首页 > 文献资料
-
血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响
目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶表达的影响,初步探讨在高血压中,AngⅡ导致纤维化病变形成的作用机制.方法 选择体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度AngⅡ作用24 h后,采用实时定量PCR和Western blot法,检测各组细胞弗林蛋白酶mRNA及蛋白的表达量;用荧光分析法检测各组弗林蛋白酶的活性.本实验共分为5组:对照组、AngⅡ 10-7 mol/L组、AngⅡ10-6mol/L组、AngⅡ10-5 mol/L组、AngⅡ10-4 mol/L组.结果 与对照组比较,不同浓度AngⅡ组弗林蛋白酶mRNA表达量及活性均明显升高,AngⅡ10-5 mol/L组和AngⅡ10-4 mol/L组升高更明显,AngⅡ10-4 mol/L组达到大值(P＜0.05,P＜0.01).结论 AngⅡ能够促进大鼠VSMCs中弗林蛋白酶的表达,AngⅡ可能通过促进弗林蛋白酶的表达,使活性转化生长因子β产生增加从而促进纤维化病变的影成.
-
弗林蛋白酶在宫颈上皮内瘤变中的表达研究
目的 探讨弗林蛋白酶(furin)在正常宫颈组织与宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达水平及其与CIN病理分级的关系.方法 选取2015年7月至2016年7月,于唐山市妇幼保健院妇科门诊进行阴道镜下宫颈活组织病理学检查,并确诊为CIN的68例患者为研究对象,纳入CIN组.选取同期宫颈液基细胞学检查结果为非典型鳞状细胞,于本院妇科门诊进行阴道镜下宫颈活组织病理学检查,而确诊为正常子宫颈的20例受试者,纳入对照组.采集2组受试者宫颈组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测其furin mRNA相对表达水平,Western blotting法检测furin相对表达水平.对2组受试者宫颈组织furin mRNA及furin相对表达水平、furin阳性表达率进行统计学比较.本研究遵循的程序符合唐山市妇幼保健院伦理委员会制定的标准,得到该伦理委员会批准,并与所有受试者均签署临床研究知情同意书.2组受试者的年龄等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结果 ①CIN组受试者宫颈组织furin mRNA相对表达水平为1.59±0.74,显著高于对照组的0.63±0.08,2组比较,差异有统计学意义(t=2.51,P=0.004).②CIN组受试者宫颈组织furin相对表达水平为1.29±0.54,显著高于对照组的0.15±0.04,2组比较,差异有统计学意义(t=2.09,P=0.015).③CIN组受试者宫颈组织furin阳性表达率为63.2％(43/68),显著高于对照组的15.0％(3/20),2组比较,差异有统计学意义(χ2=14.41,P<0.001).在CIN组CIN1～3宫颈组织及对照组正常宫颈组织中,furin阳性表达率分别为31.6％(6/19)、65.2％(15/23)、84.6％(22/26)及15.0％(3/20),furin阳性表达率随着CIN病理分级增高而增高,并且差异有统计学意义(χ2=26.56,P=0.003).结论 Furin可能参与了CIN的发生、发展,其高表达可能是反映CIN的早期指标.Furin有望成为早期预测CIN的分子标志物.
-
炭疽毒素PA在E.coli中的表达、纯化及其生物活性分析
目的:构建pET-32a(+)-PA重组质粒,实现融合蛋白Trx-PA在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中的表达,并获得有生物学活性的PA.方法:采用PCR的方法扩增PA的编码序列,并且与pET-32a(+)载体的Trx编码区融合产生pET-32a(+)-PA重组质粒,将重组质粒转化至感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达pET-32a(+)-PA,通过SDS-PAGE和Western印迹进行分析.利用Ni2+金属亲和层析纯化表达产物,通过梯度透析进行复性.通过蛋白酶降解和细胞毒性实验分析Trx-PA的生物学活性.结果:成功构建pET-32a(+)-PA重组质粒,并纯化了Trx-PA融合蛋白.SDS-PAGE分析表明融合蛋白相对分子质量大小正确,经纯化复性后,蛋白纯度达到76%.Trx-PA在体内和体外均能被弗林蛋白酶(furin酶)降解.Trx-PA的正确降解是致死因子(lethal factor,LF)进入小鼠巨噬细胞Raw264.7内并产生细胞毒性的基础.结论:重组Trx-PA融合蛋白能在E.coli BL21(DE3)中有效表达,并表现出生物学活性.
-
Furin和HPV联合检测在宫颈癌早期筛查中的应用
目的 观察蛋白前体转化酶Furin在慢性宫颈炎、各级宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中的表达差别,研究其作为宫颈癌早期筛查的临床意义.方法 按照常规方法提取研究对象180例宫颈各类病变组织中的蛋白,通过Western Blot检测Furin蛋白表达情况,并行人乳头状瘤病毒分型检测.结果 180例标本中,Furin蛋白阳性表达率为65.6％0,其中低级别子宫颈上皮内瘤变(CIN-L)组与慢性宫颈炎组比较差异有统计学意义(P＜0.05);低级别宫颈上皮内瘤变(CIN-L)组与CIN-H组比较差异有统计学意义(P＜0.05);高级别CIN-H组与CSCC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).180例人乳头状瘤病毒(HPV)组中,高危型HPV检出率为76.1％,低危型为12.2％.高危型HPV在慢性宫颈炎组、CIN组、CSCC组检出率逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05),其中CIN-IL组与CIN-H组比较差异无统计学意义(P＞0.05)、CIN-H组与CSCC组比较差异不显著(P＞0.05).结论 随着宫颈病变级别的升高Furin蛋白的表达呈增加趋势,有助于预测宫颈病变的进展情况,高危型HPV感染与Furin蛋白阳性表达呈正相关(P＜0.05),二者联合检测是宫颈癌早期筛查的理想手段.
-
肺腺癌中FURIN、 CEACAM6和MTA2的表达及意义
目的 探讨肺腺癌中弗林蛋白酶(FURIN)、癌胚抗原相关细胞黏附分子6(CEACAM6)和转移相关基因2(MTA2)蛋白的表达特征及临床意义.方法 收集96例肺腺癌术后组织蜡块及临床资料作为观察组,收集正常肺组织70例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中FURIN、CEACAM6和MTA2的表达.结果 FURIN、CEACAM6和MTA2在两组中表达的阳性率比较差异均有统计学意义(P＜0.05).观察组中FURIN、CEACAM6和MTA2的表达与肿瘤的大径、脉管浸润、TNM分期和Ki67的表达密切相关.观察组中FURIN和CEACAM6、FURIN和MTA2的表达均呈正相关性.结论 肺腺癌术后组织中FURIN、CEACAM6和MTA2高表达,三者对病变的进展有明显促进作用,FURIN对CEACAM6和MTA2可能有正向调节作用.
关键词： 肺肿瘤 腺癌 弗林蛋白酶 癌胚抗原相关细胞黏附分子6 转移相关基因2 -
宫颈癌组织中Furin和VEGF的表达研究
目的 研究蛋白前体转化酶Furin和血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈癌组织中的表达及临床意义.方法 收集2015年1月-2016年6月在唐山市妇幼保健院妇科因子宫良性肌瘤行子宫切除术的正常宫颈组织50例,妇科门诊活检或手术切除组织标本100例,采用常规方法提取正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织及宫颈癌组织中的蛋白,通过Western Blot检测Furin蛋白表达情况,并采用免疫组化SP法检测其VEGF的表达,分析两种因子与临床病理特征之间的关系.结果 在宫颈癌组、CIN组和正常宫颈组中,Furin的阳性表达率分别为74.0％、56.0％、16.0％,差异有统计学意义(P＜0.05);VEGF在正常宫颈组、CIN组及宫颈癌组中的阳性表达率分别为12.0％、48.0％、82.0％,差异有统计学意义(P＜0.05);其中Furin的表达与宫颈癌的临床分期有相关性(P＜0.05),而VEGF的表达与宫颈癌的临床分期、病理分级无相关性(P＞0.05).结论 Furin蛋白的高表达及VEGF的高表达可能在宫颈癌的发生、发展过程中起重要作用,两者联合检测有助于宫颈癌的早期诊断.
-
弗林蛋白酶与心血管活性物质关系的研究进展
弗林蛋白酶是真核生物中一种广泛参与前体蛋白切割的内切蛋白酶,对分泌途径中许多重要的多肽和蛋白的前体进行剪切加工,使之具有生物活性.在维持机体正常生理过程、参与疾病的病理过程中,弗林蛋白酶起着重要作用.部分心血管活性物质的活化也需要弗林蛋白酶的参与,对维持机体的血压平衡可能起着重要作用.
-
前体蛋白转化酶家族的重要成员之一:弗林蛋白酶
弗林蛋白酶(Furin)是前体蛋白转化酶家族的重要成员之一,广泛存在于各种组织和细胞系中.Furin经过两次自剪切去掉前肽后具有生理活性,能够识别特定的氨基酸序列并在TGN中对多种前体蛋白进行加工.Furin的作用底物不仅包括神经肽和肽类激素,还包括许多生长因子、受体、血浆蛋白酶、基质金属蛋白酶及细菌外毒素等,具有重要的生物学功能.
-
宫颈癌患者肿瘤组织中弗林蛋白酶的表达与临床病理因素及局部免疫功能的关系
目的 观察宫颈癌患者肿瘤组织中弗林蛋白酶的表达与肿瘤浸润、T淋巴细胞亚群的关系.方法 选取2014年1月至2015年12月收集的56例宫颈癌患者作为研究对象,检测患者肿瘤组织中弗林蛋白酶表达水平,并计数局部免疫细胞T淋巴细胞亚群:CD8+、CD4+、CD4 +/CD8+、颗粒酶B(granzyme B)+、CD134+及叉头翼状螺旋转录因子(forkhead box protein P3,FOXP3)+细胞.采用Spearman相关分析分析肿瘤组织中弗林蛋白酶表达水平与患者临床病理因素及肿瘤组织中CD8+、CD4+、CD4 +/CD8+、颗粒酶B+、CD134+及FOXP3+细胞计数的相关性.结果 患者年龄、肿瘤分化程度与弗林蛋白酶表达水平无显著相关性(P均＞0.05),国际妇产科联盟(FIGO)宫颈癌分期、浸润深度及淋巴结转移与弗林蛋白酶表达水平具有显著相关性(P均＜0.05).弗林蛋白酶表达水平与CD4+细胞计数、CD4 +/CD8+及FOXP3+细胞计数呈显著正相关(P均＜0.05),与CD8+细胞、颗粒酶B+细胞、CD134+细胞细胞计数呈显著负相关(P均＜0.05).结论 宫颈癌患者肿瘤组织弗林蛋白酶表达水平与肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移及局部免疫功能具有相关性.
-
弗林蛋白酶(furin)多肽抑制剂的合成研究
目的 以绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)Lys活性片段22肽为模板,设计能抑制弗林蛋白酶(furin)的多肽抑制剂.方法 根据furin的专一性底物的特定氨基酸序列来改造设计抑制剂,用Fmoc法固相合成了两条多肽抑制剂(MBI 13和MBI 14). 结果纯化的MBI13和MBI14经HPLC和质谱鉴定合成正确,对furin的抑制常数分别为:5.6×10-7 M和2.3×10-7 M.结论 以MBTI Lys片段为模板经过突变和优化设计,得到了较为理想的furin抑制剂,为进一步的药物设计提供依据.
-
重组Furin蛋白对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响
[目的]探讨重组弗林蛋白(Furin)对于类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,HA)滑膜细胞增殖、迁移、侵袭和细胞因子分泌的影响.[方法]从类风湿关节炎患者关节内提取RA滑膜组织后培养原代滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synovial cells,FLS);将重组Furin蛋白按照不同浓度(250 ng/ml,500 ng/ml)加入RA滑膜细胞培养基中诱导培养并采用MTT、细胞划痕、Transwell、ELISA等方法检测重组蛋白处理对细胞增殖、迁移、侵袭和炎性因子分泌等生物学特性的影响.[结果]与空白对照组比,加入重组Furin蛋白处理24 h、48 h,对类风湿滑膜细胞增殖活动没有明显影响(P＞0.05).处理24 h后与空白对照组比,迁入划痕伤口内细胞数无显著区别(P＞0.05),滑膜细胞穿透基底膜细胞数明显减少(P＜0.05),且与剂量浓度呈正相关.培养液上清中IL-1α和IL-17含量升高(P＜0.05),而各组间IL-1β和TNF-α含量差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]重组Furin蛋白诱导可抑制类风湿关节炎滑膜细胞侵袭能力同时可促进其分泌IL-1α和IL-17.
-
弗林蛋白酶:一种广泛参与前体蛋白切割的内切蛋白酶
弗林蛋白酶(Furin)是真核生物细胞中一种重要的内切蛋白酶.Furin能识别特定的氨基酸序列,在内质网-高尔基体中经两次自剪切活化后,对分泌途径中许多重要的多肽和蛋白的前体进行剪切加工,使之具有生物活性.Furin底物广泛,包括大多数的肽类激素、许多生长因子、受体、黏附分子、基质金属蛋白酶和某些病毒包装糖蛋白以及细菌外毒素,因此具有重要的生物学功能,并与许多疾病的发生发展有密切的关系.
-
肺腺癌 CT 增强值与弗林蛋白酶、基质金属蛋白酶-14表达的关系
目的：观察肺腺癌患者 CT 增强值与术后癌组织中弗林蛋白酶（Furin）和基质金属蛋白酶‐14（MMP‐14）表达的关系。方法选择在该院确诊为肺腺癌的患者97例作为研究对象，均行 CT 增强扫描，术后标本应用免疫组化方法检测 Furin 和MMP‐14的表达。结果肿瘤中 CT 增强值、Furin 和 MMP‐14的阳性率在不同肿瘤的大径、胸膜侵犯和 Ki67增殖指数均表现出了明显差异，其病理状况越差，肿瘤中 CT 增强值、Furin 和 MMP‐14的阳性率越高（P＜0．05）。表达强度中，Furin 和 MMP‐14表达强度比较，差异无统计学意义（P＞0．05），且病理状况越差，强阳性与阳性例数所占比例越高（P＜0．05）。肺腺癌中 CT 增强值与 Furin（r＝0．45，P＝0．0485）、MMP‐14（r＝0．49，P＝0．0341）均呈显著正相关（P＜0．05）。结论肺腺癌患者 CT 增强值及Furin 和 MM P‐14与肿瘤病况有密切关联，术前进行 CT 扫描可一定程度上反映 Furin 和 MMP‐14的表达。
关键词： 肺腺癌 螺旋 CT 弗林蛋白酶 基质金属蛋白酶-14 -
突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建
目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体.方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原eDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的eDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体.结果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功.结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础.
关键词： 胰岛素原 腺病毒载体/pAdEasy-1 弗林蛋白酶
