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CaMK Ⅱ在收缩促进骨骼肌细胞GLUT4转位中的作用
目的:探讨钙一钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)在收缩促进骨骼肌细胞葡萄糖转运子4(GLUT4)转位机制中的作用.方法:将接种在培养板中的C2C12 GLUT4myc小鼠肌管随机分为对照组和氨乙酰胆碱(Cch)组,各组分为抑制剂亚组和对照亚组.分别用10 μmol/L CaMK Ⅱ的特异性抑制剂KN93或KN62预孵育,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞膜上GLUT4myc的含量(转位);用KN93预孵育后,免疫印迹法测定蛋白激酶CaMKⅡ的磷酸化.结果:氨乙酰胆碱使细胞膜上GLUT4myc的水平显著增加.KN93和KN62抑制氨乙酰胆碱刺激的GLUT4myc转位.氨乙酰胆碱可增加CaMKⅡ的磷酸化,KN93不影响对照组CaMK Ⅱ的磷酸化水平,但可以抑制Cch刺激的CaMK Ⅱ磷酸化.结论:CaMK Ⅱ位于Ca2+下游并有介导收缩促进骨骼肌细胞GLUT4myc转位的作用.
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右美托咪定对痛觉过敏大鼠脊髓PKCγ、CaMKⅡα及pCaMKⅡα表达的影响
目的：探讨右美托咪定对切口痛-瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓蛋白激酶C（PKC）γ、钙/钙调素依赖性蛋白激酶（CaMK）Ⅱα及pCaMKⅡα表达的影响。方法雄性SD大鼠40只，体质量240~260 g，2~3月龄，随机数字表法分为5组（n=8）：空白对照组（C组）、瑞芬太尼+切口痛组（R+I组）、右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛组（D+R+I组）、右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛+佛波醇酯+二甲基亚砜组（D+R+I+P+DMSO组）、右美托咪定+瑞芬太尼+切口痛+二甲基亚砜组（D+R+I+DMSO组）。采用足底切口的方法制备切口痛模型。瑞芬太尼以1.2μg·kg-1·min-1的速度经尾静脉输注90 min；右美托咪定以50μg/kg的剂量于术前30 min皮下注射；佛波醇酯及二甲基亚砜均为鞘内注射10μL。分别于输注前24 h（T0）、输注后2、6、24和48 h（T1~4）时测定热刺激缩足潜伏期（PWL）和机械刺激缩足阈值（PWT）。后1次行为学测试后处死大鼠，取脊髓L4~6节段。采用Western blot法测定脊髓背角PKCγ、CaMKⅡα及pCaMKⅡα的表达。结果除T0外，与C组比较，其余各组PWL缩短、PWT降低，PKCγ、CaMKⅡα及pCaMKⅡα表达上调。与R+I组比较，D+R+I组、D+R+I+DMSO组PWL延长、PWT升高，PKCγ、CaMKⅡα及pCaMKⅡα表达下调。与D+R+I组比较，D+R+I+P+DMSO组PWL缩短、PWT降低，PKCγ、CaMKⅡα及pCaMKⅡα表达上调。与D+R+I+P+DMSO组比较，D+R+I+DMSO组PWL延长、PWT升高，PKCγ、CaMKⅡα及pCaMKⅡα表达下调。结论右美托咪定可以减少切口痛-瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓PKCγ、CaMKⅡα及pCaMKⅡα的表达。
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低氧预适应保护缺血脑组织效应中CaMKⅡ的作用机制
目的 探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在低氧预适应(HPC)保护小鼠缺血脑组织中的作用.方法 36只健康雄性BALB/c小鼠随机分为常氧假手术组、HPC假手术组、常氧缺血组和HPC缺血组,每组6只应用Western blot并结合Gel Doc凝胶成像系统定量检测4组小鼠脑组织内CaMKⅡ蛋白表达量和磷酸化水平的变化,用免疫组化检测常氧缺血组和HPC缺血组小鼠脑皮层CaMKⅡ磷酸化水平.结果 与常氧假手术组相比,常氧缺血组小鼠皮层缺血核心区和半影区CaMKⅡ蛋白表达量和磷酸化水平均显著降低(P＜0.05),HPC缺血组缺血半影区CaMKⅡ磷酸化水平及p-CaMKⅡ阳性细胞数目高于常氧缺血组(P＜0.05).结论 HPC减缓缺血半影区CaMKⅡ磷酸化水平的降低,可能参与减轻因中脑动脉闭塞所致小鼠缺血性脑损伤作用.
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CaMKⅡ在心血管疾病中作用的研究进展
钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）具有多重作用，并在心血管事件中有着举足轻重的地位。特别是其可以作用于多种分子信号通路中的下游靶点，导致血管疾病、心力衰竭、心肌肥厚和心律失常发生发展。CaMKⅡ通过磷酸化L型钙通道、兰尼碱受体（RyR2）和受磷蛋白（PLN）等多种钙调蛋白能够影响心肌细胞钙平衡、增加钙渗漏，亦可影响钠通道及钾通道，调节晚钠电流及ATP敏感性钾电流IKATP。此外更可直接通过激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）及脱乙酰化酶（HDAC）影响心肌细胞转录调控。这些机制在心肌肥厚、心力衰竭、心律失常的发生发展中都有着重要作用。因此深入了解CaMKⅡ的结构与作用机制将有助于制定新的心血管疾病治疗策略。
关键词： 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 钠通道 兰尼碱受体钙释放通道 心力衰竭 心律失常 心性 综述 -
CaMKⅡ与左西孟旦抗心肌缺血再灌注致大鼠心律失常作用的关系:离体实验
目的 评价心肌钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)与左西孟旦抗心肌缺血再灌注致大鼠心律失常作用的关系.方法 健康成年雄性Wistar大鼠30只,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=10):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和左西孟旦组(L组).采用Langendorff灌注装置建立离体心脏灌注模型.平衡灌注20 min后,C组用K-H液继续灌注60 min; I/R组缺血30 min后,K-H液灌注30 min;L组缺血30 min后,用含左西孟旦300 nmol/L的K-H液灌注30min.分别于缺血前即刻、再灌注15和30 min时记录左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压大下降速率(-dp/dtmax)和心率(HR).记录再灌注期间心律失常的发生情况,并进行评分.于再灌注30 min时取心尖部组织,测定细胞内钙离子浓度([Ca2+]i),取左心室心肌组织,测定CaMKⅡ的活性.结果 与C组比较,I/R组心律失常评分、[Ca2+]i和CaMKⅡ活性升高,再灌注15和30 min时LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtm1ax和HR降低,LVEDP升高(P＜0.05);与I/R组比较,L组室性早搏数量、心律失常评分、[Ca2+]i和CaMKⅡ活性降低,再灌注15和30 min时LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax和HR升高,LVEDP降低(P＜0.05).结论 左西孟旦降低心肌缺血再灌注致大鼠心律失常的机制与抑制CaMKⅡ活性有关.
关键词： 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 哒嗪类 心肌再灌注损伤 心律失常 心性 -
七氟醚对老龄大鼠海马CaMKⅡ/CREB信号通路的影响
目的 评价七氟醚对老龄大鼠海马钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)/cAMP应答元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响.方法 清洁级健康老龄雄性SD大鼠60只,18月龄,体重600～750 g,采用随机数字表法分为2组(n=30):对照组(C组)和七氟醚组(Sev组).Sev组吸入50％空氧混合气体(2 L/min)和2％七氟醚4h,C组吸入50％空氧混合气体(2 L/min)4 h.于麻醉前6d和麻醉后1d时进行Morris水迷宫实验,记录老龄大鼠逃避潜伏期、游泳距离、原平台穿越次数和第Ⅱ象限平台停留时间,于麻醉后1、3和7d时处死大鼠取海马,采用Western blot法测定CaMKⅡ、磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的表达.结果 与C组比较,Sev组训练第5天和麻醉后1d逃避潜伏期和游泳距离延长,原平台穿越次数减少,第Ⅱ象限平台停留时间减少,麻醉后海马CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB及p-CREB表达下调(P＜0.05).结论 七氟醚通过抑制海马CaMKⅡ/CREB信号通路导致老龄大鼠认知功能降低.
关键词： 麻醉药 吸入 老年人 海马 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 cAMP反应元件结合蛋白质 认知 -
异丙酚重复麻醉对新生大鼠海马CaMKⅡα表达的影响
目的 探讨异丙酚重复麻醉对新生大鼠海马钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响.方法 新生7d健康SD大鼠42只,体重12～16 g,雌雄各半,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=21):对照组(C组)和异丙酚重复麻醉组(P组).C组腹腔注射生理盐水7.5 ml/kg,连续7 d;P组腹腔注射异丙酚75 ml/kg,连续7d.出生后28 d时采用Morris水迷宫实验检测认知功能.水迷宫实验结束24h时断头处死大鼠,取脑组织,分别采用免疫组织化学法和Westernbolt法检测海马CAI区CaMKⅡα及磷酸化CaMKIⅡα(pCaMKⅡα)的表达.结果 与C组比较,P组逃逸潜伏期延长,空间探索时间缩短,海马CA1区CaMKⅡα和pCaMKIIα表达下调(P＜0.01).结论 异丙酚重复麻醉降低新生大鼠认知功能的机制可能与下调海马CaMKⅡα的表达和抑制其活性有关.
关键词： 二异丙酚 婴儿 新生 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 海马 -
钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在神经病理性痛大鼠脊髓Cav3.2T型钙通道表达上调中的作用
目的 探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在神经病理性痛大鼠脊髓Cav3.2T型钙通道表达上调中的作用.方法 雄性SD大鼠48只,体重220～ 250 g,3月龄,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8)∶假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、二甲基亚砜组(D组)、不同浓度CaMKⅡ特异性抑制剂KN93组(K1～3组).采用背根神经节慢性压迫法建立神经病理性痛模型.D组和K1-3组于造摸后5d鞘内注射二甲基亚砜和KN93 15、30、60 nmol/L,容积10 μl.于造模前、造模后5d鞘内给药前、鞘内给药后30、60 min、3、6、8h时测定机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于鞘内给药后8h测定痛阈后处死,取脊髓腰膨大,采用RT-PCR及Western blot法检测Cav3.2 mRNA及其蛋白表达水平.结果 与S组比较,NP组、D组、K1-3组MWT降低,TWL缩短,Cav3.2 mRNA及蛋白表达上调(P＜0.05).与NP组比较,K1-3组MWT升高,TWL延长,Ca3.2 mRNA及蛋白表达下调,且呈浓度依赖性(P＜0.05),D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CaMKⅡ通过上调大鼠脊髓Cav3.2T型钙通道的表达而参与大鼠神经病理性痛的形成和维持.
关键词： 神经痛 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 钙通道 T型 脊髓 -
脊髓CX3CR1在小鼠炎性痛中的作用:与CaM/CaMKⅡ信号通路的关系
目的 评价脊髓CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)在小鼠炎性痛中的作用及其与钙调蛋白(CaM)/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路的关系.方法 清洁级健康雄性C57BL6小鼠96只,体重25~27 g,采用随机数字表法分为3组:对照组(C组,n=30)、炎性痛组(IP组,n=36)和CX3CR1拮抗剂组(CA组,n=30).C组右侧后爪趾底注射50 μl生理盐水,IP组和CA组右侧后爪趾底注射50 μl完全氟氏佐剂制备小鼠炎性痛模型,CA组于右侧后爪趾底注射完全氟氏佐剂前1 h鞘内注射PBS稀释终浓度为1 μg/5 μl的CX3CR1拮抗剂.于注射前30 min (T0)、注射后30 min (T1)、1、2和4 h (T2~4) 时测定热缩足潜伏期(TWL),随后处死取脊髓,采用Western blot法检测p-CaMKⅡ、p-CREB和c-fos的表达;RT-PCR法检测CaMKⅡ、CREB和c-fos mRNA的表达.免疫荧光法确定p-CaMKⅡ表达于小胶质细胞.结果 与C组比较,IP组和CA组T2~4时TWL缩短,T1~4时脊髓p-CaMKⅡ、p-CREB、c-fos及其mRNA上调(P<0.05);与IP组比较,CA组T2~4时TWL延长,T1~4时脊髓p-CaMKⅡ、p-CREB、c-fos及其mRNA表达下调(P<0.05).p-CaMKⅡ与小胶质细胞的特异标记物共表达.结论 CX3CR1通过激活CaM/CaMKⅡ信号通路参与了小鼠炎性痛的形成和维持.
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初级躯体感觉区及海马CaMK Ⅱ在利多卡因减轻瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用
目的 探讨初级躯体感觉区(S1区)和海马钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在利多卡因减轻瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用.方法 选取雄性SD大鼠156只,8～ 10周龄,体重240～ 260 g.采用随机数字表法分为4组:对照组(C组,n=6)、瑞芬太尼组(R组,n=50)、利多卡因组(L组,n=50)和瑞芬太尼+利多卡因组(RL组,n=50).R组静脉注射瑞芬太尼6 mg/kg后,以2.4 μg·kg-1·min-1的速率静脉输注,输注时间2 h;L组静脉注射利多卡因6 mg/kg后,以200μg·kg-1·min-1的速率静脉输注,输注时间2h.RL组给药方法同R组和L组.R组、L组和RL组于给药前、停药后0.5、2、5及24 h时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).R组、L组和RL组于停药后即刻、0.5、2、5和24 h时,C组于相应停药后即刻,断头处死,分离S1区和海马,采用蛋白免疫印迹法测定磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)的表达水平.结果 与给药前比较,R组、L组和RL组停药后0.5和2h时MWT降低(P＜0.05),停药后各时点TWL差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,R组停药即刻、0.5和2h时S1区和海马p-CaMKⅡ表达上调(P＜0.05).与R组比较,RL组停药即刻、0.5和2h时S1区和海马p-CaMKⅡ表达下调,L组停药即刻、0.5和2h时S1区和停药即刻、停药后0.5、2和24 h时海马p-CaMKⅡ表达下调,上述2组停药后0.5、2h时MWT升高(P＜0.05).3组各时点TWL比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利多卡因减轻瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏的机制与抑制S1区和海马CaMKⅡ活性有关.
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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在慢性痛致大鼠认知功能障碍中的作用
目的 评价钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在慢性痛致大鼠认知功能障碍中的作用.方法 实验Ⅰ 清洁级健康雄性SD大鼠24只,体重180～ 220 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(S组)、假手术前注射m-AIP组(M-S组)、坐骨神经慢性压迫性损伤组(N-C组)和坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)术前注射m-AIP组(M-C组).S组及M-S组仅暴露坐骨神经但不进行结扎,其余各组采用CCI法制备慢性痛模型.S组及M-S组分别于假手术前15 min鞘内注射生理盐水20 μl及m-AIP 20μl;N-C组及M-C组分别于CCI术前15 min鞘内注射生理盐水20μl及m-AIP 20μl.于术前及术后第4、7、10、14、17、21和28天时测定大鼠热缩足潜伏期(TWL)及机械缩足反应阈(MWT),于术前及术后第7、14、21和28天时测定步入潜伏期时间(STL).实验Ⅱ 清洁级健康雄性SD大鼠18只,体重180～ 220 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术后注射m-AIP组(S-M组)、CCI术后对照组(C-N组)、CCI术后注射m-AIP组(C-M组).S-M组假手术后7d鞘内注射m-AIP 20μl,C-N组及C-M组于CCI分别于术后7d鞘内注射生理盐水20 μl及m-AIP 20μl.于给药前及给药后2、4和8h时测定TWL、MWT和STL.结果 实验Ⅰ 与S组比较,N-C组术后各时点TWL缩短,MWT降低,术后第7、14和21天时STL缩短,M-C组术后各时点TWL缩短,MWT降低,术后第14和21天时STL缩短(P＜0.05);与N-C组比较,M-C组术后第4、7和10天时MWT升高,第4和7天时TWL延长,第7天时STL延长(P＜0.05).实验Ⅱ 与S-M组比较,C-N组给药后各时点TWL和STL缩短,MWT降低,C-M组给药后各时点STL缩短,给药后8h时TWL缩短,MWT降低(P＜0.05),给药后2和4h时TWL和MWT差异无统计学意义(P＞0.05).与C-N组比较,C-M组给药后2和4h时TWL延长,MWT升高(P＜0.05),各时点STL差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CaMKⅡ参与了慢性痛致大鼠认知功能障碍的形成.
关键词： 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 神经痛 认知障碍 -
鞘内注射白藜芦醇对骨癌痛大鼠脊髓背角神经元CaMKⅡ活化的影响
目的 评价鞘内注射白藜芦醇对骨癌痛大鼠脊髓背角神经元钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活化的影响.方法 清洁级成年雌性SD大鼠32只,体重180～220 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术组(S组)、骨癌痛组(B组)、骨癌痛+白藜芦醇组(BR组)和骨癌痛+溶媒对照组(BD组).B组、BR组和BD组右侧胫骨骨髓腔注射Walker 256乳腺癌细胞5μl(4×105个/ml);S组右侧胫骨骨髓腔注入5μl生理盐水.于造模后第12、13和14天,BR组鞘内注射白藜芦醇200 μg/10μl,1次/d;BD组鞘内注射1％二甲基亚砜10μl,1次/d.于注入乳腺癌细胞前(To)、注入乳腺癌细胞后3、5、7、10、12和14 d(T1-6)时测定机械痛阈和热痛阈,并于T6时取右侧胫骨,用HE染色法检测胫骨病理学变化;取大鼠L4,5脊髓节段,用免疫荧光法测定脊髓背角神经元磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)的细胞定位,并用免疫印迹法检测其蛋白表达.结果 与S组比较,B组、BR组和BD组T2-6时机械痛阈和热痛阈降低,T6时脊髓p-CaMKⅡ表达上调(P＜0.01),且主要与神经元共表达;与B组比较,BR组T5,6时机械痛阈和热痛阈升高,T6时脊髓p-CaMKⅡ表达下调(P＜0.01),BD组各时点机械痛阈和热痛阈以及p-CaMKⅡ表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射白藜芦醇减轻骨癌痛大鼠痛觉过敏的机制可能与抑制脊髓背角神经元CaMKⅡ活化有关.
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异丙酚对抑郁大鼠电休克处理后海马CaMKⅡα活性的影响
目的 探讨异丙酚对抑郁大鼠电休克处理后海马钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)活性的影响.方法 健康成年雄性SPF级SD大鼠,体重180～220 g,2～3月龄,采用慢性轻度不可预见性应激法建立抑郁模型.取模型制备成功的大鼠40只,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):抑郁组(D组)腹腔注射生理盐水8 ml/kg；单纯异丙酚组(P组)腹腔注射异丙酚80mg/kg;单纯电休克组(E组)腹腔注射生理盐水8ml/kg后实施电休克处理；异丙酚联合电休克(DPE)组腹腔注射异丙酚80 mg/kg,待翻正反射消失后行电休克处理.以上处理每天1次,连续7d.于处理前1d和处理后1d采用糖水偏好实验评价抑郁状态.于处理前1d和处理后3d采用Morris水迷宫实验检测学习记忆能力.于Morris水迷宫实验完成后1d,采用免疫组织化学法检测大鼠海马磷酸化CaMKⅡα(pCaMKⅡα)及CaMKⅡα的表达,计算pCaMKⅡα/CaMKⅡα比.结果 与D组比较,E组、DPE组糖水偏好比升高,E组逃避潜伏期延长,空间探索时间缩短,海马CaMKⅡα和pCaMKⅡα表达下调,pCaMKⅡα/CaMKⅡα比降低,DPE组逃避潜伏期缩短,空间探索时间延长,pCaMKⅡα表达上调(P＜0.05)；与E组比较,DPE组逃避潜伏期缩短,空间探索时间延长,CaMKⅡα和pCaMKⅡα表达上调,pCaMKⅡα/CaMKⅡα比升高(P＜0.05).结论 异丙酚减轻抑郁大鼠电休克处理后认知功能损害的机制可能与增强海马CaMKⅡα的活性有关.
关键词： 二异丙酚 电惊厥疗法 抑郁 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 海马 -
褪黑素对胰腺腺泡细胞钙超载的调节及其作用机制
目的 探讨褪黑素(MT)对急性坏死性胰腺炎(ANP)胰腺腺泡细胞钙超载的调节作用及其机制.方法 54只SD大鼠均分为假手术组(SO组)、急性坏死性胰腺炎组(ANP组,胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠法造模)和MT组(腹腔注射MT后30 min ANP造模).术后1、4、8h分批处死大鼠并进行胰腺病理检查.用荧光控测法测定胰腺组织内游离钙离子浓度,实时荧光定量PCR及免疫印迹法分别检测胰腺细胞中钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKⅡ)mRNA和蛋白表达水平.结果 ANP组随时间延长胰腺病理损伤进行性加重,MT组胰腺病理损伤较ANP组明显减轻(1、4、8h时病理评分比较的t值分别为-7.95、-9.72、-7.69,P值均=0.00).同时间点比较,ANP组胰腺组织内游离钙离子浓度均较SO组明显增高(1、4、8h时的t值分别=13.09、18.58、16.56,P值均=0.00),MT组较SO组略高,但较ANP组明显降低(1、4、8h时的τ值分别=-10.03、-11.75、-11.02,P值均=0.00).与SO组相比,ANP组CaMKⅡmRNA及蛋白表达水平均明显升高,MT对其表达有明显的抑制作用.结论 MT干预可抑制CaMKⅡ表达,从而减轻胰腺腺泡内钙超载,起到保护胰腺组织的作用.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 褪黑激素 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 钙 -
钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂对新生大鼠心房肌细胞钙超载的干预作用
目的 观察钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ, CaMK Ⅱ)抑制剂KN93对新生大鼠心房肌细胞钙负荷的影响,并对细胞CaMK Ⅱ的表达变化进行检测. 方法 新生大鼠心房肌细胞原代培养96 h,应用钙离子导入剂ionomycin(1.0 μmol/L)建立心房肌细胞钙超载模型,并在KN93 3种浓度(0.25、0.5、1.0 μmol/L)的干预下,以钙离子指示剂Fluo-3 /AM负载心房肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心房肌细胞内游离钙的变化;应用Western blot法检测CaMK Ⅱ表达的变化. 结果 ①细胞培养至第4天,免疫组织化学染色90%以上细胞α-肌动蛋白抗体阳性.②与对照组比较,钙离子导入剂ionomycin明显增加细胞内钙离子荧光值[(660.16±108.47) vs (376.12±57.57),P＜0.01];KN93对细胞内钙离子荧光值无明显影响(P＞0.05).③预先加入3种不同浓度KN93可显著降低ionomycin导致的细胞内钙离子荧光强度的增加幅度(P<0.01),与对照组比较差异也有统计学意义(P＜0.01).④钙超载组细胞CaMK Ⅱ表达较对照组明显增加(P<0.01);而KN93对细胞CaMK Ⅱ表达影响不明显.⑤不同浓度KN93预处理后,钙超载组细胞CaMK Ⅱ的表达显著降低(P<0.01). 结论 CaMK Ⅱ抑制剂KN93可降低ionomycin引发的大鼠心房肌细胞钙负荷,并下调细胞CaMK Ⅱ表达.
关键词： 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 肌细胞 心脏 钙 大鼠
