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补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓 ERRα和 PGC-1αmRNA 表达的影响
目的：探讨补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓组织中雌激素相关受体α（ ERRα）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α（ PGC-1α） mRNA表达的影响。方法40只7月龄SD雌性大鼠随机分成假手术组、模型组、中药组（补肾健脾化瘀方）、阿伦膦酸钠组。治疗12w后，小动物双能X线检测左侧股骨骨密度，HE染色观察胫骨近端骨形态，QPCR检测骨髓组织中ERRα、PGC-1αmRNA表达水平检测。结果模型组骨密度低于假手术组（ P＜0.05）；中药组与阿伦膦酸钠组骨密度高于模型组（P＜0.05），而假手术组、中药组与阿伦膦酸钠组之间无统计学差异。与假手术组相比，模型组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平上升（P＜0.05），PGC-1αmRNA表达水平下降（P＜0.05）。予以药物干预后，与模型组相比，中药组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平下降（P＜0.05），PGC-1αmRNA表达水平上升（P＜0.05）；而阿伦膦酸钠组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平下降（P＜0.01），PGC-1αmRNA表达水平虽呈现增高的趋势，但无统计学差异（P＞0.05）。结论补肾健脾化瘀方可能是通过提高骨髓组织中PGC-1αmRNA表达水平，降低ERRαmRNA表达水平，从而提高去势大鼠骨密度。
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ERRα/PGC-1α介导的信号通路在妇科恶性肿瘤中的研究进展
雌激素相关受体α (estrogen-related receptorα,ERRα)属核受体家族成员,是一类非配体依赖性激活的孤儿核受体,ERRα受到转录共活化因子过氧化物酶体增殖物受体γ共活化因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α)的活性调节,参与了细胞增殖、分化发育、癌变、胞内信号传导等过程.近年来多项研究表明ERRα/PGC-1α与肿瘤细胞的能量代谢、血管形成、侵袭转移等过程密切相关,但其在妇科恶性肿瘤中的具体作用机制尚不明确.本文就ERRα/PGC-1α信号参与妇科恶性肿瘤发生机制的研究进展进行综述.旨在为临床后续的抗肿瘤治疗提供理论依据.
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雌激素相关受体α与雌激素受体α通路相关性研究
目的:探讨雌激素相关受体α(estrogen-related receptorα,ERRα)与雌激素受体α(estrogen receptors alpha,ERα)经典通路的关系.方法:采用蛋白质印迹法观察雌二醇(E2)、ICI182、780及XCT790对MCF-7细胞中ERRα、ERα和TFF1蛋白表达的影响；Real-time RT-PCR检测MCF-7细胞中ERRα、ERα和TFF1 mRNA表达水平的变化.结果:E2诱导后ERα由(100.0±0.0)％增加至(240.0±27.0)％,ERRα由(100.0±0.0)％增加至(244.2±35.9)％,TFF1mRNA由(100.0±0.0)％增加至(201.7±21.6)％；ERα蛋白的表达由(100.0±0.0)％增加至(128.4±5.3)％,ERRα蛋白的表达由(100.0±0.0)％增加至(157.3±5.6)％,TFF1蛋白的表达由(100.0±0.0)％增加至(133.2±7.1)％,表明E2可上调这3种基因的表达.ICI182、780作用后ERα、ERRα和TFF1 mRNA表达量分别为(133.6±6.9)％、(168.1±26.8)％和(138.9±12.9)％,蛋白表达量分别为(84.2±5.0)％、(100.0±7.5)％和(84.9±5.7)％,表明ICI182、780可抑制E2对ERRα、ERα和TFF1的诱导作用.XCT790作用后ERRα和TFF1 mRNA表达量分别为(136.8±28.2)％和(140.4±11.4)％,ERα、ERRα和TFF1蛋白表达量分别为(76.4±5.3)％、(90.7±6.9)％和(76.3±6.6)％,表明ICI182、780和XCT790均对E2诱导的ERα、ERRα、TFF1 mRNA和蛋白上调有抑制作用.ICI182、780与XCT790联合作用后,ERα、ERRα和TFF1 mRNA表达量分别为(98.4±17.2)％、(108.7±8.8)％和(95.1±21.6)％,蛋白表达量分别为(58.2±6.7)％、(63.2±6.0)％和(57.1±5.9)％,表明两种阻断剂联合作用对这种上调的抑制作用大于二者单独的抑制作用.结论:E2对ERRα的诱导作用是通过ER介导的,将ERα和ERRα联合应用作为分子生物学指标及靶标,对乳腺癌内分泌治疗策略的实施可能有其临床意义.
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XCT790通过下调雌激素相关受体α的表达抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖
为探讨雌激素相关受体α (ERRα)的特异性反向激动剂XCT790对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及相关分子信号传导机制,采用原代培养大鼠胸主动脉VSMCs,以胎牛血清(FBS)刺激VSMCs增殖,分别加入不同浓度的XCT790,以CCK-8试剂检测XCT790对VSMCs增殖的影响;以RT-PCR考察ERRα、PGC-lα、OPN和MCAD的mRNA表达水平;以Western blotting检测ERRα、ERK2及p-ERKl/2蛋白表达水平;以ELISA法检测VEGF蛋白水平.结果显示,XCT790对VSMCs增殖的抑制作用在5～20 μmol·L-1剂量范围内呈显著剂量依赖性,在10～20 μmol·L-1剂量范围内呈显著时间依赖性;且5～20 μmol·L-1 XCT790能明显下调ERRα与p-ERK1/2水平(P＜0.05,P＜0.01).提示:XCT790可通过下调ERRα及其靶基因转录,进而抑制ERK途径来抑制大鼠VSMCs增殖.
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雌激素相关受体α特异性拮抗剂XCT790对H22荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用
目的 研究雌激素相关受体α(ERRα)特异性拮抗剂——XCT790对2种H22荷瘤小鼠模型的体内抗肿瘤作用.方法 建立H22 腹水瘤和实体瘤小鼠模型,按体重将模型小鼠随机分为 5 组:模型组,对照组(环磷酰胺: 30 mg· kg-1),低、中、高3个剂量实验组(XCT790:2,4,6 mg· kg-1).各组用腹腔注射给药,给药体积为20 mL· kg -1,连续给药7 d.记录腹水量、实体瘤重,计算肝、脾、肾系数.结果 给药后,腹水瘤模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组的腹水量分别为( 6.17 ±3.04 ), ( 3.28 ±1.62 ), ( 3.60 ±1.67 ), (4.67 ±2.57),(4.73 ±2.66)mL,对照组和低剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实体瘤模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组的瘤重分别为(2.53 ±0.39 ),(1.25 ±0.45 ),(1.27 ±0.61 ),(1.14 ±0.56 ), (1.24 ±0.39)g,对照组和低、中、高3个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).腹水瘤、实体瘤小鼠的肝、脾、肾系数组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 XCT790对H22荷瘤小鼠具有一定的抗肿瘤作用,对肝与脾和肾系数的影响较小.
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雌激素相关受体α调节剂细胞筛选模型的建立及应用
目的:建立一种筛选评价雌激素相关受体α(estrogen-related receptorα,ERRα)调节剂的细胞模型,并用于计算机辅助设计、人工合成的化合物样品的评价.方法:用pCMV-hERRα,3×ERRE-Luc及pRL-TK共同转染人胚肾细胞HEK-293,加入阳性药XCT790或筛选化合物孵育,分别检测HEK-293中萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶的活性,建立基于受体-应答元件的ERRα调节剂细胞筛选模型,用Z'因子评价本模型的稳定性,并测试了83个化合物对ERRα转录调节活性.用CCK-8检测DLE2-24对乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制效应,用RT-PCR考察DLE2-24对MCF-7中ERRα靶基因SOD2及VEGF的mRNA水平的影响.结果:成功建立ERRα-ERRE-Luc基因瞬时共转染模型,阳性药XCT790的IC50为0.24μmol·L-1,Z'因子为0.68,信号/本底为20.7.应用本模型筛选出15个ERRα反向调节剂.其中,DLE2-24剂量依赖性地抑制MCF-7的增殖,显著下调了ERRα下游靶基因SOD2及VEGF的mRNA水平.结论:本研究成功建立了一种高效、可靠的ERRα调节剂细胞筛选模型,适用于ERRα调节剂的发现与评价.
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雌激素及雌激素受体拮抗剂对人乳腺癌细胞MCF-7中 雌激素相关受体表达的影响
目的 通过研究17β-雌二醇(17β-E2)及雌激素受体拮抗剂ICI182,780对人乳腺癌细胞MCF-7中雌激素相关受体(estrogen-related receptor, ERRα)表达的影响，初步探讨ERRα在乳腺癌的发生发展过程中的作用及其与雌激素受体（estrogen receptor，ER）信号通路的关系。方法 调整细胞密度为1×106/ml,分别加入DMSO(0.1％)+乙醇(0.1％)（溶剂对照）、17β-E2(1×10-8 mol/L)、 17β-E2(1×10-8 mol/L)+ICI182,780( 1×10-6 mol/L)作用于细胞24h，阴性对照组细胞不作任何处理。采用实时定量PCR法检测ERRα mRNA的表达水平，采用免疫细胞化学检测方法及Western Blotting方法检测ERRα蛋白的表达水平。结果 与溶剂对照组比较，17β-E2单独染毒组和17β-E2+ICI182,780联合染毒组MCF-7细胞ERRαmRNA及蛋白表达升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；而阴性对照组MCF-7细胞ERRα mRNA及蛋白表达基本无差异(P＞0.05)。17β-E2+ICI182,780联合染毒组MCF-7细胞ERRα mRNA及蛋白表达低于17β-E2单独染毒组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 雌激素可通过ERα通路介导ERRα mRNA及蛋白的上调；从而诱导下游调节基因的表达，引起乳腺癌细胞的增殖；而ER阻断剂ICI182,780可阻断雌激素对ERRα mRNA及蛋白的上调作用。
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XCT-790导致成骨细胞活性下降和骨形成不足的机制
背景:Wnt信号通路在骨细胞的形成、分化和成熟过程中起着重要作用,DKK1、Sost在调节骨量和成骨细胞分化中起负调节作用,是Wnt信号通路的负调节因子.XCT-790是雌激素相关受体α的特异性抑制剂,可调节雌激素信号通路对成骨细胞的功能活动.目的:观察XCT-790对Wnt信号通路抑制因子DKK1、Sost过表达腺病毒载体转染的人成骨肉瘤细胞MG63细胞及其骨形成相关蛋白LRP5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的作用.方法:将MG63细胞分成8组:空白对照组、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组、XCT-790干预空载腺病毒组、XCT-790干预过表达DKK1组、XCT-790干预过表达Sost组、XCT-790干预过表达DKK1+Sost组,根据组别不同分别用上述重组腺病毒转染MG63细胞.应用MTT法检测MG63细胞的活性,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性,流式分析钙离子浓度;Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的表达.结果与结论:①与空白对照组对比,过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组及XCT-790干预空载腺病毒组均可降低细胞活性、碱性磷酸酶活性,提高钙离子浓度;降低低密度脂蛋白相关蛋白5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的表达量,组间比较差异均有显著性意义(P<0.05);②而当XCT-790干预过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组的MG63细胞时,可进一步降低细胞活性、碱性磷酸酶活性,提高钙离子浓度;降低低密度脂蛋白相关蛋白5、骨形态发生蛋白2、骨桥蛋白、骨保护蛋白、结缔组织生长因子的表达量,组间比较差异均有显著性意义(P<0.05);③结果说明,XCT-790直接调节Wnt信号通路的传导,同时也可协同DKK1、Sost共同抑制Wnt信号通路的开放,从而降低成骨细胞活性和骨形成相关蛋白LRP5、骨形态发生蛋白2、骨保护蛋白等的表达量,导致成骨细胞分化、增殖能力减弱和骨形成不足.
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山萘酚通过下调ERRα抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭和迁移
目的:探讨山奈酚(kaempferol)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制.方法:A549细胞培养完成后,CCK-8法检测不同浓度山奈酚对A549细胞增殖的影响,Transwell和划痕实验检测A549细胞侵袭和迁移能力,Western blotting检测EMT相关蛋白的表达,qRT-PCR和Western blotting检测山奈酚对雌激素相关受体α (estrogen related receptor alpha,ERRα)mRNA和蛋白表达的影响.构建ERRα过表达载体pLV-ERRα转染A549细胞后,Tran-swell实验、划痕愈合实验和Western blotting检测A549细胞侵袭、迁移和EMT相关蛋白的表达情况.结果:山奈酚浓度依赖性抑制A549细胞增殖,选择5、10和20 μmol/L山奈酚进行后续实验.经山奈酚处理后,A549细胞侵袭细胞数目显著减少、划痕愈合率显著降低、N-cadherin和Snail-2的表达显著下调,E-cadherin的表达显著上调,ERRα mRNA和蛋白水平显著降低(均P＜0.01).转染pLV-ERRα后,过表达ERRα的A549细胞的侵袭细胞数、划痕愈合率均显著增加,细胞中N-cadherin、Snail-2表达上调,而E-cadherin的表达下调(均P＜0.05或P＜0.01);该细胞再经山奈酚处理后,上述各指标均发生逆转变化(均P＜0.05或P＜0.01).结论:山奈酚通过抑制ERRα降低NSCLC A549细胞侵袭和迁移能力,并抑制其EMT,为肺癌的临床治疗提供了实验依据.
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雌激素相关受体α在骨肉瘤阿霉素耐药中的表达及功能
目的 研究雌激素相关受体α(ERRα)在骨肉瘤患者及阿霉素耐药细胞株中的表达情况及其功能.方法 收集广州中医药大学第一附属医院9例骨肉瘤患者的标本(其中4例为原发,5例为复发)及正常人骨组织标本3例,行免疫组织化学染色,检测ERRα的表达;浓度梯度法建立骨肉瘤U2OS的阿霉素耐药株(ADM-U2OS),并行qRT-PCR、Western blot检测耐药细胞株中ERRα的表达;利用慢病毒感染U2OS亲本细胞后建立U2OSERRα超表达细胞株,检测不同浓度ADM处理后,超表达细胞的死亡率(锥虫蓝拒染实验),分析ERRα表达增高后是否增加骨肉瘤细胞对ADM的耐药性.所有数据用SPSS 17.0统计软件分析.结果 免疫组织化学染色发现ERRα在9例骨肉瘤标本中的表达量比正常骨组织中的表达量明显增高,在复发患者肿瘤组织中的表达量更高;qRT PCR及Western blot检测分别发现ERRα在ADM-U2OS耐药细胞株中的基因及蛋白表达水平均增高;不同浓度ADM处理后,U2OS-ERRα超表达细胞死亡率低,ERRα表达增高能增加骨肉瘤细胞对ADM的耐药.结论 ERRα在骨肉瘤及阿霉素耐药细胞株中的表达量增高;ERRα的高表达能增加骨肉瘤细胞对阿霉素的耐药性;ERRα有可能成为治疗骨肉瘤及克服骨肉瘤阿霉素耐药的新靶标.
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壮骨止痛方对去势雌鼠ERRα基因表达及血清E2水平的影响
目的:从雌激素/雌激素相关受体信号通路探讨壮骨止痛方抗绝经后骨质疏松症的作用机制.方法:将60只雌性SD大鼠建立去卵巢骨质疏松症病理模型,将其随机分为壮骨止痛方高、中、低剂量组,模型组,雌二醇组,每组12只;另将12只雌性SD大鼠只切除卵巢附近等体积的脂肪组织作为假手术组.各组分别采用相对应药物进行灌胃治疗,治疗13周后各组随机选取6只雌鼠提取股骨组织mRNA样本进行PCR反应检测ERRα基因的表达,选取8只雌鼠经腹主动脉采血,凝固后离心分离出血清,应用雌二醇(E2) ELISA试剂盒检测血清E2水平.结果:与假手术组比较,模型组E2浓度及骨组织ERRα基因表达均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,壮骨止痛方高、中剂量组及阳性对照组血清E2浓度及骨组织ERRα基因表达均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),壮骨止痛方低剂量组较模型组升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:壮骨止痛方通过同时提高去势雌鼠血清E2水平和骨组织ERRαmRNA表达来发挥抗绝经后骨质疏松症的作用.
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ERRα对前列腺癌细胞能量代谢转化的影响
目的:探讨孤儿受体ERRα 对前列腺癌细胞能量代谢转化的影响.方法:通过慢病毒介导的FLAG构建ERRα表达稳定上调的LNCaP前列腺癌细胞模型,Western Blotting法检测其表达量,检测常氧和低氧条件下培养的LNCaP和LNCaP-ERRα 细胞相关酶活性(乳酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸激酶)及ADP含量.结果:过表达ERRα 的LNCaP细胞的乳酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸激酶(低氧)活性和ADP的量均明显高于LNCaP细胞(P<0.05).结论:在前列腺癌细胞中上调ERRα 的表达水平能促进其能量代谢转化.
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雌激素相关受体亚型在乳腺癌和前列腺癌中的作用及其机制的研究进展
雌激素相关受体(estrogen-related receptor,ERR)是一类缺乏天然配体的转录因子,属于孤儿核受体家族中的成员.ERR包括雌激素相关受体α(ERRα)、雌激素相关受体β(ERRβ)、雌激素相关受体γ(ERRγ)三个亚型,其受体与乳腺癌和前列腺癌的发生、进展、转移及耐药等过程密切相关,本文对ERRα、ERRβ、ERRγ在乳腺癌和前列腺癌中的作用及其机制作一综述.
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XCT790对缺氧、无血清及高糖诱导骨髓间充质干细胞凋亡的影响
目的:观察雌激素相关受体α (estrogen-related receptor α,ERRα)的特异性反向激动剂XCT790对无血清、缺氧及高糖诱导的C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:MSCs分为正常培养对照组(正常条件下培养)和0、5、10、20 μmol/L XCT790干预组(在3％O2、无血清、25 mmol/L葡萄糖浓度条件下培养),以流式细胞仪Annexin V/7-AAD双染法检测各组在缺氧、缺营养、高葡萄糖条件下的凋亡率;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bax蛋白表达水平,并计算其比值.结果:缺氧、无血清及高糖诱导24h后,5μmol/L XCT790干预组(20.02±0.92)％、10 μmol/L XCT790干预组(26.04±1.24)％、20μmol/LXCT790干预组(50.73±3.55)％的凋亡率明显高于0 μmol/L XCT790干预组(14.34±0.61)％,呈剂量依赖性(P＜0.05).Western blot显示,前凋亡蛋白Bax的表达5μmol/LXCT790干预组(0.132 3±0.033 8)、10 μmol/L XCT790干预组(0.140 8±0.006 8)、20 μmol/L XCT790干预组(0.199 4±0.061 7)较0 μmol/L XCT790组(0.116 4±0.017 2)明显升高,而凋亡蛋白Bcl-2表达5μmol/L XCT790干预组(0.069 7±0.013 2)、10μmol/L XCT790干预组(0.051 2±0.005 6)、20 μmol/L XCT790干预组(0.041 3±0.005 5)较0μmol/L XCT790组(0.092 3±0.021 3)明显降低(P＜0.05).Bcl-2/Bax比值5μmol/L XCT790干预组(0.530 7±0.027 9)、10 μmol/L XCT790干预组(0.397 9±0.004 2)、20μmol/L XCT790干预组(0.234 8±0.032 1)较0μmol/L XCT790组(0.851 7±0.084 4)明显降低,呈剂量依赖性(P＜0.05).结论:缺氧、无血清及高糖诱导下,拮抗ERRα可以使MSCs的凋亡率和Bcl-2/Bax比例明显降低,提示ERRα在细胞耐受凋亡过程中可能发挥重要保护作用.
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沉默ERRα对Bak1、Bcl2腺病毒转染骨细胞的影响研究
目的 研究沉默雌激素相关受体α(estrogen-related receptor alpha,ERRɑ)对沉默Bak1、Bcl2重组腺病毒载体转染的人成骨样细胞MG63的细胞活性以及相关蛋白的影响.方法 构建Bak1、Bcl2腺病毒载体,将shBak1、sh-Bcl2腺病毒载体转染的MG63细胞分成空载病毒组(NC对照组)、沉默Bak1组、沉默Bcl2组、沉默Bak1+Bcl2组四组,再用ERRɑ 干预上述四组细胞,MTT法检测细胞增殖,考马斯亮蓝蛋白定量检测碱性磷酸酶(alkaline phos-phates,ALP)活性,流式法测定钙离子浓度,Western blot法分析骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达.结果 a)与NC对照组比较,(Ad-shERRɑ+Ad-shBak1)组细胞活性、ALP活性、CTGF、OPN、Runx2明显升高(P<0.01),BMP-4(P<0.05)、钙离子浓度、TNF-ɑ 明显降低(P<0.01),(Ad-shERRɑ+Ad-shBcl2)组细胞活性、ALP活性、BMP-4、CT-GF、OPN、Runx2均显著降低(P<0.01),钙离子浓度和TNF-ɑ 明显升高(P<0.01),(Ad-shERRɑ+Ad-shBak1+sh-Bcl2)组的钙离子浓度、BMP-4、CTGF、OPN、Runx2、TNF-ɑ 均降低(P<0.05);b)与(Ad-shERRɑ+Ad-shBak1)组比较,(Ad-shERRɑ+Ad-shBcl2)组与(Ad-shERRɑ+Ad-shBak1+shBcl2)组细胞活性、ALP活性、CTGF、OPN、Runx2明显下降(P<0.01),钙离子浓度明显升高(P<0.05),(Ad-shERRɑ+Ad-shBcl2)组BMP-4、TNF-ɑ 均显著降低(P<0.01),(Ad-shERRɑ+Ad-shBak1+shBcl2)组TNF-ɑ 明显升高(P<0.01);c)与(Ad-shERRɑ+Ad-shBcl2)组比较,(Ad-shERRɑ+Ad-shBak1+shBcl2)组的BMP-4、CTGF、OPN均升高,细胞活性、钙离子浓度 、TNF-ɑ均降低(P<0.01).结论 ERRɑ 沉默可提高Bak1沉默的细胞活性、BMP4、CTGF、OPN、Runx2表达量和降低钙离子浓度、TNF-α表达量;可降低Bcl2沉默的细胞活性、BMP4、CTGF、OPN、Runx2表达量和提高钙离子浓度、TNF-α表达量.
