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ADAM33基因位点单核苷酸多态性与山东地区支气管哮喘患者的相关性
支气管哮喘(简称哮喘)是一种受环境因素和遗传因素双重影响的疾病,与多基因遗传有关.解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)基因是近年来新发现的ADAM家族成员,与气道高反应性和哮喘密切相关[1].本研究中应用现代分子生物学方法,对ADAM33基因F+1、S2、T2和V4位点多态性进行检测,旨在了解ADAM33基因单核苷酸多态性(SNP)与哮喘的相关性,从而在分子水平探索遗传因素在哮喘发病中的作用.
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解整合素-金属蛋白酶33基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的关系
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是以不完全气流受限呈进行性发展为特征的一种可以预防和治疗的疾病.其发病机制复杂,不仅与外界有害气体、粉尘等环境因素有关,还与多基因遗传有关.本研究通过对可能涉及COPD发病的解整合素-金属蛋白酶( ADAM) 33基因中4个位点(T1、S1、Q-1、S2)的单核苷酸多态性(SNPs)进行分析,探讨其多态性与COPD的关系,为COPD防治提供科学依据.
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重叠延伸PCR法构建人肿瘤坏死因子前体水解酶系列突变重组体及稳定转染HeLa细胞株的建立
目的 构建人肿瘤坏死因子前体水解酶(TACE)系列真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染的HeLa细胞系.方法 以THPl细胞eDNA为模板,PCR扩增人TACE基因的全长eDNA编码区序列,将其插入pMD18T载体中,构建出pMD18T-FL-TACE载体.在此基础上,应用重叠延伸PCR扩增出缺失解整合素区的TACE重组cDNA和缺失酶区的TACE重组cDNA,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体plRES2.0-EGFP中,同时TACE全长也构建入pIRES2.0-EGFP,这3种真核表达载体经酶切和测序鉴定后,用脂质体法转染HeLa细胞,经过G418筛选,获得稳定转染的HeLa细胞株,采用RT-PCR、Western blot及荧光法检测表达.结果 成功构建了pIRES2.0-EG-FP/FL-TACE、plRES2.0-EGFP/dis△-TACE、plRES2.0-EGFP/met△-TACE真核表达载体,并建立了稳定转染的HeLa细胞株,成功地表达了目的基因.结论 真核表达载体的构建和稳定转染HeLa细胞株的建立为进一步研究TACE功能奠定了必要的实验基础.
关键词: 人肿瘤坏死因子前体水解酶 解整合素 真核表达载体 重叠延伸PCR 转染