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黑皮质素-1对背根神经节神经元T-型钙通道电流的影响及机制研究
目的 研究黑皮质素-1(NSF-1)对成年小鼠背根神经节(DRG)神经元T-型钙通道电流的作用及信号转导机制. 方法 应用蛋白电泳方法研究NSF-1受体(黑色素皮质素4受体,MC4-R)在小鼠DRG中的表达;应用全细胞膜片钳技术研究NSF-1对小鼠小直径DRG神经元T-型钙电流的作用,并研究其信号转导通路. 结果 本实验研究结果表明,MC4-R在DRG中显著表达;NSF-1对小鼠DRG中小直径的神经元T-型钙通道电流具有量效依赖性的增强作用;MC4-R阻断剂HS024、蛋白激酶C(PKC)的阻断剂双吲哚马来酰亚胺(GF109203X)及白屈菜赤碱氯化物(chelerythrine chloride)能够抑制NSF-1对该T-型钙通道电流的增强作用,而蛋白激酶A(PKA)阻断剂PKI 6-22无此效应. 结论 NSF-1对小鼠小直径的背根神经节神经元T-型钙电流具有剂量依赖性的增加作用,该作用是通过MC4-R受体及下游PKC激酶磷酸化作用而起效.
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辛伐他汀对大鼠心肌肥厚的防治作用及其与钙通道的关系
目的 探讨辛伐他汀对心肌肥厚的防治作用及其与钙通道活动的关系.方法 采用腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚动物模型.尾动脉无创测量大鼠收缩压.称量心脏重量/体重(HW/BW)、左心室重量/体重(LVW/BW)比值.采用超声心动图检测动物心脏构型及射血功能.应用RT-PCR和Western blot分别检测心肌L-型钙通道亚单位Cav1.2(α,C)、T-型钙通道亚单位Cav3.1 (α1G)、Cav3.2(α1H)mRNA及其蛋白表达的变化.结果 (1)腹主动脉缩窄+辛伐他汀组(AAC+SIM组)大鼠收缩压130 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)明显低于腹主动脉缩窄组(AAC组)189mm Hg,P<0.05.HW/BW比值AAC+SIM组3.37 mg/g明显低于AAC组3.94 mg/g,P<0.01.LVW/BW比值AAC+SIM组2.33 mg/g明显低于AAC组2.95 mg/g,P<0.01.室间隔厚度AAC+SIM组2.01 mm明显低于AAC组2.31 mm,P<0.01.左心室后壁厚度AAC+SIM组1.89 mm明显低于AAC组2.19 mm,P<0.01.(2)AAC+SIM组大鼠心肌T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白表达均显著低于AAC组,P均<0.01,但L-型钙通道亚单位α1 C mRNA和蛋白表达两组间比较差异无统计学意义.结论 辛伐他汀对腹主动脉缩窄所致的心肌肥厚具有明显的防治作用,其作用机制可能与其抑制T-型钙通道亚单位α1G、α1H mRNA和蛋白的重新再表达有关,但与L-型钙通道亚单位α1C mRNA和蛋白表达无关.
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T型钙通道基因CACNA1H是儿童失神癫癎的易感基因
目的在既往工作的基础上,进一步明确T型钙通道CACNA1H基因是否为儿童失神癫癎(CAE)的易感基因.方法本组48例,分别来源于北京大学第一医院、首都医科大学附属北京儿童医院、首都儿科研究所附属医院以及山西省儿童医院.对本组患儿进行T型钙通道CACNA1H基因外显子6～12及其相邻的部分内含子PCR 产物测序,寻找突变.96个正常对照来自同一地区的无关个体,均无癫癎病史或遗传病家族史.结果共发现13个单核苷酸多态性,还发现4个突变位点只在CAE中出现,其中2个为错义突变:G773D和H515Y,均为杂合突变.突变H515Y是新发现的错义突变,患儿从其母亲接受该突变.G773D在第3个CAE家系中发现相同的突变,本例从其父亲接受该突变.结论 T型钙通道CACNA1H基因很可能是CAE 的易感基因.
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T型钙通道在心肌肥厚大鼠心肌细胞钙内流中的作用
目的研究T型钙通道在心肌细胞钙离子内流中的作用及其对心脏兴奋-收缩耦联的可能影响.方法测定选择性T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔对培养的SD乳大鼠心室肌细胞和二肾一夹心肌肥厚大鼠心室肌细胞[Ca2+]i的影响.结果血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)刺激使乳大鼠心室肌舒张期细胞[Ca2+]i增高,收缩期细胞[Ca2+]i降低,[Ca2+]i上升和下降的时间延长.米贝拉地尔1.25～5μmol·L-1浓度依赖性降低AngⅡ引起的细胞[Ca2+]i变化.在心肌肥厚模型大鼠,咖啡因刺激后,[Ca2+]i增幅和高[Ca2+]i明显降低.而米贝拉地尔25 mg·kg-1·d-1(灌胃给药7～9周)组加入咖啡因刺激后细胞内[Ca2+]i增幅和高[Ca2+]i明显增高.结论T型钙通道异常开放可以引起心肌细胞内钙超载.阻断T型钙通道,可能通过改善肌浆网摄取及释放钙的功能而抑制心肌细胞钙超载.
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不同品牌正压接头大流量测定实验
某医院于2004年起采用正压接头封闭血液净化治疗的血管通路,为了验证正压接头连接血管通路后其流量及压力能否达到血液净化治疗要求,我们进行了大流量的实验研究,现报道如下.1 材料与方法 (1)实验材料:AK95S型透析机(瑞典Gambro公司),大泵速500 ml/min,静脉压力报警限为-100～400 mmHg(1 mmHg≈0.133 kPa);SUREflux-130G型空心纤维透析器(日本尼普洛株式会社);一次性透析型人工肾脏用血液管路(大连JMS医疗器具有限公司).
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T型钙通道在鞘内注射利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用
目的 评价T型钙通道在鞘内注射利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用.方法 鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠48只,体重230～ 270 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):二甲基亚砜组(D组)、10％利多卡因组(L组)、米贝地尔+利多卡因组(M组)和生理盐水+利多卡因组(N)组,另取12只大鼠作为正常对照组(C组).D组和L组分别鞘内注射二甲基亚砜和10％利多卡因20 μl,M组和N组分别鞘内注射米贝地尔200 μg/10μl和生理盐水10μl后鞘内注射10％利多卡因20μl.于鞘内给药前、给药后2、4、8、12 h、1、2、3、4和5 d(T0-9)时测定大鼠后肢机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL).于T6时每组随机取4只大鼠处死取脊髓腰膨大,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,D组各时点MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05),L组和N组T1-8时MWT升高,T1-7时TWL延长,M组T1-6时MWT升高,TWL延长(P＜0.05)；与L组和N组比较,M组T1-4时MWT降低,TWL缩短(P＜0.05).M组较L组和N组脊髓病理学损伤减轻.结论 T型钙通道参与了鞘内注射利多卡因致大鼠脊髓神经毒性的过程.
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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在神经病理性痛大鼠脊髓Cav3.2T型钙通道表达上调中的作用
目的 探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在神经病理性痛大鼠脊髓Cav3.2T型钙通道表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,体重220～ 250 g,3月龄,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8)∶假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、二甲基亚砜组(D组)、不同浓度CaMKⅡ特异性抑制剂KN93组(K1～3组).采用背根神经节慢性压迫法建立神经病理性痛模型.D组和K1-3组于造摸后5d鞘内注射二甲基亚砜和KN93 15、30、60 nmol/L,容积10 μl.于造模前、造模后5d鞘内给药前、鞘内给药后30、60 min、3、6、8h时测定机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于鞘内给药后8h测定痛阈后处死,取脊髓腰膨大,采用RT-PCR及Western blot法检测Cav3.2 mRNA及其蛋白表达水平.结果 与S组比较,NP组、D组、K1-3组MWT降低,TWL缩短,Cav3.2 mRNA及蛋白表达上调(P＜0.05).与NP组比较,K1-3组MWT升高,TWL延长,Ca3.2 mRNA及蛋白表达下调,且呈浓度依赖性(P＜0.05),D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CaMKⅡ通过上调大鼠脊髓Cav3.2T型钙通道的表达而参与大鼠神经病理性痛的形成和维持.
关键词： 神经痛 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 钙通道 T型 脊髓 -
T型钙通道在大鼠神经病理性疼痛维持中的作用
目的观察鞘内注射T型钙通道阻滞剂米贝地尔对慢性背根神经节压迫(CCD)大鼠机械痛敏和热痛敏的影响,探讨T型钙通道在脊髓水平神经病理性疼痛维持中的作用.方法鞘内置管成功的SD大鼠48只,随机分为6组(n=8):假手术组(Ⅰ组)、CCD组(Ⅱ组)、CCD+生理盐水组(Ⅲ组)、CCD+米贝地尔50μg组(Ⅳ组)、CCD+米贝地尔100μg组(Ⅴ组)、CCD+米贝地尔200μg组(Ⅵ组).鞘内置管后5 d制备CCD模型,Ⅲ～Ⅵ组在CCD后5 d,分别鞘内单次注射米贝地尔50、100、200μg 10 μl.记录大鼠机械缩足反射阈值和热缩足潜伏期.结果Ⅱ组从CCD后1～21 d形成了机械痛敏和热痛敏;鞘内注射米贝地尔50、100、200μg减轻了CCD诱导机械痛敏和热痛敏.结论T型钙通道在脊髓水平参与了神经病理性疼痛的维持.
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T型单侧多功能外固定支架治疗桡骨远端粉碎性骨折21例
1998年以来作者应用T型外固定支架治疗桡骨远端粉碎性骨折21例,取得满意效果,现报道如下.
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脂多糖对小鼠子宫平滑肌细胞中T型钙通道Cav3.1及Cav3.2表达的影响
目的 检测脂多糖(LPS)对小鼠子宫平滑肌细胞中T型钙通道Cav3.1、Cav3.2表达的影响,探讨LPS与T型钙通道在早产发动过程中的相关性.方法 取孕鼠的子宫平滑肌组织进行细胞原代培养,予LPS干预细胞,检测干预前后T型钙通道Cav 3.1、Cav3.2 mRNA及蛋白的表达情况.结果 LPS干预孕鼠子宫平滑肌细胞6h后Cav3.1及Cav3.2 mRNA表达开始升高,12 h后表达升高明显,24 h后升高略有下降.而0.9％氯化钠注射液组及正常对照组,Cav3.1及Cav3.2 mRNA表达无明显变化.蛋白印迹法结果显示,LPS干预6h后Cav3.1及Cav3.2蛋白表达也同时升高,12 h后升高较明显,Cav3.1表达在干预后12h达高峰,Cav3.2的表达在LPS干预24 h后高.结论 LPS能够上调T型钙通道的表达,证明了T型钙通道的表达变化可能参与了LPS诱导的小鼠早产的发生.
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镍对胚胎神经干细胞增殖和分化的调节
目的:观察T型钙通道阻断剂镍对胚胎神经干细胞的调节,分析T型钙通道在神经干细胞增殖和分化中的作用.方法:实验于2004-08/2006-01在南方医科大学神经生物学教研室完成.选取清洁级成年雌性Wistar孕鼠1只,分离大脑半球,制成单细胞悬液,利用无血清培养技术,在添加碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27 supplement的DMEM/F12培养基中培养胚胎神经干细胞,当神经球增大至50～200个细胞/球时,即可传代.取第3代胚胎神经干细胞,在培养基中分别加入0,0.25,0.5,1.0mmol/L的氯化镍,以BrdU免疫荧光、四唑盐、流式细胞仪检测细胞增殖指数以及DCX和S-100β阳性细胞数.结果:①神经干细胞体外培养的鉴定:取原代和传代培养的细胞进行免疫荧光鉴定,发现均有细胞表达nestin抗原.传至第3代时,其阳性比例可达99%.②诱导分化及鉴定:分化2 d后,镜下观察细胞长出突起,已初步具有神经元和胶质细胞形态.免疫荧光染色显示分化细胞呈现DCX和S-100β阳性.③细胞增殖检测结果:加入0.25,0.5,1.0 mmol/L的氯化镍处理细胞,MTT检测其吸光度值分别为未加入氯化镍的62.09%,48.20%,34.85%,呈浓度依赖性降低(P均＜0.001);免疫荧光检测BrdU阳性细胞数分别为未加入氯化镍的85.75%,74.25%,57.01%(P＜0.05).流式细胞仪检测加入0.5 mmol/L氯化镍的单细胞悬液其增殖指数显著高于未加入氯化镍的单细胞悬液(66.11%,1.016%,P＜0.001).④镍对细胞分化的影响:单细胞悬液加入0.25,0.5,1.0 mmol/L氯化镍后,BrdU阳性细胞数量减少(P均＜0.001);DCX阳性细胞数分别比未加入氯化镍的单细胞悬液增加23%,52%,58%(P＜0.05或0.01);S-100β阳性细胞数增加85%,105%,110%(P＜0.05或0.01).结论:T型钙通道阻断剂镍可抑制胚胎神经干细胞的分裂增殖,促进其分化,提示T型钙通道可能参与胚胎神经干细胞增殖分化的调节.
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儿童失神癫痫CACNA1H基因突变筛查和分析
目的:明确T型钙通道CACNA1H基因变异与儿童失神癫痫(CAE)的关系.方法:对100个中国汉族CAE核心家系CACNA1H基因的外显子6～12及其相邻的部分内含子进行PCR产物测序、基因突变筛查和分析.结果:仅在32例CAE患儿中发现14个序列变异,包括2个错义突变、3个同义突变和9个内含子变异,其中12个为新发现的变异.在191例性别匹配的正常对照中未发现这些变异.位于第11内含子的单核苷酸多态性(SNPs)位点52037C＞T在17例彼此无亲缘关系CAE患儿中出现,且在CAE核心家系中存在明显的传递不平衡(χ2=9.783,P=0.001 76).结论:CACNA1H基因可能是中国汉族CAE的重要易感基因.
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蝙蝠葛苏林碱对转染人胚肾细胞T型钙通道亚型(Cav3.1)电生理特性的作用
目的 探讨蝙蝠葛苏林碱(DS)对转染人胚肾细胞(HEK293)表达的T型钙通道亚型(Cav3.1)电生理特性的作用.方法 采用体外培养人胚肾细胞细胞,转染T型钙通道亚型(Cav3.1),用全细胞膜片钳技术记录在转染表达的T型(Cav3.1)钙电流,并观察DS对该钙通道亚型电生理特性的影响.结果 在钳制电位(-110 mV),DS在1 ～10 μmol·L-1浓度范围内呈浓度依赖性抑制人胚肾细胞表达的ICav31电流,1,3,10 μmol·L-1DS抑制率分别为(16.97±3.25)％,(37.92±5.76)％和(53.50±9.65)％;在钳制电位分别为-110和-70 mV时,3μmol·L-1DS对ICav31抑制率分别为(37.92±5.76)％和(40.29±6.72)％(P＞0.05);对T型(Cav3.1)钙通道失活常数tinact值分别为(30.49±0.13),(30.18±0.06) ms(P＞ 0.05).结论 DS对人胚肾细胞表达的T型钙通道Cav3.1电流具有抑制作用,呈浓度依赖性,非电压依赖性,且对该通道失活过程无影响.
