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脑缺血再灌注后线粒体膜电位变化及海风藤提取物的干预作用
现代生物学技术对海风藤成分分析发现,其提取物中所含成分海风藤酮不仅具有拮抗血小板活化因子的作用,还能抑制缺血再灌注期脑组织磷脂酶A2和自由基的生成 [1].因此,我们采用大鼠局灶性缺血再灌注模型,就海风藤提取物对线粒体膜电位、超氧化物岐化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)水平的影响做进一步的研究.
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海风藤提取物对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响
目的 观察海风藤提取物对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后大脑皮质缺血灶周围区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子时相表达及神经细胞凋亡的影响.方法 应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的分布,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术分别观察模型组、海风藤提取物组和二甲基亚砜(DMSO)组大脑中动脉栓塞90 min再灌注6、24、72 h时缺血灶周围脑区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子(AIF)和TUNEL阳性细胞的时相表达.结果 ①脑L/R后在缺血灶周围区均出现三者的表达,且表达有几乎一致的规律性.②缺血90 min再灌注24、72 h.海风藤组与其他两组比较,caspase-3、凋亡诱导因子阳性细胞和TUNEL染色阳性细胞的数量均明显减少(P＜0.01).结论 ①AIF、caspase-3参与了局灶性脑缺血后神经细胞的凋亡过程.②海风藤提取物可以减少AIF、caspase-3蛋白的表达,减轻迟发性神经元死亡.对缺血性脑组织有保护作用.
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广东海风藤提取物对痴呆鼠脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响
目的研究老年痴呆鼠脑内β淀粉样前体蛋白基因(β-APP)表达的改变;及广东海风藤提取物(HS2)对老年痴呆鼠学习记忆及脑内β-APP基因表达的影响.方法选用昆明种小鼠,腹腔注射D-半乳糖和灌胃三氯化铝制备老年痴呆小鼠模型,三个治疗组在造模的同时分别灌胃低、中、高剂量的HS2.通过Morris水迷宫和半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)来测定HS2对老年痴呆模型小鼠学习记忆和脑内β-APP mRNA含量的影响.结果老年痴呆模型小鼠学习记忆成绩下降,脑内β-APP基因表达增强.模型小鼠口服低、中、高剂量HS2能提高其学习记忆成绩,降低脑内β-APP mRNA含量并呈现一定的量效关系.结论 HS2能改善老年痴呆鼠学习记忆能力并下调β-APP基因的表达.
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海风藤提取物对脑缺血保护作用的实验研究
目的:探讨血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂海风藤提取物对鼠脑缺血半暗带神经细胞凋亡的影响,并与传统的PAF受体拮抗剂银杏苦内酯相比较.方法:采用流式细胞分析和TUNEL方法,观察各实验组鼠脑缺血半暗带神经细胞的凋亡,并结合电镜观察缺血神经细胞超微结构的改变.结果:假手术组仅有极少量神经细胞凋亡;缺血90min再灌注12、24h缺血半暗带神经细胞凋亡明显增多;海风藤提取物、银杏苦内酯治疗组于相同时限内细胞凋亡较缺血/再灌组显著减少.结论:海风藤提取物与传统PAF受体拮抗剂银杏苦内酯均能明显减少缺血半暗带神经细胞的凋亡数量,减缓缺血区神经元损害,具有显著的脑保护作用.
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广东海风藤提取物HS2对老年痴呆小鼠的药效学研究
目的研究广东海风藤提取物HS2对老年痴呆(AD)模型小鼠的治疗作用及作用机制.方法选用昆明种小鼠,腹腔注射D-半乳糖和灌胃三氯化铝90 d制备老年痴呆小鼠模型,3个治疗组在造模的后40d分别灌胃低、中、高剂量HS2.通过Morris水迷宫、RT-PCR,常规HE染色及Aβ1～40免疫组化染色,来观察HS2对AD模型小鼠学习记忆、脑内早老素1(PS1)、β位点APP内切酶(BACE)基因表达及海马、皮层中老年斑的影响.结果低、中、高剂量的HS2均能改善AD小鼠学习记忆,下调PS1和BACE基因的表达,减少老年斑的生成.结论不同剂量的HS2能改善AD小鼠的学习记忆能力,降低PS1,BACE mRNA的含量,减少脑内Aβ沉积所形成的老年斑.
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海风藤提取物对Aβ寡聚体激活的小胶质细胞释放炎性因子的抑制作用
目的 探讨Aβ寡聚体(Aβo)激活小胶质细胞释放相关炎性因子的作用及海风藤提取物对该过程的影响.方法 取Wistar乳鼠的大脑皮层,进行小胶质细胞原代培养、分离、纯化并鉴定；采用醇提取法制备海风藤提取物,将提取物与DMSO按4:1混合后加生理盐水并用0.22 μm微孔滤膜过滤；将纯化后的小胶质细胞按相同密度种植于48孔板,分为空白对照组、Aβo组、Aβo+海风藤提取物组和Aβo+ DMSO组；采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定培养基上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度.结果 与空白组对照相比,经Aβo处理的小胶质细胞产生的炎性因子明显增加；Aβo+海风藤提取物组的炎性因子浓度低于Aβo组(P＜0.05).结论 Aβo能激活小胶质细胞并导致其释放大量炎性因子,而海风藤醇提取物能抑制该过程中炎性因子的释放.
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海风藤提取物对激活的小胶质细胞IL-1β和TNF-α表达的影响
目的 研究海风藤提取物对不同聚集状态的β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导小胶质细胞中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响.方法 体外培养小鼠小胶质细胞株BV2,制备寡聚体和纤丝状Aβ1-42,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的海风藤提取物对BV2细胞活力的影响；BV2细胞分为4个实验组,分别采用寡聚体Aβ1-42、寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物、纤丝状Aβ1-42、纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物干预48 h,并设空白对照组,应用实时荧光定量PCR测定各组IL-1β和TNF-α的表达水平.结果 海风藤提取物在10～ 80 g/L范围内对细胞活性无影响；实时荧光定量结果显示,4个实验组的小胶质细胞表达IL-1β和TNF-α的水平均高于空白对照组.寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于寡聚体Aβ1-42组,纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于纤丝状Aβ1-42组.结论 炎性指标IL-1β和TNF-α的表达增高证明寡聚体和纤丝状Aβ1-42均能激活小胶质细胞；IL-1β和TNF-α的表达降低,表明海风藤提取物可以抑制寡聚体和纤丝状Aβ1-42对小胶质细胞的激活.
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海风藤对活化的新生大鼠小胶质细胞的影响作用
目的 研究海风藤提取物对纤丝状和寡聚体β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)诱导的活化新生大鼠小胶质细胞可能的影响.方法 原代培养新生大鼠小胶质细胞,分别用纤丝状Aβ25-35、寡聚体Aβ25-35、纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物、寡聚体Aβ25-35+海风藤提取物干预小胶质细胞,并设立空白对照组.干预48h后,以CD68作为小胶质细胞活化的特异性抗原标志,利用免疫细胞化学染色方法,对小胶质细胞的活化率进行检测,并比较不同处理组间的差异.结果 四个实验组的小胶质细胞CD68表达阳性率均高于空白对照组(5.1％,P＜0.05).纤丝状Aβ+海风藤提取物组CD68表达阳性率(52.1％)低于纤丝状Aβ组(60.8％,P＜0.05).寡聚体Aβ组(71.2％)和寡聚体Aβ+海风藤提取物组(67.0％)的CD68表达阳性率无明显差异(P=0.101).结论 纤丝状和寡聚体Aβ均能激活小胶质细胞；海风藤提取物能够抑制纤丝状Aβ对小胶质细胞的激活作用,对寡聚体Aβ的激活作用无明显影响.
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海风藤提取物对脑缺血再灌注模型大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位变化的干预作用
目的 观察脑缺血再灌注2 h后大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化及海风藤提取物的干预作用.方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型, 流式细胞术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜组和海风藤组缺血灶周神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化.结果 与模型组神经细胞凋亡率(72.7%±6.5%)和线粒体膜电位(0.117±0.011)比较,海风藤组神经细胞凋亡率(47.0%±3.8%)明显下降(P<0.01),线粒体膜电位(0.182±0.023)明显升高(P<0.01);而假手术组神经细胞凋亡率(5.8%±1.8%)和线粒体膜电位(0.331±0.016)与模型组比较差异均有显著性(P<0.01).结论 海风藤可以减轻脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡,并对线粒体膜电位有稳定作用,可以保护缺血脑组织.
