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PinX1基因在肾癌组织的表达及临床意义
目的 分析抑癌基因PinX1在肾癌中的表达,探讨PinX1在肾癌发生、发展和预后中的作用及临床意义.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测56例肾癌组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶催化亚基(hTERT)的mRNA表达水平,同时应用免疫组化方法检测PinX1蛋白表达水平,分析PinX1表达与肾癌分期、分级及临床特征之间的关系.结果 PinX1表达与肾癌组织分化、临床分期和淋巴转移之间有显著相关性(P＜0.05),与hTERT表达呈负相关.PinX1在肾癌和癌旁表达具有显著性差异(P＜0.05).肾癌分期分级越高,PinX1表达越低,有淋巴结转移的PinX1表达要低于无淋巴结转移(P＜0.05).结论 PinX1的下调可能与肾癌形成、转移过程中端粒酶激活及维持机制有关.检测PinX1的表达水平对评价肾癌恶性程度、转移潜能和预后评估均有重要的临床价值.
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端粒酶调控因子PinX1抑制肝癌细胞增殖与侵袭
目的 探讨端粒酶调控因子PinX1对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 构建稳定表达PinX1的肝癌细胞PinX1-7721(实验组)及其对照细胞VECTOR-7721(对照组).RT-PCR法检测PinX1 mRNA的表达,CCK-8法和平板克隆形成实验检测肝癌细胞的增殖能力和克隆形成能力,Transwell实验检测肝癌细胞的侵袭能力.实验数据比较采用t检验.结果 实验组细胞PinX1 mRNA表达量为(13.9±2.0)×10-3,明显高于对照组的(1.1±0.2)×10-3(t=10.98,P<0.05).实验组细胞1~7 d的A450值分别为0.260±0.004、0.340±0.008、0.450±0.040、0.500±0.020、0.730±0.030、1.350±0.040、1.640±0.050,明显低于对照组的0.280±0.009、0.410±0.007、0.680±0.044、0.730±0.029、0.850±0.070、1.700±0.020、2.080±0.280(t=-5.82,-12.99,-6.36,-5.96,-28.42,-18.98,-5.08;P<0.05).平板克隆实验结果显示实验组细胞克隆形成数目为(143±32)个,明显低于对照组的(305±25)个(t=-6.91,P<0.05).Transwell实验结果显示实验组细胞穿膜数目为(230±16)个,明显低于对照组的(650±30)个(t=-21.40,P<0.05).结论 PinX1可抑制肝癌细胞的增殖和侵袭能力.
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皮肤肿瘤患者不同组织中PinX1人端粒酶逆转录酶mRNA的表达意义
目的 探讨基底细胞癌(BCC)、鳞状细胞癌(SCC)和日光性角化病(AK)组织中PinX1蛋白和人端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA的表达及其意义.方法 选取2010年3月至2014年9月间在西安交通大学第一附属医院就诊的49例皮肤肿瘤患者作为观察组,其中BCC患者16例、SCC患者18例、AK患者15例.另选取15例正常人皮肤组织作为对照组.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测BCC、SCC及AK患者组织和15例正常人皮肤组织中PinX1和hTERT的mR-NA表达水平,并检测其中的端粒酶活性.结果 PinX1 mRNA在3种不同皮肤肿瘤组织中的相对表达量较正常对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05),但在3种不同皮肤肿瘤组织之间的相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).hTERT mRNA在3种不同皮肤肿瘤组织中的相对表达量较正常对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05),但在3种不同皮肤肿瘤组织之间的相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PinX1的下调及hTERT上调可能与皮肤肿瘤形成过程中端粒酶激活性及维持机制有关,二者在基底细胞癌、鳞状细胞癌细胞凋亡方面可能存在拮抗作用,检测PinX1和hTERT的表达水平,对评价皮肤肿瘤预后有重要的临床价值.
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PinX1对食管癌细胞放射敏感性及活性氧水平的影响研究
目的 研究端粒酶抑制因子X1(PinX1)对食管癌细胞放射敏感性及活性氧(ROS)水平的影响.方法 食管癌细胞分为对照组(未做细胞转染)、照射组(8 GyX射线)、PinX1组(转染pDsRed1-PinX1至过表达)、照射+PinX1(转染pDsRed1-PinX1至过表达后8GyX射线照射).MTT测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)的活化水平,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法测定细胞中ROS水平,集落形成实验测定放射敏感性.构建EC9706细胞致裸鼠皮下移植瘤模型,每组20只,小鼠每4天接受5次8 Gy剂量的γ射线局部照射,分析异种移植小鼠模型中PinX1过表达与放射敏感性的关系.结果 与对照组相比,照射组和PinX1组细胞的存活率从100％降低至(67.92±4.71)％和(83.14±4.01)％,差异有统计学意义(t=9.433、4.957,P＜0.05),细胞凋亡率从(6.47±1.46)％升高到(44.38±4.16)％和(25.42±2.78)％,差异有统计学意义(t=12.882、6.439,P＜0.05),细胞中Caspase-3活化水平升高(t=6.655、2.531,P＜0.05),Caspase-9的活化水平升高(t=3.775、3.088,P＜0.05),细胞内ROS水平升高(t=12.110、7.339,P＜0.05).与照射组相比,照射+PinX1组细胞存活率从(67.92±4.71)％下降至(52.73±5.58)％,差异有统计学意义(t=8.942,P＜0.05),细胞凋亡率从(44.38±4.16)％升高至(55.29±4.98)％,差异有统计学意义(t=3.707,P＜0.05),细胞中Caspase-3活化水平升高(t=15.435,P＜0.05),Caspase-9的活化水平也升高,(t=17.990,P＜0.05),ROS水平升高(t=4.526,P＜0.05).过表达PinX1的EC9706细胞放射敏感性增加,增敏比为1.408.过表达PinX1的细胞裸鼠移植瘤体积明显减小.结论 PinX1抑制食管癌细胞增殖,诱导食管癌细胞凋亡,增加食管癌细胞放射敏感性.
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端粒和端粒酶相互作用蛋白在真核细胞中的表达
目的 从人肝癌细胞系HepG2中获得PinX1基因,构建真核表达载体,转染Hek293细胞.方法 采用RT-PCR技术从HepG2中扩增PinX1,克隆入真核表达载体pcDNA3,重组质粒转染Hek293细胞,免疫组化法检测蛋白的表达.结果 RT-PCR方法扩增获得PinX1基因,构建真核表达载体pc DNA3-PinX1-vsv重组质粒转染Hek 293细胞,免疫组化检测结果表明在细胞核内有PinX1表达.结论 成功获得PinX1基因,构建的重组载体可在Hek 293细胞内表达,为探索PinX1在端粒、端粒酶调控中的作用机制奠定基础.
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PinX1基因真核表达载体的构建及其在Hek293细胞中的表达
目的 确定PinX1在转染该基因的真核细胞Hek293内的表达定位.方法 采用RT-PCR技术从HepG2中扩增Pinx1,克隆入真核表达栽体pcDNA3-vsv,重组质粒转染Hek293细胞,免疫细胞化学法检测蛋白质的表达.结果 从HepG2细胞中获得Pinx1基因,成功构建真核表达载体pcDNA3-Pinx1-vsv,将其转染Hek293细胞后,免疫细胞化学法检测结果表明PinX1在细胞核内表达.结论 成功获得PinX1基因,转染后在Hek293细胞核内表达,为探索Pinx1在端粒、端粒酶调控中的作用机制奠定基础.
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Pinx1、hTERT mRNA在三种皮肤肿瘤组织中的表达及意义
目的 探讨内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶逆转录酶hTERT在基底细胞癌、鳞状细胞癌、日光性角化病组织中的表达及其意义.方法 实时定量PCR检测实验组36例3种皮肤肿瘤组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶逆转录酶hTERT的mRNA表达水平,并以15例正常人皮肤组织作为对照组.结果 实验组PinX1基因的mRNA表达水平(2.53±1.57)低于对照组(4.25±2.02),差异有统计学意义(t=3.273,P＜ 0.05);hTERT基因的mRNA表达水平(6.37±3.81)明显高于对照组(1.62±0.99),差异有统计学意义(t=6.927,P＜0.05);Pinx1的表达水平与hTERT表达的相关性无统计学意义(P＞0.05).结论 PinX1的下调及hTERT上调可能与3种皮肤肿瘤形成过程中端粒酶激活及维持机制有关.
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PinX1基因过表达对神经胶质瘤细胞增殖的影响
目的：探讨PinX1基因过表达对神经胶质瘤细胞株增殖的影响及其分子作用机制。方法利用pEG-FP－C3－PinX1过表达质粒和pEGFP－C3对照组质粒，分别转染神经胶质瘤U87和U251细胞，CCK8细胞增殖实验分析PinX1过表达后对2种神经胶质瘤细胞增殖的影响，流式细胞仪分析2种神经胶质瘤细胞周期的变化， Western blot检测PinX1蛋白c、yclin 家族蛋白、CDK抑制剂蛋白及人端粒酶逆转录酶（ hTERT）的表达水平。结果转染pEGFP－C3－PinX1过表达质粒可以有效增加神经胶质瘤U87和U251细胞中PinX1蛋白的表达，PinX1过表达后抑制细胞的增殖，PinX1过表达后下调hTERT的表达，提高 p27的表达，降低cyclin D1和cyclin E的表达，使细胞周期停滞在G1期。结论 pEGFP－C3－PinX1过表达质粒可以有效地提高神经胶质瘤U87和U251细胞中PinX1的表达，PinX1过表达后可能通过影响cyclins、CDK抑制剂蛋白以及hTERT的表达从而使细胞周期停滞在G1期，终显著抑制神经胶质瘤细胞的增殖。
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端粒结合蛋白PinX1在大肠癌中的表达及其临床意义
目的:研究端粒结合蛋白PinX1在大肠癌组织中的表达及临床意义.方法:收集共86例接受根治性手术的大肠癌病人术后标本,运用免疫组化的方法(IHC)检测标本中PinX1的表达并分析PinX1的表达与病人临床病理因素及预后的关系.结果:与正常结肠上皮相比,PinX1在大肠癌组织中呈低表达.生存分析发现PinX1的低表达预示着病人的不良预后,多因素分析揭示PinX1的表达是预测病人预后的独立因素.结论:研究揭示PinX1是大肠癌病人预后的独立预测因子,其可作为临床大肠癌患者预后分析判断依据之一.
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Plk1磷酸化修饰PinX1对宫颈癌HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响
目的:探讨有丝分裂激酶Plk1通过磷酸化修饰PinX1调控宫颈癌HeLa细胞有丝分裂及凋亡的作用.方法:运用酵母双杂交、免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶沉降实验了解Plk1与PinX1在体内外是否能够相互结合采用;采用体内外磷酸化实验明确Plk1是否能够磷酸化修饰PinX1;采用免疫荧光染色及流式细胞术检测PinX1磷酸化对HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响.结果:Plk1与PinX1在体内外均能结合;Plk1在体内外均可磷酸化修饰PinX1;过量表达PinX1的非磷酸化突变体能够阻碍HeLa细胞的有丝分裂进程;过量表达PinX1的磷酸化突变体导致细胞凋亡的增加(F=76 554.133,P<0.001).结论:Plk1与PinX1相互结合并通过磷酸化修饰PinX1阻碍细胞有丝分裂进程及促进细胞凋亡.
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PinX1在皮肤基底细胞癌组织的表达及意义
目的 探讨皮肤基底细胞癌组织中PinX1的表达水平及其意义.方法 收集我院30例皮肤基底细胞癌标本及15例正常皮肤组织.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法分析皮肤基底细胞癌组织及正常组织PinX1表达水平的变化.结果 Real-time PCR显示基底细胞癌组织中PinX1 mRNA相对表达量(3.56±1.45)低于正常皮肤组织中PinX1 mRNA相对表达量(12.45 ±3.12),差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学结果亦显示基底细胞癌组织中PinX1阳性表达率(20.0％)低于正常皮肤组织(64.7％,x2=14.295,P＜0.01),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PinX1在皮肤基底细胞癌组织中低表达或不表达,提示PinX1基因在基底细胞癌的发生发展过程中可能起负调控作用.
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Pinx1在口腔鳞癌中的表达及意义
目的:研究Pinx1在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及意义.方法:免疫组织化学染色检测Pinx1在60例OSCC和20例正常口腔黏膜组织(NOM)中的表达情况.结果:Pinx1在NOM上皮中高表达,高表达率为100.00％,在OSCC中高表达率为65.00％,Pinx1高表达率明显低于NOM(P＜0.05),随着分化程度的降低,Pinx1表达呈降低趋势(P＜0.05),伴有淋巴结转移的病例中Pinx1表达水平显著低于不伴有淋巴结转移的OSCC(P＜0.05),Pinx1的表达情况与患者性别年龄无关.结论:Pinx1可能与OSCC的发生、发展及转移有关.
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原发性肝细胞肝癌中PinX1的表达及其临床意义
目的 探讨Pin2/TRF1结合蛋白X1 (PinXl)在原发性肝细胞肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集我院43例原发性肝细胞肝癌患者的癌和癌旁正常组织以及病例资料,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测PinX1的mRNA表达水平,并分析表达差异与临床病理特征及患者预后的关系,卡方检验分析率的差异,应用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox风险比例回归模型筛选预后影响因素.结果 在43对癌和癌旁正常组织标本中,29例(67.4％)肝癌组织中的PinX1 mRNA呈低表达,而相应的癌旁组织只有14例(32.6％)呈低表达,差异具有统计学意义(P＜0.05);PinX1 mRNA表达水平与患者年龄具有相关性,生存分析和Cox单因素、多因素风险比例回归模型表明癌组织中HnX1 mRNA低表达是肝癌患者总生存期的独立预后因子(HR=5.057,P=0.005;HR=3.761,P=0.006).结论 PinX1可能是原发性肝细胞肝癌中潜在的抑癌基因,其表达下调在肝癌的发生发展过程发挥重要作用,并可能成为判断肝癌患者预后的重要的生物学指标.
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重组质粒pDsRed1-C1-PinX1的建立及其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达
目的 构建PinX1真核表达载体,观察PinX1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和增殖的影响.方法 重组质粒转染MCF-7细胞并筛选稳定表达系；用Real-time PCR检测PinX1基因mRNA的表达；MTT法检测转染前后细胞生长变化；平板克隆形成试验检测PinX1对MCF-7集落形成能力的影响.结果 构建了真核表达载体PDsRed1-C1-PinX1的稳定表达系；转染后乳腺癌MCF-7细胞生长明显减缓,集落形成能力降低.结论 PinX1基因可抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长和增殖.
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宫颈鳞癌组织中HPV E6与野生型p53和PinX1表达的关系及其临床意义
目的 探讨宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁及正常宫颈组织中HPV E6、野生型p53及PinX1表达及其关系.方法 收集第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科2013年3月至2014年2月17例宫颈鳞癌患者宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁组织,选取10例正常宫颈组织作为对照.采用Real-TimePCR、Western blot、免疫组织化学方法检测3组组织中HPV E6、野生型p53和PinX1的mRNA、蛋白的表达及分布.结果 宫颈鳞癌组织中mRNA及蛋白水平结果均显示HPV E6的表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.01),而野生型p53和PinX1的表达水平明显低于癌旁及正常组织(P＜0.05).相关性分析提示:宫颈鳞癌组织中野生型p53(R=-0.605,P＜0.01)和PinX1(R=-0.496,P＜0.05)表达水平的下降与HPV E6的表达水平升高存在负相关,野生型p53与PinX1的表达呈正相关(R=0.824,P＜0.01).结论 宫颈鳞癌组织中HPV E6表达上调与野生型p53、PinX1的表达负相关,PinX1的表达与野生型p53密切相关,HPV E6可能通过抑制野生型p53、PinX1导致宫颈鳞癌的发生、发展.
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基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1、hTERT的表达及意义
目的 分析基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1及hTERT的表达,探讨PinX1、hTERT在基底细胞癌、鳞状细胞癌发生、发展中的作用.方法 应用实时定量PCR检测13例基底细胞癌、22例鳞状细胞癌组织中PinX1、hTERT mRNA表达水平,应用免疫组化SP法检测PinX1蛋白和hTERT蛋白在30例基底细胞癌、46例鳞状细胞癌组织中的表达.结果 基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1 mRNA表达水平均低于正常组,基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中hTERT mRNA表达水平均明显高于正常组,PinX1蛋白在基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中的阳性表达率明显低于正常组,hTERT蛋白在基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中的阳性表达率明显高于正常组,差异均有统计学意义(P＜0.05);基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1蛋白和hTERT蛋白的阳性表达呈负相关(r=-0.460,P＜0.05).结论 PinX1和hTERT参与了基底细胞癌、鳞状细胞癌的发生、发展,二者在基底细胞癌、鳞状细胞癌细胞凋亡方面可能存在拮抗作用.
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PinX1和hTERT在基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、日光性角化病皮损中的检测
目的 检测基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1和人端粒酶逆转录酶hTERT的水平.方法 用免疫组化SP法分别检测PinX1和hTERT蛋白在30例基底细胞癌、25例皮肤鳞状细胞癌、21例日光性角化病及17例正常皮肤组织中的表达.结果 PinX1蛋白在基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中的阳性表达率明显低于正常组,差异有统计学意义(P均＜0.05);基底细胞癌与日光性角化病、鳞状细胞癌组织PinX1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P均＞0.05);鳞状细胞癌组织PinX1蛋白阳性表达率低于日光性角化病,差异有统计学意义(P＜0.05).hTERT蛋白在基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中的阳性表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(P均＜0.05);基底细胞癌、皮肤鳞癌及日光性角化病组织之间hTERT蛋白阳性表达率差异均无统计学意义(P均＞0.05).基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中PinX1和hTERT蛋白的阳性表达呈负相关(r=-0.451,P＜0.05).结论 PinX1和hTERT蛋白参与了基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病的发生、发展.二者在抑制细胞凋亡方面可能存在拮抗作用.
