统计学意义（P均>0.05）。③细胞迁移及小管形成实验：药物组（5μmol/L）内皮细胞迁移率及体外小管形成数量大于正常组（P<0.01），药物阻断剂组2内皮细胞迁移率及体外小管形成数量小于药物组（P<0.01）。
结论：白藜三醇可能通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路诱导正常状态下内皮细胞NO水平的增加，从而促进内皮细胞增殖、迁移及体外小管形成。关键词： 白藜三醇 磷酸化蛋白激酶B 磷酸化内皮型一氧化氮合酶 一氧化氮 血管生成 -
雄激素调控大鼠阴茎海绵体组织中eNOS表达的分子机制
目的:研究雄激素是否通过蛋白激酶B-3(AKT3)、Ⅰ类磷脂酰肌醇-3-激酶的p110催化亚单位(PIK3CA)、钙调蛋白(CALM)、小窝蛋白1(CAV1)调控大鼠阴茎海绵体组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达,并影响阴茎勃起功能. 方法:8周龄健康雄性SD大鼠36只,随机均分为6组:4周对照组(A组)、6周对照组(B组)、4周去势组(C组)、6周去势组(D组)、4周去势+睾酮(T)替代组(E组)、6周去势+T替代组(F组).C、D、E、F组切除双侧睾丸及附睾,1d后E、F组隔日1次丙酸睾酮3 mg/kg皮下注射,其余各组等量植物油皮下注射.4周后(A、C、E组)、6周后(B、D、F组)分别检测各组大鼠海绵体内压(ICPmax)/平均动脉压(MAP)、血清T,通过免疫组化法及Western印迹法分别测定eNOS、P-eNOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1在各组大鼠阴茎海绵体中的表达. 结果:各组实验大鼠体重、MAP无显著差异.血清T值和ICPmax/MAP比值:去势组(C、D组)较对照组(A、B组)及去势+T替代组(E、F组)极显著降低(P均＜0.01),且去势6周组(D组)较去势4周组(C组)显著降低(P均＜0.05),去势+T替代组(E、F组)及对照组(A、B组)各组间无显著差异.免疫组化结果显示:eNOS、P-eNOS主要表达在血管内皮细胞胞膜和海绵窦血管腔内;AKT3、PIK3 CA、CALM、CAV1主要表达于血管内皮细胞胞质和胞膜,少数表达于平滑肌细胞.eNOS、P-eNOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1 Western印迹结果显示:去势组(C、D组)与对照组(A、B组)、去势+T替代组(E、F组)相比极显著降低(P均＜0.01),去势+T替代组(E、F组)与对照组(A、B组)相比无显著差异,且6周去势组(D组)比4周去势组(C组)表达显著降低(P均＜0.05),6周去势+T替代组(F组)与4周去势+T替代组(E组)相比无显著差异,6周对照组(B组)与4周对照组(A组)相比无显著差异. 结论:雄激素可能通过上调AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1蛋白的表达,磷酸化eNOS后激活eNOS,促进勃起;然而,确切的机制还应该采用AKT3、PIK3 CA、CALM、CAV1等的阻滞剂或者激活剂,以及采用基因转染或者基因敲除等方法,进一步明确分子机制.
