首页 > 文献资料
-
采用ChIP-chip技术分析大鼠肺成纤维细胞转分化前后全基因组蛋白H3K4三甲基化水平的改变
目的：研究经二氧化硅（SiO2）染毒的肺成纤维细胞（LF）转分化前后全基因组蛋白H3赖氨酸4（H3K4）三甲基化（met3）水平的改变。方法原代培养大鼠肺泡巨噬细胞（AM）和LF，采用transwell共培养，建立共培养模型，用100 mg·L-1游离SiO2粉尘染毒AM 24 h，收集LF细胞，免疫组织化学法对转分化后的LF进行表型鉴定。采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术（ChIP-chip）对LF全基因组蛋白H3K4met3进行高通量筛选，采用染色质免疫共沉淀-实时荧光定量聚合酶联反应技术（ChIP-qPCR）验证芯片结果，采用定量逆转录聚合酶联反应技术（qRT-PCR）检测H3K4出现显著差异的mRNA表达水平。结果通过对经SiO2染毒前后LF全基因组蛋白H3K4met3水平的对比，共筛选出1815个基因存在H3K4显著性差异（Cy3/Cy5比值>2.0或<0.5，NimbleScan V2.5软件），其中518个基因出现H3K4met3程度增高，1297个基因H3K4met3程度降低。随机挑选2个差异表达基因nfib和kpna3，以ChIP-qPCR和qRT-PCR方法验证，取得与CpG岛芯片一致的结果。结论经SiO2染毒的LF转分化前后全基因组蛋白H3K4met3水平存在显著改变。ChIP-chip技术有利于进一步揭示矽肺纤维化发生的分子机制，有助于发现新的蛋白标志物和基因干预靶点。
-
系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞组蛋白H3赖氨酸4三甲基化水平的研究
目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)组蛋白H3赖氨酸4(H3K4)三甲基化(Me3)水平.方法 梯度密度离心法分离10例SLE活动期患者、7例SLE稳定期患者和8名健康者的PBMCs,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(CHIP-chip)在全基因组范围内对SLE患者及健康者的PBMCs组蛋白H3K4me3进行高通量的筛选.染色质免疫共沉淀一实时定量聚合酶链反应(ChlP-qPCR)验证芯片结果.定量反转录一聚合酶链反应(qRT-PCR)检测H3K4me3显著差异基因的mRNA表达水平.结果 10例SLE活动期患者与健康对照相比较,鉴定出413个基因存在H3K4me3显著差异,其中137个基因显示H3K4me3程度增高,276个基因H3K4me3程度降低;7例SLE稳定期患者与健康对照相比较,发现393个基因存在H3K4me3表达差异,其中有112个基因H3K4me3程度增高,281个基因H3K4me3程度降低.ChIP-qPCR验证结果与CpG岛芯片的结果相一致.结论 SLE患者与健康者之间的PBMCs存在组蛋白H3K4me3显著改变.ChIP-chip技术有利于进一步揭示SLE分子机制,发现新的治疗靶点.
-
组蛋白去甲基化酶 LSD1抑制剂对 MLL-ENL白血病细胞诱导分化的研究
目的：研究组蛋白去甲基化酶 LSD1抑制剂对 MLL-ENL 亚型白血病细胞的影响，为 LSD1成为 MLL-ENL 亚型白血病的治疗新靶点提供证据。方法首先采用 LSD1酶活性抑制剂反式环苯丙胺(TCP )处理细胞，通过细胞增殖、克隆形成实验和瑞士吉姆萨染色等实验技术，检测 LSD1抑制剂处理对 MLL-ENL 白血病细胞的影响；进一步采用蛋白质印迹和 RT-PCR 实验技术，探索 LSD1抑制在 MLL-ENL 白血病细胞中的作用机制。结果 LSD1抑制剂处理显著降低 MLL-ENL 白血病细胞的增殖和克隆形成能力，并诱导细胞分化；LSD1抑制剂处理后，组蛋白修饰 H3K4me2整体水平升高，致癌基因 Bmi1表达显著降低并且分化相关基因的表达被激活。结论LSD1抑制剂处理促进 MLL-ENL 白血病细胞分化并抑制白血病细胞生长，可能与组蛋白修饰 H3K4me2改变后抑制关键致癌基因和激活分化基因有关。
