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高龄和青年大鼠骨髓间质细胞移植对缺血心脏心功能的影响
目的探讨高龄和青年大鼠自体骨髓间质细胞移植是否能改善心功能.方法从高龄和青年大鼠中获取骨髓间质细胞,部分细胞培养后克隆计数,其余培养时加以诱导.冠状动脉结扎后制作同源大鼠心肌梗死模型,3周后分为高龄细胞移植组、青年细胞移植组和对照组.5周后再次行心脏超声检查,以及检查细胞存活和疤痕区血管增生情况.结果与青年组相比,高龄组骨髓间质干细胞数目以及体外诱导后结蛋白表达率明显下降.移植的高龄细胞可以在疤痕区存活,诱导血管新生,但未发现心功能改善.结论高龄大鼠骨髓间质细胞移植未能发现可以改善梗死心肌的心功能,可能由于高龄骨髓间质细胞缺乏足够的干细胞数目和较低的诱导分化率.
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组织多普勒显像对肾上腹主动脉缩窄大鼠心脏形态及舒张功能的研究
目的 采用组织多普勒显像(TDI)评价Lewis大鼠肾上腹主动脉缩窄后心脏的舒张功能变化.方法 选取30只8周龄雄性Lewis大鼠,缩窄其肾上腹主动脉至0.8 mm,造成左室心肌肥厚模型,分别于腹主动脉缩窄术前和术后10 d、20 d、30 d、40 d进行二尖瓣环组织多普勒频谱和常规超声的测量.结果 大鼠心脏前后壁厚度随着随访时间的延长而增加,左室舒张末和收缩末内径也随之增大,左室射血分数(EF)及短轴缩短率(FS)呈下降趋势,以上指标差异均有统计学意义(P＜0.01),大鼠心脏表现为离心性肥厚.二尖瓣环TDI收缩期峰值(Sa)变化趋势不明显,并与EF值相关性较差(r=0.216,P=0.071).无论舒张早期峰值(Ea)、舒张晚期峰值(Aa)和Ea/Aa指标在随访中均无稳定的变化趋势,差异无统计学意义(P＞0.05).而唯有E/Ea一直呈上升趋势,并且经重复测量方差分析,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 Lewis肾上腹主动脉缩窄大鼠心脏变化特点主要表现为离心性肥厚,E/Ea值能敏感、稳定地反映大鼠舒张功能的变化过程.
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大鼠原位肝移植急性排斥反应中一氧化氮变化的意义
目的:探讨一氧化氮在大鼠肝移植急性排斥反应中的变化规律.方法:大鼠施行原位肝移植术:异基因移植未治疗组(Brown Norway-to-Lewis),异基因移植FK506(Tacrolimus)治疗组,异基因移植氨基胍治疗组,同基因移植对照组(Lewis-to-Lewis).结果:大鼠肝移植发生急性排斥反应时,血清亚硝酸盐和硝酸盐(Nitric and Nitrat,NO2- and NO3-)水平显著升高;给予氨基胍治疗后,血清NO2-和NO3-水平降至正常,移植肝的损害程度也明显减轻.结论:一氧化氮是大鼠肝移植急性排斥反应中的一种标志性物质,抑制一氧化氮的合成可减轻移植肝的损害程度.
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Lewis型至Brown Norway型大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立
目的:建立Lewis(LEN)型到Brown Norway(BN)型大鼠肝移植急性排斥反应模型并观察其排斥反应特点.方法:采用近交系雄性LEW大鼠为供体,BN大鼠为受体,改良"二袖套"法建立模型36例,术后第3、7和10天分别随机解剖8只受体大鼠,检测血清肝功能生化指标,观察肝脏病理组织学变化,剩余受体大鼠观察生存时间.结果:受体大鼠术后第3、7和10天的血清总胆红素分别为(8.75±1.98)μmol/L、(21.12±2.03)μmol/L和(53.63±4.24)μmol/L,丙氨酸转氨酶(ALT)分别为(291.88±6.83)U/L、(462.33±16.98)U/L和(906.25±68.55)U/L,两者术后均逐渐升高;受体大鼠术后第3天光镜下汇管区见混合性炎细胞浸润和静脉内皮炎,伴部分肝实质变性,排斥活动指数(RAI)为4～5;术后第7天排斥反应加重,并出现小胆管增生,RAI为5～7;术后第10天排斥反应严重,出现明显汇管区结构破坏,肝小叶消失,大量淋巴细胞和单核细胞浸润,静脉内皮炎明显,肝实质桥接坏死,RAI为7～9分;受体大鼠的临床表现及生存情况与病理变化一致.结论:LEW到BN大鼠组合有助于建立稳定可靠的肝移植急性排斥模型,且该模型的排斥反应特点与临床相似.
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Lewis大鼠骨髓间充质干细胞分离培养和鉴定
目的建立从Lewis大鼠骨髓中分离、培养间充质干细胞的方法,并对分离、培养的间充质干细胞进行鉴定.方法采用Percoll(1.073g/L)密度梯度分离和贴壁培养相结合的方法分离培养Lewis大鼠的骨髓间充质干细胞(MSC).MSC细胞鉴定:采用相差显微镜观察MSC的形态学特征;流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD29,CD90,CD34和CD45的表达率;苏丹Ⅳ染色检测MSC成脂细胞分化;碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测MSC成骨分化.结果原代培养的MSC于24 h后贴壁,48～72 h形成集落,12～15 d可达到80%～90%融合.第1代细胞表面标记物CD29,CD90,CD34和CD45的阳性率分别为80.41%,66.27%,2.73%,0.74%.第3代细胞表面标记物CD29,CD90,CD34和CD45的阳性率分别为89.91%,88.17%,0.81%,0.17%.细胞周期分析显示,第5代细胞G0/G1期细胞占68.9%,S+G2+M期为31.1%.用α-MEM培养液培养的第6代细胞部分分化为成骨和成脂细胞.结论采用Percoll(1.073g/L)密度梯度分离和贴壁培养相结合的方法能够成功分离和培养大鼠的MSC.第5代MSC细胞保持分化潜能.
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大鼠胃浆膜下间隙胰岛移植的存活率及其功能的实验研究
目的：探讨大鼠胃浆膜下间隙胰岛移植的可行性及其移植效果。方法应用Lewis近交系雄性大鼠，采用链脲菌素诱导糖尿病模型；同种系大鼠体外胰岛分离、纯化，将一定数量的胰岛植入糖尿病大鼠胃浆膜下间隙（胃组），同期将同等数量的胰岛植入肾被膜下间隙（肾组）作为对照，评估移植后糖尿病大鼠的血糖水平、腹腔葡萄糖耐量试验及胰岛移植物存活率。结果胰岛移植术后前3周，胃组和肾组内糖尿病大鼠的血糖水平较移植前均明显下降（P＜0．05），两组大鼠间血糖水平无差异、糖耐受功能良好（P＞0．05）；两移植部位的胰岛被免疫组织化学染色有效确认，移植胰岛周围有少量炎性细胞浸润，肾组织样本内胰岛周围的炎细胞浸润更明显。肾组和胃组糖尿病大鼠血糖水平分别于胰岛移植术后第5、4周开始升高。术后第6周两组大鼠血糖水平均升高且糖耐量减低，免疫组织化学染色检查显示，两移植部位内仅残余散在的胰岛细胞。结论胃浆膜下间隙胰岛移植的短期效果与肾被膜下胰岛移植相同，但其血糖控制效果比肾被膜下胰岛移植更佳，而其长期效果有待进一步证实。
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脱氢表雄酮对大鼠实验性自身免疫性神经炎的影响
目的 探讨脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)发病的影响及其机制.方法 随机将36只Lewis大鼠分为DHEA 0.5mg治疗组、2mg治疗组和对照组.治疗组于注射牛周围神经髓磷脂(BPM)抗原乳剂后第5天开始每日皮下注射DHEA,对照组皮下注射相同体积的DHEA溶媒.观察各组发病时间及临床评分,检查疾病高峰期坐骨神经组织病理及干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)阳性反应细胞,检测引流淋巴结和脾脏单个核细胞增殖反应,检测培养上清TNF-a、IFN-γ、白介素-10(IL-10)含量.结果 两种剂量DHEA治疗组均能延迟EAN发病时间(P均<0.05),减少坐骨神经炎性细胞浸润数目(P均<0.05)和IFN-γ、TNF-a阳性反应细胞数目(P均<0.05),抑制BPM刺激T淋巴细胞增殖(P均<0.05),降低培养上清中IFN-γ、TNF-a水平(P均<0.05).2mg治疗组疾病高峰期临床评分明显降低于对照组(P<0.05).各组间IL-10水平未显示明显差异(P>0.05).结论 DHEA可能通过抑制自身反应性T淋巴细胞增殖和促炎性细胞因子过度表达减轻EAN病情,2mg治疗组具有更明显的免疫治疗效果.
