首页 > 文献资料
-
下调LSD1表达对于外周血Th1/Th2分化格局的影响
目的 探讨shLSD1转染人外周血CD4+T细胞后,LSD1的脱甲基酶活性对辅助性T细胞亚群1和亚群2(Th1/Th2)分化格局的影响.方法 收集并利用磁珠分离纯化人外周血CD4+T细胞,PHA刺激活化48 h后,shLSD1和化学抑制剂TCP抑制2种方法抑制LSD1的表达,采用流式细胞术和RT-PCR对人外周血T淋巴细胞亚群及CD4+T细胞功能亚型Th1、Th2的代表细胞因子IFN-γ、IL-4进行检测.结果 体外分离培养外周血CD4+T细胞并用转染shLSD1或TCP处理48 h后,流式细胞对胞内基因表达检测显示,shLSD1和TCP组细胞IFN-γ+T细胞比例(26.13±1.89)％和(27.01±1.18)％明显高于对照组(14.67±0.65) ％(P ＜0.05),而IL-4+T细胞比例与对照组无显著差异(P＞0.05);RT-PCR检测显示,shLSD1和TCP组IFN-γ mRNA表达明显高于对照组(P＜0.05),IL-4基因表达则没有改变(P＞0.05).结论 LSD1可以引起CD4+T细胞向Th1/Th2分化方向改变,促进Th1方向分化,对Th2方向无明显影响.
-
LSD1影响CD4+T细胞Th1/Th2分化的机制研究
目的 探讨LSD1的脱甲基酶活性对人外周血CD4+T细胞Th 1/Th2分化格局的影响及其分子机制.方法 anti-CD3/28刺激活化人外周血CD4+T细胞48 h后,shLSD1和反苯环丙胺(TCP)抑制LSD1的表达,流式细胞术检测细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4的表达情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测不同浓度TCP对T细胞IFN-γ、IL-4、T-bet mRNA表达的影响;Western blot观察LSD1、T-bet、STAT1和pSTAT1蛋白表达情况.结果 shLSD1和TCP组细胞IFN-γ+T细胞比例[(26.13±1.89)％和(27.01±1.18)％]明显高于对照组[(14.67±0.65)％,(P＜0.05)],而IL-4+T细胞比例与对照组无显著变化(P＞0.05); RT-PCR检测显示,shLSD1和TCP组IFN-γ mRNA表达明显高于对照组(P＜0.05),IL-4基因表达则没有改变(P＞0.05);转染shLSD1或TCP处理引起T-bet、pSTAT1表达明显高于对照组(P＜0.05),而STAT1表达无明显变化(P＜0.05).结论 下调LSD1表达可以促进人CD4+T细胞向Th1方向分化,对Th2方向细胞无影响.其分子机制涉及T-bet/STAT1信号通路.
-
PCPA对于外周血CD4+T细胞Th1/Th2分化失衡影响的初步研究
研究PCPA暴露对于外周血CD4+T细胞向Th1/Th2分化的影响及其分子机制.分离并培养人外周血CD4+T细胞.采用MTT、流式细胞术、QRT-PCR和酶联免疫吸附试验法(ELISA)对PCPA组和对照组细胞中Th1、Th2亚型的代表细胞因子IFN-γ、IL-4进行检测.结果PHA刺激48 h后,ELISA检测细胞培养上清显示,PCPA组上清中IFN-γ分泌水平明显高于对照组(P＜0.05),而IL-4分泌量较对照组略有增加；RT-PCR检测显示,PCPA组IFN-γ基因表达高于对照组1.69倍,IL-4基因表达没有显著改变；流式细胞技术对胞内因子检测显示,PCPA组IFN-γ+T细胞比例(46.1％)明显高于对照组(32.6％),2组间有统计学意义(P＜0.05),而IL-4+T细胞比例与对照组无显著变化(48.1％和46.5％).PCPA组的IFN-γ+T细胞与IL-4+T细胞比值是对照组的1.53倍.结论PCPA暴露(40μmol/L)导致CD4+T细胞LSD1的H3K4(2m)脱甲基化酶活性被抑制,引起Th1/Th2分化平衡向Th1方向的“漂移”.
-
组蛋白去甲基化酶 LSD1抑制剂对 MLL-ENL白血病细胞诱导分化的研究
目的：研究组蛋白去甲基化酶 LSD1抑制剂对 MLL-ENL 亚型白血病细胞的影响，为 LSD1成为 MLL-ENL 亚型白血病的治疗新靶点提供证据。方法首先采用 LSD1酶活性抑制剂反式环苯丙胺(TCP )处理细胞，通过细胞增殖、克隆形成实验和瑞士吉姆萨染色等实验技术，检测 LSD1抑制剂处理对 MLL-ENL 白血病细胞的影响；进一步采用蛋白质印迹和 RT-PCR 实验技术，探索 LSD1抑制在 MLL-ENL 白血病细胞中的作用机制。结果 LSD1抑制剂处理显著降低 MLL-ENL 白血病细胞的增殖和克隆形成能力，并诱导细胞分化；LSD1抑制剂处理后，组蛋白修饰 H3K4me2整体水平升高，致癌基因 Bmi1表达显著降低并且分化相关基因的表达被激活。结论LSD1抑制剂处理促进 MLL-ENL 白血病细胞分化并抑制白血病细胞生长，可能与组蛋白修饰 H3K4me2改变后抑制关键致癌基因和激活分化基因有关。
